中醫(yī)證的動物模型研究思路

1、中醫(yī)“證”的動物模型,第一節(jié)中醫(yī)證的動物模型研究思路,中醫(yī)證候動物模型是現(xiàn)代中醫(yī)學研究的基礎，是中醫(yī)動物實驗的核心。 中醫(yī)證的動物模型是中藥新藥有效性評價的工具，可為中藥新藥研制和開發(fā)、中藥藥理研究提供堅實的實驗基礎. 中醫(yī)學術發(fā)展緩慢的一個重要原因就是實驗研究體系不夠完善，缺少自己的科學規(guī)范、指標體系和方法論。中醫(yī)證候動物模型的建立可彌補上述缺陷，有利于促進中醫(yī)藥學的現(xiàn)代化。,理想動物證候模型制備原則,1.癥狀、病理變化與臨床

2、證型相似。臨床同一證型可能有多種不同的病理狀態(tài)；同一證的模型也可有多種原因造成。 模型不僅要與證對應，而且要盡可能與特定的病理對應，病因相似。,理想動物證候模型制備原則,2. 代表方藥治療后可糾正上述證候、病理生理變化。治療效果作為反證以衡量模型是否成功。3. 檢測指標 具有客觀性、敏感性、重現(xiàn)性，可定量或半定量。,迄今制備“證”的模型主要采用的方法：1.按病因、病機理論建立模型： 某些病因、病原可以引起類

3、似于中醫(yī)某種證的病理生理變化。例如由某些致病菌，毒素引起的疾病，發(fā)展到某一階段都會出現(xiàn)中醫(yī)描述的“熱毒”證。包括面赤身熱，口渴便秘或泄瀉，小便短赤，舌紅苔黃，煩躁不安，甚至神昏譫語等。因此可通過向動物體內(nèi)注射致病菌，如傷寒，副傷寒，甲，乙三聯(lián)菌苗，或注射細菌內(nèi)毒素如大腸桿菌內(nèi)毒素，傷寒桿菌內(nèi)毒素等造模。 清熱解毒藥對這一方法產(chǎn)生的病理模型變化具有改善作用。以此方法制備的“熱癥”模型，可用于評價清熱解毒新藥的解熱作用。,再如

4、慢性泄瀉可致脾虛，用大黃等給動物長期服用可制備脾虛模型。 健脾溫中方藥可緩解此脾虛證。,2. 以病擬證：有些疾病發(fā)展到某一階段，某種證的表現(xiàn)比較明顯。◆如甲亢患者常見陰虛火旺，五心煩躁，顴紅，消瘦等陰虛癥狀，故可用甲狀腺激素制備陰虛模型。中藥生地，玄參，麥冬，龜板等給予此模型動物，可改善癥狀。◆另一方面也可用他巴唑制造陽虛模型。,◆貧血患者常表現(xiàn)有血虛，所以用少量多次放血，或用化學藥物損傷動物的骨髓造血功能，制備動物模

5、型，能夠造成動物疲倦少動，消瘦乏力等與血虛相關的一些表現(xiàn)，以及血液紅細胞數(shù)下降等與臨床血虛病人相似的生理生化變化。用當歸補血湯后可改變這些病理生理變化。,3. 直接模擬證的病理變化：如對證的某些病理變化已有所了解，可直接用藥理、化學或物理方法制造這一變化，以形成與該證接近的病理模型。如血瘀證，目前一般認為它主要表現(xiàn)為循環(huán)障礙和血液流變學障礙。因此常用一些方法，人為制造微血流淤滯，血液粘度增高，使微循環(huán)的血流不暢。,病證結合模型研究

6、思路,1. 同病不同證。如不同方法造成的消化性潰瘍病模型對不同的辨證施治方藥反應不同，認為其屬于不同的證候。又如用腎動脈狹窄法形成的高血壓模型屬腎陰虛型；高腎上腺皮質(zhì)激素制備的高血壓模型屬于腎陽虛型。,2.由病致證。如感染性休克在其演變過程中分別發(fā)生了熱厥證、熱厥氣脫證、元氣外脫證。3. 病與證分別發(fā)生，但有時間上的同步性。如在建立脾虛模型基礎上對動物接種腫瘤細胞株而形成脾虛型腫瘤模型。,病證結合模型模擬臨床辨證、辨病相結合的情

7、況，是在同一動物體上同時復制具有相互聯(lián)系的現(xiàn)代醫(yī)學的病及中醫(yī)證候，其實質(zhì)是一類中西醫(yī)結合模型。病證結合模型增加了模型的變量，使研究的復雜性及提供的信息量均大幅度增長。,現(xiàn)有動物證候模型的缺陷,1.模擬的病變與真實疾病病理變化存在差異。2. 與人類疾病及證候的臨床表現(xiàn)不完全相同。3.同一病的證候分型，缺少客觀化、可量化檢測指標。4.部分模型缺乏穩(wěn)定性，病理、癥狀變化可自行緩解。,應用注意,比較成熟、科學合理的中醫(yī)證 (病)動物模

8、型甚少。大部分尚處于探索階段。對一個藥物的藥效需要用幾個模型從不同側面驗證。切忌單憑個別動物實驗指標的測定結果就作絕對的肯定或否定。,第二節(jié),現(xiàn)有幾種證的動物模型研究簡介,一、 陰虛證,造模材料：成年大鼠，200～250 g；小鼠，7～8周齡，左旋甲狀腺素鈉或甲狀腺素。造模方法：成年大鼠以甲狀腺素1-10 mg／kg灌胃，連續(xù)3周；或小鼠以L－甲狀腺素鈉1-20 mg／kg皮下注射，連續(xù)4～5d。原理：甲狀腺功能亢進主要表現(xiàn)為腎

9、陰虛證，通過給實驗動物大劑量使用甲狀腺素，復制出甲狀腺功能亢進性腎陰虛證動物模型。呈現(xiàn)肝、腎組織耗氧量增加等。,陰虛證造模后的指標變化：,動物出現(xiàn)體重減輕，體溫升高，心率加速，躁動不安，飲水量、耗氧量增加，痛閾下降。肝脾核酸合成增加，外周微循環(huán)血管開放數(shù)目增加，血流加速，心肌、腎臟和腦組織β受體數(shù)量均增加；紅細胞、肝、腎組織的Na+，K+-ATP酶活性增高。,益氣養(yǎng)陰瀉火藥對甲亢動物的影響,操作方法：取體重18～28g小鼠，每天以三碘甲

10、狀腺氨酸(T3)，1mg／kg 灌胃，連續(xù)3～5天。益氣養(yǎng)陰瀉火藥復方，制成2g/ml煎劑，于造型同時給予0.6ml／只灌胃。結果，甲亢組肝組織耗氧量較正常組增加，治療組則降低之。,——————————————————————組別 血漿cAMP(pmol/ml) 肝組織耗氧量——————————————————————對照組 71.76±18.94(n=21) 385.04±45.

11、36(n＝17)甲亢組 98.05±27.09(n=23)* 532.10±71.02(n=17)*治療組 80.89±31.11(n=17) 465.03±109.07(n＝15) △* ————————————————————————————— *與對照組比p<0.01 △與甲亢組比p<0.05 肝組織耗氧量：每分鐘毫微克分子氧／

12、100mg肝組織,糖皮質(zhì)激素型陰虛模型建立法,原理: 臨床使用糖皮質(zhì)激素治療時，可發(fā)生欣快、失眠，不安，易激動的副作用，這些癥狀與陰虛類似。動物實驗發(fā)現(xiàn)大劑量醋酸可的松對甲狀腺的作用是先促進后抑制。在用大劑量氫化可的松制作小鼠陽虛造型時，發(fā)現(xiàn)助陽藥對造型早期無效，滋陰藥有一定作用。在造型后期則助陽藥有效，滋陰藥無效。因而顯示氫化可的松造型早期為陰虛表現(xiàn)。,二、陽虛證模型,陽虛則陰盛，陽虛則外寒。因此凡屬陽虛證者，均有寒象。陽虛有腎陽虛

13、、脾陽虛等。由于腎為先天之本，又為氣之根。因此一般陽虛證常涉及腎陽虛。補陽都從補腎入手，補陽藥一般也都是補腎陽的藥物。 腎陽虛的主要表現(xiàn)是全身功能衰退，一般癥狀有神倦，畏寒肢冷，腰膝酸軟，舌質(zhì)淡白，脈沉而弱。因此實驗動物模型大都根據(jù)這些原理設計。 陽虛證的發(fā)生原理，尚未完全闡明。根據(jù)臨床和實驗資料，認為與內(nèi)分泌功能和能量代謝失調(diào)有關。,造模材料：小鼠，雄性，體重25～35 g ，醋酸氫化可的松注射液或可的松、氫化可的松注射液或

14、地塞米松。造模方法：可的松或氫化可的松給小鼠灌服，或肌肉注射15～30mg/kg，每天1次，連續(xù)5～7d; 或給小鼠以醋酸氫化可的松25～62.5 mg/kg肌肉注射，連續(xù)8～10d。,造模原理：大劑量氫化可的松促進動物蛋白質(zhì)、脂肪的大量分解， “陽虛”大鼠血漿ACTH含量晝夜總體水平顯著降低，垂體、腎上腺、生殖腺組織發(fā)生退行性病變，肝、脾重量減輕，RNA和DNA合成減少，細胞免疫和體液免疫功能降低，外周微循環(huán)血管開放數(shù)目減少，血

15、漿cGMP水平增高，cAMP水平相對降低，血漿皮質(zhì)醇水平增高，肝糖原增加。,陽虛證造模后的指標變化：陽虛小鼠模型建成后，小鼠出現(xiàn)的“陽虛”癥狀：厭食，體重減輕、活動減少、反應遲鈍、卷曲拱背、形寒肢冷、耗氧量減少。游泳能力和耐凍能力減低，且死亡率隨造型天數(shù)而增加。,例：腎陽虛模型組：氫化可的松25mg/kg肌內(nèi)注射)；生精膠囊大、中、小劑量組：生精膠囊2.4、1.2、0.6/kg ，口服；同時肌內(nèi)注射氫花可的松25mg/kg；五

16、子衍宗丸組：五子衍宗九1.2g/kg，口服。同時肌內(nèi)注射氫花可的松25mg/kg，每日1次，連續(xù)4次。,,生精膠囊對腎陽虛模型小鼠的影響(X±s；n＝l0),注：與正常對照組比較*P<0.05，**P<0.01；Δ與模型組比較P<0.05，ΔΔP<0.01。,羥基脲型陽虛模型建立法,原理 陽虛動物的虛損表現(xiàn)與核酸代謝，特別是脫氧核糖核酸(DNA)代謝低下有關。抗腫瘤藥羥基脲能抑制核苷酸還原酶，從而抑

17、制DNA合成，影響蛋白質(zhì)代謝，出現(xiàn)一系列虛損癥狀。操作方法 取體重22～28g雄性小鼠。以羥基脲5～15mg／只灌胃。連續(xù)7～15日，可出現(xiàn)陽虛癥狀（以7.5mg較為合適）。,例：,取小鼠以羥基脲7.5mg／只，灌胃造型，治療組以補陽藥(淫羊藿和肉蓯蓉等量制成煎劑，濃度為生藥1g／ml，煎劑0.5ml／只，連續(xù)給藥13日。末次給藥后每只小鼠腹腔注射氚標記的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR)6微居里，1h后取動物肝、脾，測定DNA合成速率

18、。結果：與陽虛組比較，補陽組肝脾DNA合成率較高，體重增加，耐凍時間較長。,補陽藥對陽虛小鼠的影響 (x±s),與對照組比，*P<0.05 ；與對照組比，**P<0.01； △與陽虛組比P<0.01。DNA合成率單位為每分鐘cpm／mg·DNA,肝、脾DNA測定原理,分別取出肝、脾，用冷生理鹽水洗凈，濾紙吸干表面水分，稱重，在冰浴中剪碎，加冷勻漿液（0.15mol/L NaCl, 0.1mol/L

19、EDTA, pH7.5-8.0 ），制備勻漿，以紗布過濾，3500r/min離心15min。取沉淀加入2ml勻漿液，攪勻，放置達室溫，加入純化的十二烷基磺酸鈉(SDS),使其終濃度為1.6％。于三角燒瓶中加玻璃珠振蕩搖勻，再加固體氯化鈉，濃度達1mol/L,振蕩20min, 再加等體積氯仿，劇烈振蕩20min, 3500r/min離心15min。,上層水加入2倍體積無水乙醇，即可見DNA呈膠鏈析出。用玻璃棒卷出此白色纖維狀粗制DNA

20、，以丙酮、乙醚沖洗，干燥后稱重。取4－9mg DNA ，加閃爍液，用液體閃爍計數(shù)儀測定脈沖值，按1mg DNA每1min的脈沖值計算。,甲減型陽虛模型建立法,切除甲狀腺造型法原理 甲狀腺功能減退者(甲減)，體內(nèi)的代謝普遍減慢，基礎代謝率降低，中醫(yī)辨證甲減患者大多具有脾腎陽虛癥狀，以溫腎補陽藥治療，臨床癥狀好轉，基礎代謝率升高，血漿cAMP升高。因此切除甲狀腺造成的“甲減”動物模型，可模擬人類的陽虛證。 操作方法 取體重100～

21、150g大鼠。在乙醚麻醉下切除雙側甲狀腺，造成甲減大鼠模型，手術6～8星期后用于實驗。,三、血瘀證動物模型,1．高分子右旋糖酐靜脈注射造模法造模材料：高分子右旋糖酐又名高分子葡聚糖，平均分子量為20萬～40萬；家兔或新西蘭大白兔。造模方法：高分子右旋糖酐，經(jīng)加熱，使完全溶解于生理鹽水中，配成10％濃度的溶液。用9號針頭經(jīng)耳緣靜脈，以15ml/kg的劑量快速注入10％高分子右旋糖酐，全量應在3min內(nèi)推注完畢。一般在推注到全量1／3左

22、右時，微循環(huán)中即出現(xiàn)以血細胞聚集為主的各種微循環(huán)障礙表現(xiàn)，并可持續(xù)12～24h。,造模原理：,高分子右旋糖酐能被紅細胞吸附，從而在紅細胞間起著橋梁作用，導致紅細胞聚集，血流阻力增加，循環(huán)不暢。造模后的指標變化：除出現(xiàn)口唇紫紺，舌質(zhì)暗紅等血瘀癥狀外，還可見體內(nèi)微循環(huán)血流緩慢、血細胞聚集、微血管周圍有滲出及出血等現(xiàn)象，血黏度升高、紅細胞電泳時間延長等明顯的微循環(huán)障礙特征。,家兔連續(xù)灌胃(ig)給絞股藍總甙或水7d，每天1次。在給藥到第7d

23、，由家兔耳緣靜注10％高分子右旋醣酐生理鹽水10 ml/kg，15min后，由頸總動脈插管放血。川芎嗪組在取血的前1天及當天ip 60 mg/kg川芎嗪，10min后耳緣靜脈注高分子右旋醣酐，15min后動脈取血測血液流變學各指標。各項測定值均以x土s表示，進行組間t測驗,肝氣郁結和寒凝血瘀,原理 寒入經(jīng)脈造成經(jīng)脈攣縮拘急，血液凝澀不能通暢而瘀滯。情緒暴怒時，機體分泌大量腎上腺素，使紅細胞聚集指數(shù)增加，故給予大量腎上腺素可模擬機體暴怒

24、時的變化，并以冰水浸泡模擬寒邪入侵經(jīng)脈的血瘀模型。方法 大鼠，200 ～ 250g 。每次皮下注射0.1%腎上腺素0.2ml/只，每日2次，此間將大鼠放入冰水浸泡1次(5min)，如此處置1 ～ 2天。觀測內(nèi)容 ①凝血時間：縮短；②血液流變學：血液黏度提高、紅細胞電泳時間延長、紅細胞聚集指數(shù)、剛性指數(shù)增加；③血沉加快。,生莪術組、制莪術組和生理鹽水組灌胃給藥5d， 每天給藥1次，每次5ml／只。末次給藥1h后復制血瘀模型，即大鼠注射

25、腎上腺素2次， 并在2次注射之間結合冰水浸泡（5min)，次晨取血檢測。生理鹽水正常組則不復制動物模型，直接于次晨取血。 按文獻檢查全血比粘度、血清比粘度、血漿比粘度和紅細胞(MC)壓積。,莪術炮制前后對大鼠血液流變性的影響（x±s）,,注：與血瘀模型組比 * p<0.05，** p <0.01。,靜脈血栓形成造模法：,原理：靜脈結扎引起血流淤滯，局部血管可因缺血致血管內(nèi)皮損傷，暴露內(nèi)皮下的膠原纖維，從而激活凝血因

26、子XII，啟動內(nèi)源性凝血系統(tǒng)。凝聚的血小板與局部形成的凝血因子致使局部血栓形成，活血化瘀藥物對此有抑制作用。方法：大鼠麻醉（40mg/kg戊巴比妥納）后，仰位固定，沿腹正中線切開皮膚3cm左右，打開腹腔，推開腸子，找到下腔靜脈并分離，于左腎靜脈下方用粗絲線接扎下腔靜脈，縫合腹壁。,觀察內(nèi)容: 2小時后，重新打開腹腔，在結扎下方2cm處用止血夾夾住血管，取注射器將該段血管內(nèi)血液吸盡，然后縱向剪開管腔，觀察有無血栓形成，如有，取出血栓在濾

27、紙上吸干表面的水分、血液，稱取濕重，然后真空干燥或800C左右常壓干燥致恒重（一般干燥24小時即可）稱取血栓干重。比較給藥組和模型組區(qū)別。,鉤藤堿（Rhy）抗靜脈血栓形成的作用,,四、 血虛證動物模型,1．環(huán)磷酰胺造模法造模材料：昆明種小鼠，20～24g，雌雄各半，環(huán)磷酰胺。造模方法：動物腹腔注射環(huán)磷酰胺50～100mg／kg，每天1次，連續(xù)注射2～4d，然后飼養(yǎng)觀察。造模原理：環(huán)磷酰胺破壞骨髓造血細胞增殖能力，所造成的貧血與臨床

28、再生障礙性貧血相似，可作為血虛的動物模型。,造模后的指標變化：黏膜、唇、爪蒼白，活動無力，精神萎靡，毛發(fā)蓬亂。白細胞和血小板明顯減少，造模后動物骨髓有核細胞數(shù)減少，脾臟、胸腺的重量有一定的下降。,黃芪對環(huán)磷酰胺造成小鼠造血功能抑制的影響（均數(shù)±s）與正常組比較＃＃ P<0.01與模型組比較** P<0.01,輻射損傷法－60Co-γ 3.5～4.0Gy黃芪對輻射造成的小鼠造血功能抑制的影響（x±s

29、）與模型組比較** P<0.01,上述化學法（環(huán)磷酰胺）、物理法（如60Co 6Gy γ—射線照射）各有優(yōu)缺點，如：單純采用環(huán)磷酰胺造模發(fā)現(xiàn)外周血白細胞數(shù)量下降顯著，而紅細胞數(shù)量下降緩慢且不顯著；單純采用放射線造模劑量不易控制，易致小鼠死亡。所以很多人采用復合模型 。脾結節(jié)：射線損傷骨髓造血干細胞后，少量造血干細胞可在脾臟增殖分化，射線照射9~11天，取小鼠脾臟，以苦味酸－甲醛固定一天后測定脾臟表面小結，即為內(nèi)源性脾集落數(shù)。,

30、失血性血虛造型法,原理： 人工造成動物失血，使血液中紅細胞(RBC)減少，血紅蛋白(Hb)降低。操作方法： 取體重20g左右雄性小鼠，以75％乙醇棉球擦拭尾部，使血管擴張充血，剪去鼠尾尖端(0.25～0.3cm)，立即采血測定Hb及計數(shù)RBC，然后將鼠尾傷口浸入37℃左右溫水中，使小鼠失去血液約0.5ml,于失血后24h再次放血0.5ml ， 48h后再在小鼠尾端采血測定Hb、RBC值。如Hb、RBC值均顯著低于正常值則可，否則再

31、次放血。檢測指標 RBC計數(shù),Hb濃度.,溶血性血虛造型法 原理： 乙酰苯肼(acetylphenylhydrazine，APH)是一種強氧化劑，通過干擾還原型谷胱甘肽的生成而使紅細胞膜的穩(wěn)定性遭到破壞，導致溶血性貧血。據(jù)此，有人用乙酰苯肼制造大鼠血虛模型。操作方法： 取體重180～250g雄性大鼠，于第1，第4、第7日皮下注射2％APH生理鹽水溶液，第1次劑量為10ml／1kg，第2、3次劑量減半。第9～14天可出現(xiàn)溶血

32、性貧血。,黃芪對溶血性貧血小鼠血象的影響（均數(shù)±s）與模型組比較*P<0.05,** P<0.01,五、脾虛證動物模型,脾為后天之本，其生理功能按現(xiàn)代醫(yī)學觀點來看，包括消化、吸收、轉運、代謝、營養(yǎng)等多方面功能。 脾虛是脾功能不足，包括脾不健運、脾虛下陷、脾不統(tǒng)血、思慮傷脾等不同表現(xiàn)，出現(xiàn)消化不良、泄瀉、臟器下垂、水腫、出血、抵抗力下降等各種功能障礙，中醫(yī)常用益氣健脾方藥治療。,大黃型脾虛造型法,原理 大黃苦寒

33、，又致瀉，連續(xù)服用能傷脾胃以致脾虛，用于動物造型，可使動物出現(xiàn)納呆、消瘦、體重下降、泄瀉、四肢無力、體溫偏低、甚至中氣下陷脫肛。按中醫(yī)理論陽虛則外寒，故本模型屬脾陽虛型。,操作方法: 取體重18～20g小鼠，以100％大黃水煎液0.8ml／只灌胃，連續(xù)1~2星期；或用大鼠每次灌胃200％大黃水浸煎劑2.0～2.5ml ／只，每日2次，連續(xù)2~3星期，或用大鼠每次灌胃15％大黃粉懸液3～5 ml ／只，每日2次，連續(xù)14日。均可出現(xiàn)上述

34、脾虛癥狀。,檢測指標:一般體征：有溏便、消瘦、少動、四肢無力、脫肛、毛發(fā)枯澀、畏寒、耐寒力低等 。消化功能：D-木糖吸收率明顯降低，血清淀粉酶活性下降，胃液量減少。免疫功能：胸腺萎縮，體液及細胞免疫功能下降。,右旋木糖吸收試驗,原理: 木糖是五碳糖，口服后可直接在小腸吸收，不需消化酶參與。吸收后在體內(nèi)不被肝臟代謝，經(jīng)腎排出。因此，如以定量木糖口服，在規(guī)定時間內(nèi)測定血或尿內(nèi)木糖量，即可了解小腸的吸收功能。木糖在酸性溶液中加熱后形成

35、麩醛，后者可同二羥基甲苯作用呈綠色反應。,淀粉酶活性測定法 比色法測定淀粉酶原理： 淀粉酶能促進多糖分子中α-1，4-葡萄糖苷鍵水解。用已知濃度的可溶性淀粉為基質(zhì)，經(jīng)酶水解后，使剩余的淀粉與碘作用生成藍色。酶活力愈低，剩余淀粉愈多，藍色愈深。,操作方法： 取50ml刻度試管2只，一只作對照管，另一只為測定管。兩管內(nèi)各加0.04％可溶性淀粉溶液5ml。將試管置37℃水浴內(nèi)預溫2～5min后分別加入待測標本(血清、尿液或消化液

36、)或對照液0.1ml，混勻，再置37℃水浴內(nèi)7.5min后取出。 于對照管、測定管內(nèi)各加入0.01mol／L碘應用液5ml，并用蒸餾水稀釋至50ml刻度。立即混勻，660nm進行比色。以蒸餾水校正光密度到零點，讀取各管光密度值。,在37℃ 30min內(nèi)，100ml血清中淀粉酶能完全水解淀粉10ml時稱為1個淀粉單位。 計算方法如下：淀粉酶單位／100ml =[(對照管光密度—測定管光密度)/對照管光密度 ] ×500,

37、利血平型脾虛模型法,原理： 慢性給予小劑量利血平，使小鼠體內(nèi)單胺類介質(zhì)耗竭。出現(xiàn)交感神經(jīng)功能偏低，副交感功能偏高，體溫下降，體重下降，腸運動增加，及泄瀉等類似脾虛癥狀。操作方法： 取體重20～25g小鼠。以利血平0.1mg／kg皮下注射，連續(xù)14日，即形成利血平化脾虛型小鼠。,檢測指標：一般體征：有溏便、納呆、消瘦、少動、四肢無力、脫肛、毛發(fā)枯澀、畏寒、耐寒力低等 。免疫功能：胸腺萎縮，體液及細胞免疫功能下降。,六、熱毒證動

38、物模型,發(fā)熱是實熱證的重要體征之一。許多清熱方、藥都有明顯解熱作用，如白虎湯、黃連解毒湯、銀翹散、大青葉、板藍根、玄參、竹葉，知母、石膏等都有明顯解熱作用。解熱試驗是研究清熱解毒的常用指標。,動物選擇 實驗前需挑選健康的、體溫合格的動物。以家兔最為常用，發(fā)熱反應較靈敏而穩(wěn)定。小鼠、豚鼠則因恒溫機能差，對發(fā)熱刺激反應性低，不宜用于造型。,致熱原： 人工發(fā)熱常用的致熱原有如下幾種： ①傷寒、副傷寒菌苗：給家兔靜脈注射傷

39、寒、副傷寒甲，乙三聯(lián)菌苗0.5～2.0 ml／kg，經(jīng)0.5～1h后體溫上升1 ～ 1.5℃，持續(xù)3～4h，5h后逐漸降低，至8h后恢復正常。 ②大腸桿菌菌液：用生理鹽水調(diào)制成0.5ml中含106～107個大腸桿菌的濃度，給大鼠靜脈注射。3.5～4h后發(fā)熱反應可達高峰，體溫上升1.7 ～ 2.0℃。,③內(nèi)毒素致熱: 一般用大腸桿菌或傷寒桿菌內(nèi)毒素，給家兔5ug／kg左右靜脈注射。 引起動物人工發(fā)熱所需致熱原的劑量同

40、各種致熱原的致熱效價以及每批實驗動物的耐受力都有關。因此，同一種致熱原在不同時間、條件，在不同批的動物使用時可能所需劑量很不一致。為此，在做這一實驗前，每次都必須通過預試重新確定致熱原的劑量。,其他：啤酒酵母混懸液。用0.5％甲基纖維素或生理鹽水分別制成10％、7％、5％、1％啤酒酵母混懸液，按3~l0ml／kg給體重150～200g的大鼠背部皮下注射， 3h后體溫上升，6h可達高峰。體溫升高1.2~2.2℃?；瘜W刺激法: 二硝

41、基苯酚: 給家兔或大鼠背部皮下注射2，4-二硝基苯酚25～30mg／kg，15～20min開始發(fā)熱，1～1.5h達高峰，升高2~3℃。 松節(jié)油致熱:于兔背部皮下注射松節(jié)油0.4ml／kg，18～20h后開始發(fā)熱，次日達高峰，最高可升高1.5～2℃，持續(xù)2天。,大耳家兔34只，隨機分為4組，在室溫18℃環(huán)境進行實驗。耳靜脈注射五聯(lián)疫苗2ml／kg體重，造成高熱病理模型。分別給葛根芩連湯(劑量為5g／kg體重，相當于人的等效量)、復方