淡水養(yǎng)殖環(huán)境中微生物耐藥性及典型抗性基因污染研究.pdf

1、由于代謝不完全，用于人類醫(yī)療、畜牧養(yǎng)殖業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的抗生素以原形或代謝產(chǎn)物形式經(jīng)由人體和動物排泄物進入環(huán)境，持續(xù)性的抗生素輸入對受納土壤和水體造成了不同程度的污染，刺激環(huán)境中耐藥細菌（Antibiotic Resistance Bacteria，ARB）表現(xiàn)出更強的耐藥性。近年來新型污染物抗生素抗性基因（Antibiotic Resistance Genes， ARGs）已經(jīng)在污水處理系統(tǒng)、養(yǎng)殖業(yè)、河流等環(huán)境中被頻繁檢出，環(huán)境中抗性基

2、因的大量存在可能對人類健康和環(huán)境生態(tài)造成威脅。受水體流動影響，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素殘留引起的細菌多重耐藥性及抗生素抗性基因等一系列環(huán)境問題可能對周邊水體及環(huán)境造成直接污染。因此，開展和研究淡水養(yǎng)殖環(huán)境中細菌耐藥性和抗生素抗性基因的分布和流行情況十分必要，并且可以為進一步的新型污染物的控制和風(fēng)險評估提供數(shù)據(jù)上的支持。
　　本研究以珠江三角洲某典型的淡水水產(chǎn)品養(yǎng)殖場（廣東省中山市）中的魚塘、鴨塘和魚鴨混養(yǎng)塘為研究對象，采用抗生素篩選、最

3、小抑菌濃度檢測以及16S rRNA擴增測序技術(shù)對復(fù)合養(yǎng)殖環(huán)境（魚鴨混合養(yǎng)殖塘）水體中的耐藥菌進行多重耐藥性分析和鑒定，通過實時熒光定量QPCR技術(shù)檢測三種養(yǎng)殖塘中抗生素抗性基因的豐度及多樣性，在比較單一養(yǎng)殖和復(fù)合養(yǎng)殖的過程中探討抗生素抗性基因在淡水養(yǎng)殖環(huán)境中的分布規(guī)律和傳播途徑。
　　本論文主要結(jié)論如下：（1）復(fù)合養(yǎng)殖塘水體中共分離出的6株對頭孢、四環(huán)素和磺胺同時表現(xiàn)出耐藥性的多重耐藥菌（Multiple Antibiotic R

4、esistance Bacteria，MARB）普遍含有多種類型的抗生素抗性基因，且其中三株為常見人類致病病原菌志賀氏菌屬（Shigella，通稱痢疾桿菌）；（2）其中一株多重耐藥菌株（Shigella flexneri strain）對頭孢、四環(huán)素和磺胺最小抑菌濃度分別高達128μg/mL、512μg/mL和4096μg/mL；（3）所有養(yǎng)殖塘中第一類整合子基因（intI1）和17種抗生素抗性基因均被檢出，分別是：四環(huán)素類抗性基因（t

5、etA、tetB、tetC、tetE、tetG、tetL、tetA-P、tetM、tetO、tetS、tetW和tetX）、氨芐β-內(nèi)酰胺酶類抗性基因（EBC和FOX）、磺胺類抗性基因（sul1和 sul2）和紅霉素類抗性基因（ermA）；（4）養(yǎng)殖塘水體中抗生素抗性基因總量約為對照組的1.6~4倍，復(fù)合養(yǎng)殖塘抗性基因總絕對豐度在水體和沉積物中分別為3.686×107 copies/mL和4.574×108 copies/g，單一養(yǎng)殖塘