基于重組基因酵母的環(huán)境雌激素測(cè)定的影響因子和質(zhì)量控制.pdf

1、環(huán)境雌激素因能干擾人體內(nèi)分泌系統(tǒng)而備受關(guān)注。本文針對(duì)水體環(huán)境雌激素管理的需求，比選出較適合實(shí)際水體應(yīng)用且結(jié)果與人體健康相關(guān)度更大的測(cè)試方法----基于重組基因酵母的環(huán)境雌激素效應(yīng)分析方法。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了測(cè)試條件，考察了水樣特性對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，并加入合適的質(zhì)量控制手段，以提高測(cè)試結(jié)果的可靠性，使之真正適應(yīng)復(fù)雜水體的環(huán)境雌激素測(cè)試工作。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴重組基因酵母的復(fù)蘇與增殖可采用SD/-Trp/-Leu營(yíng)養(yǎng)

2、缺陷型培養(yǎng)基，30℃振蕩培養(yǎng)，可在培養(yǎng)66 h后進(jìn)行樣品暴露；暴露環(huán)節(jié)可將樣品與酵母混合液在20~35℃水浴條件下培養(yǎng)3~6 h；之后，使用有機(jī)溶劑處理法釋放β-半乳糖苷酶，35℃水浴條件下反應(yīng)60 min，0.5h后在420nm處比色分析；對(duì)于實(shí)際樣品的分析，需要加測(cè)不少于一個(gè)的稀釋水樣效應(yīng)值。⑵水樣溶解氧、色度和濁度對(duì)測(cè)定結(jié)果影響也較?。黄渌匦?，如微生物、pH以及水體中的一些毒性物質(zhì)，由于可能會(huì)影響酵母的生長(zhǎng)或基因表達(dá)，所以對(duì)分析

3、結(jié)果可能造成一定影響，需要進(jìn)行一定的處理。⑶建立質(zhì)控措施，可以消除數(shù)據(jù)的異常變異?？梢圆迦雽?duì)重組基因酵母活性的檢驗(yàn)過(guò)程，以避免假陰性結(jié)果；當(dāng)樣品中環(huán)境雌激素效應(yīng)濃度介于0.025 nmol/L~0.25 nmol/L（以E2計(jì)）時(shí)，歸一化后的的相對(duì)效應(yīng)與環(huán)境激素濃度呈線(xiàn)性正相關(guān)，其線(xiàn)性斜率應(yīng)該控制在4.76±1.35；此外，其中，空白建議控制在0.030±0.015之間；以0.10 nmol/L E2作為陽(yáng)性對(duì)照的相對(duì)效應(yīng)值控制在49％