凝溶膠蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞的影響【開題報(bào)告】

1、<p><b>　　畢業(yè)論文開題報(bào)告</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　凝溶膠蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞的影響</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><p>　　真核細(xì)胞的細(xì)胞骨架由微管、微絲和中間纖維構(gòu)成。肌動(dòng)蛋白(actin)是微絲的主要構(gòu)

2、成成分。微絲參與細(xì)胞形態(tài)和極性的維持、內(nèi)吞作用、胞內(nèi)運(yùn)輸、細(xì)胞收縮及運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分裂等眾多功能。而肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(actin binding proteins，ABPs)則在肌動(dòng)蛋白纖絲聚合及解聚的動(dòng)態(tài)變化中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。紐蟲的體壁肌肉中含有大量的肌動(dòng)蛋白和凝溶膠蛋白。凝溶膠蛋白(gelsolin)則是一種重要的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，最早于1979 年由Yin和Stossel在兔肺巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，證實(shí)其能以鈣依賴的方式調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白的重

3、組，促使細(xì)胞質(zhì)gel-sol的相互轉(zhuǎn)換。Gelsolin通過對(duì)微絲的剪切、封端和成核作用，來實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞微絲骨架的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)，推測(cè)過表達(dá)的gelsolin可以通過調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)來影響軸突的起始、發(fā)生、伸長和樹突的形成，從而增加神經(jīng)元的長度，加快神經(jīng)元的生長，從而促進(jìn)外傷、截肢等患者的離斷神經(jīng)的修復(fù)。</p><p>　　另外，推測(cè)gelsolin對(duì)肌肉的收縮和肌原纖維的裝配起重要作用。成肌纖維細(xì)胞(myo

4、fibroblast)是傷口愈合和各種組織纖維化中起主要作用的細(xì)胞，成肌纖維細(xì)胞不能及時(shí)從病變處退出，使細(xì)胞外基質(zhì)持續(xù)過量分泌，并發(fā)生重塑是組織纖維化的主要特征。Actin作為肌肉細(xì)胞的一個(gè)重要的收縮蛋白，也是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要成分，其表達(dá)量的多少能直接反應(yīng)成肌纖維細(xì)胞的分化、增值及凋亡情況，而gelsolin又在肌動(dòng)蛋白纖絲聚合及解聚的動(dòng)態(tài)變化中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，因此研究gelsolin對(duì)成肌纖維細(xì)胞的功能性作用具有重要的理論意義，

5、通過分子生物學(xué)技術(shù)阻斷其分化、增殖的信號(hào)通路及基因轉(zhuǎn)錄，通過藥物或重組蛋白促進(jìn)成肌纖維細(xì)胞的凋亡，抑制其分化和增殖，促其恢復(fù)轉(zhuǎn)化前細(xì)胞表型，從而阻斷纖維化進(jìn)程，根治組織纖維化疾病。</p><p>　　無序生長和高遷移能力是轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞的重要特征，而這兩個(gè)過程都涉及到細(xì)胞肌動(dòng)蛋白骨架的解聚與重排，而gelsolin作為胞質(zhì)內(nèi)重要的actin調(diào)節(jié)蛋白也與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。已報(bào)道gelsolin在人類多

6、種惡性腫瘤中表達(dá)明顯降低，其表達(dá)水平與腫瘤大小、侵襲性生長等密切相關(guān)，如在人膀胱癌中，gelsolin在6個(gè)膀胱癌細(xì)胞系和77.8%的膀胱癌組織中表達(dá)缺失和明顯降低。在乳腺癌中，gelsolin在乳腺癌細(xì)胞系中缺失或明顯低于正常人乳腺上皮細(xì)胞和良性永生化細(xì)胞的表達(dá)水平。人們對(duì)gelsolin在腫瘤中表達(dá)明顯降低的現(xiàn)象進(jìn)一步進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)將外源gelsolin cDNA全長轉(zhuǎn)入癌細(xì)胞系過表達(dá)后，可抑制腫瘤細(xì)胞的生長，降低腫瘤細(xì)胞的集

7、落形成能力和裸鼠致瘤性。這些實(shí)驗(yàn)證據(jù)提示gelsolin具有明顯的腫瘤抑制作用。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p>　　1、胃癌細(xì)胞的培養(yǎng)。</p><p>　　2、重組凝溶膠蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、Ni柱純化和冷凍干燥。</p><p>　　3、凝溶膠蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞功能性作用和作用的機(jī)制的研究，包括：<

8、;/p><p>　　凝溶膠蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞形態(tài)變化的影響</p><p>　　對(duì)細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)情況的影響</p><p>　　對(duì)胃癌細(xì)胞有絲分裂情況的影響。</p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p>　　四、總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2010.10-2010.11：查閱

9、文獻(xiàn)，了解實(shí)驗(yàn)總體步驟與方法。</p><p>　　2010.11-2010.12：重組凝溶膠蛋白的制備；以及胃癌細(xì)胞的培養(yǎng)。</p><p>　　2010.12-2011.03：凝溶膠蛋白對(duì)胃癌細(xì)胞的影響。</p><p>　　2011.03-2011.05：對(duì)整個(gè)試驗(yàn)的補(bǔ)充、完善階段，論文的撰寫。</p><p><b>　　五

10、、主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　1 韓曉曦，王繼紅，李慶偉. 凝溶膠蛋白的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 中國生物化學(xué)與分子生物化學(xué)報(bào)，2007，23（5）：331~337.</p><p>　　2 王旭濤，張新超. 凝溶膠蛋白和危重病[J]. Chinese General Practice，2009，12（11）：2088~2091.</p><p&g

11、t;　　3 倪曉光. 凝溶膠蛋白的結(jié)構(gòu)和功能及其抑制腫瘤的作用[J]. 實(shí)用癌癥雜志，2007，22(1) :105-107.</p><p>　　4 汪勇沛，詹永樂. 日本血吸蟲凝溶膠蛋白基因在蟲體不同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄水平分析. 上海畜牧獸醫(yī)通訊，2010，1: 48-49.</p><p>　　5 潘有福，王新宇，張大偉，等. 煙草花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂前期Ⅰ肌動(dòng)蛋白的免疫細(xì)胞化學(xué)定位[J]

12、. 實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào)，2000，33(3): 273-281.</p><p>　　6 孟憲敏，曹慧青，王震等.Nelin的肌動(dòng)蛋白結(jié)合特性及與其相互作用蛋白質(zhì)的篩選[J]. 科學(xué)通報(bào)，2004，49（21）：2173~2177.</p><p>　　7 江奇峰，蔡紹皙，晏小清，等. 鈣調(diào)蛋白結(jié)合蛋白及其磷酸化對(duì)癌細(xì)胞遷移能力的影響研究[J]. 生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2010，37(3):3

13、26-336.</p><p>　　8 徐國恒. 細(xì)胞骨架——肌動(dòng)蛋白纖維[J]. 生物學(xué)通報(bào)，2005，40(2): 43.</p><p>　　9 倪曉光. 凝溶膠蛋白的結(jié)構(gòu)和功能及其抑制腫瘤的作用[J]. 實(shí)用癌癥雜志，2007，22(1) :105-107.</p><p>　　10 高緒霞，黃海長，李曉玫. 成肌纖維細(xì)胞在纖維化過程中的作用及其調(diào)控[J].

14、 生理科學(xué)進(jìn)展，2007，38(1): 78-80.</p><p>　　11 胡永斌，曾慶富，彭勁武，等. 二氧化硅影響人肺成纖維細(xì)胞α-平滑肌肌動(dòng)蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志，2006，24(9): 523-525.</p><p>　　12 Lee WM，Galbraith RM. The extracellular actin-scavenger system

15、 and actin toxicity[J]. N Engl J Med，1992，326：1335~1341.</p><p>　　13 Yin HL，Stossel TP. Control of cytoplasmic actin gel-sol transformation by gelsolin，a calcium-dependent regulatory protein[J]. Nature，1979，

16、281：583~586.</p><p>　　14 Snabes MC，Boyd AE，Bryan J. Detection of actin-binding proteins in human platelets by 125I-actin overlay of polyacrylamide gels[J]. J Cell Bilo，1981，90（3）：809~812.</p><p>

17、;　　15 Harris HE，Bamburg JR，Weeds AG. Actin filament disassembly in blood plasma[J]. FEBS Lett，1980，121（1）：175~177.</p><p>　　16 Mcgough AM，Staiger CJ，Min JK， et al. The gelsolin family of actin regulatory pro

18、teins：modular structures，versatile functions[J]，F(xiàn)EBS Lett，2003，552（2-3）：75~81.</p><p>　　17 Silacci P，Mazzolai L，Gauci C，et al. Gelsolin superfamily proteins:key regulators of cellular functions[J]. Cell Mol

19、Life Sci，2004，61(19-20):2614~2623.</p><p>　　18 Cunningham C C, Stossel T P, Kwiatkowski D J. Enhanced motility in NIH3T3 fibroblasts that overexpress gelsolin[J]. Science, 1991, 251 (4998) : 1233-1236.</p

20、><p>　　19 Chellaiah M, Kizer N, Silva M, et al. Gelsolin deficiency blocks podosome assembly and produces increased bone mass and strength[J]. Journal of Cell Biology, 2000, 148 (4) : 665-678.</p><p&

21、gt;　　20 Ferjani I, Fattoum A, Maciver S K, et al. A direct interaction with calponin inhibits the actin nucleating activity of gelsolin[J]. Biochem Journal , 2006, 396 (3) : 461-468.</p><p>　　21 Tanaka M, Mu

22、llauer L, OgisoY, et al. Gelsolin: acandidatefor suppressor of human bladder cancer[J]. Ca- ncerRes, 1995, 55(15) :3228.</p><p>　　22 Philchenkov A A. Caspases as regulators of apoptosis and other cell functi

23、ons[J]. Biochemistry(Mosc)，2003，68(4):365~376.</p><p>　　23 Mejillano M , Yamamoto M , Rozelle A L, et al . Regulation of apoptosis by phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate inhibition of caspases,and caspase

24、inactivation of phosphatidylinositol phosphate5-kinases[J].J Biol Chem,2001, 276 (3):1865~1872.</p><p>　　24 Qiao H, Koya R C, Nakagawa K, et al .Inhibition of Alzheimer’s amyloid-beta peptide-induced reduct

25、ion of mitochondrial membrane potential and neurotoxicity by gelsolin[J]. Neurobiol Aging,2005, 26 (6):849~855.</p><p>　　25 Yukio Ohtsuka, Hiroki Nakae, Hiroshi Abe, et al . Functional characteristic and the