土壤環(huán)境弓形蟲與細(xì)菌污染的檢測與修復(fù).pdf

1、土壤生物污染是指一個或幾個有害的生物種群從外界環(huán)境侵入土壤，引起土壤質(zhì)量下降，不僅破壞了原有的生態(tài)平衡，還會對植物、動物、人類健康以及生態(tài)系統(tǒng)造成不良的影響。近年來，隨著人感染禽流感、SARS、豬鏈球菌病、豬流感等突如其來的疫病災(zāi)害的發(fā)生，以及人民生活水平的不斷提高和環(huán)境保護(hù)意識的逐漸增強(qiáng)，土壤環(huán)境的生物污染問題越來越受到大家的關(guān)注。
　　 為此本研究選取弓形蟲和糞便污染指示菌為代表，首先建立其檢測方法，然后對土壤的污染情況進(jìn)行

2、調(diào)查，緊接著針對豬場土壤環(huán)境中大腸桿菌的污染情況，通過土壤載體試驗、盆栽試驗、現(xiàn)場模擬試驗從化學(xué)消毒劑、生物消毒劑、復(fù)合型消毒劑中篩選幾種可行的消毒劑，并從戊二醛對土壤微生態(tài)環(huán)境的影響和殘留兩個方面進(jìn)行了戊二醛對土壤的安全性評價。
　　 (1)土壤環(huán)境中弓形蟲卵囊檢測方法的建立和應(yīng)用
　　 建立了土壤環(huán)境中弓形蟲卵囊的PCR/B1、PCR/529和LAMP/MIC3檢測方法，檢測極限分別為50、5和5個速殖子/0.5 g

3、土壤，特異性試驗說明僅弓形蟲RH株和Prugniaud株能擴(kuò)增得到特異性目的條帶。PCR/B1和PCR/529擴(kuò)增均為陽性的樣品判定為PCR陽性。用PCR和LAMP方法分別檢測來自公園、豬場和校園的483份土壤樣品，結(jié)果表明，兩種方法分別得到81(16.77%)份和133(27.54%)份陽性樣品，其中豬場土壤的污染最為嚴(yán)重。
　　 武漢市6個公園的檢測結(jié)果表明，所有的公園都受到了不同程度的污染(P>0.05)。在12個被調(diào)查的

4、豬場中，僅1個貓低密度豬場的土壤未受到污染，PCR和LAMP檢測結(jié)果顯示貓高密度豬場土壤陽性率分別為低密度豬場的2.24和2.21倍，表明貓的數(shù)量與土壤的污染情況呈正相關(guān)。公園和校園土壤污染的季節(jié)性分析顯示，土壤全年受到弓形蟲卵囊的污染，各季節(jié)之間差異極顯著(P<0.01)，且從春天到冬天呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢。因此，土壤可能是人和動物感染弓形蟲的傳染源之一。另外，建立的PCR和LAMP方法能有效檢測土壤中弓形蟲卵囊。
　　 (2)

5、豬場土壤環(huán)境細(xì)菌性污染的調(diào)查
　　 以細(xì)菌總數(shù)和糞便污染指示菌(大腸桿菌、大腸菌群)為指標(biāo)，采集湖北省17個規(guī)模化豬場共86份土壤樣品進(jìn)行檢測與計數(shù)，并評價了土壤的污染程度。采用的方法分別為：細(xì)菌總數(shù)-涂布牛肉膏蛋白胨平板培養(yǎng)；大腸桿菌-PCR方法和涂布麥康凱平板培養(yǎng)；大腸菌群-MPN法。結(jié)果顯示，PCR方法檢測所有土樣均為大腸桿菌陽性，土壤中細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌和大腸菌群分別為4.5×104～6.9×107 cfu/g、0～1.

6、2×106 cfu/g、1.2×104～5.3×107 cfu/g。根據(jù)細(xì)菌總數(shù)判定有72.09%的土壤污染嚴(yán)重。根據(jù)大腸桿菌判定有41.86%的土壤被糞便污染嚴(yán)重，大腸菌群已超出我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的10～10，000倍，表明土壤中有腸道致病菌存在且已嚴(yán)重超標(biāo)。秋季土壤大腸桿菌污染最為嚴(yán)重，其次是春天、冬天和夏天。
　　 (3)土壤中大腸桿菌消毒劑的篩選
　　 本研究選取依綠笑(二氧化氯)、安必殺(有效碘)

7、、戊二醛、申嗪霉素(M18)、天然凈等五種消毒劑對土壤中大腸桿菌進(jìn)行消毒效果評價，從而篩選最佳消毒劑。大腸桿菌稀釋液的篩選試驗結(jié)果表明，0.1% Tween80/PBS的分散性最好。化學(xué)消毒劑的中和劑鑒定試驗表明，0.5% Na2S2O3+1% Tween80可有效中和200 mg/L的二氧化氯，0.5% Na2S2O3+1%卵磷脂+1% Tween80可有效中和2000 mg/L的有效碘，1%甘氨酸+1%卵磷脂+1% Tween80可

8、有效中和2%的戊二醛。
　　 土壤載體試驗結(jié)果表明：2000 mg/L有效碘作用30 min，200 mg/L二氧化氯作用2 min或100 mg/L作用1h，0.05%戊二醛作用15 min或0.01%作用30 min，100 mg天然凈添加于5g土壤中作用48 h可完全殺滅土壤中大腸桿菌。但申嗪霉素對土壤中大腸桿菌和細(xì)菌總數(shù)均無影響?，F(xiàn)場模擬試驗結(jié)果表明：400 mg/L二氧化氯作用24 h或600 mg/L二氧化氯作用12

9、 h，0.1%戊二醛作用12 h可殺滅土壤中95%以上的大腸桿菌。
　　 (4)戊二醛處理對土壤的安全性評價
　　 戊二醛處理后，通過對土壤中可培養(yǎng)微生物進(jìn)行平板計數(shù)，發(fā)現(xiàn)戊二醛對土壤中大腸桿菌作用明顯，高濃度對細(xì)菌、真菌影響較小，但對放線菌影響較大，中、低濃度對細(xì)菌、真菌、放線菌的沖擊小，且都能在一段時間內(nèi)恢復(fù)正常水平。Biolog的結(jié)果顯示，低濃度的戊二醛處理有輕微提高微生物活性的作用，中、高濃度處理則有抑制作用，但

10、經(jīng)過一段時間后微生物活性均能恢復(fù)正常?？偠灾?，雖然戊二醛處理對土壤中微生物對單一碳源的利用能力產(chǎn)生了影響，但各處理間無明顯差異。另外，建立了土壤中戊二醛的高效液相色譜檢測方法，戊二醛采用2，4-二硝基苯肼柱前衍生后檢測，戊二醛在土壤中的最低檢測限和最低定量限分別為0.01 mg/kg和0.02 mg/kg。土壤中戊二醛的消解測定結(jié)果表明，在第1d可消除70%及以上，第2d可消除97%以上?？傊?，戊二醛對土壤微生態(tài)環(huán)境的影響比較柔和，且