快速顯色法篩選白蘞醇提物抗菌活性[畢業(yè)設計]

1、<p>　　本科畢業(yè)設計(論文)</p><p><b>　?。ǘ?屆）</b></p><p>　　快速顯色法篩選白蘞醇提物抗菌活性</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級 生物工程 <

2、;/p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　快速顯色法篩選白蘞醇提物抗菌活性</p><p>　　

3、摘 要 常規(guī)抗菌檢測方法其周期長，操作復雜，給生產帶來諸多不便。探尋一種新的快速的抗菌檢測方法迫在眉睫。本實驗用MTT作為指示劑，用于快速檢測白蘞的正丁醇提取物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抗菌活性，最終通過測吸光度獲得定量的抗菌數(shù)值。</p><p>　　經(jīng)過MTT法測定白蘞正丁醇提取物的抗菌活性，證明白蘞正丁醇提取物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌都具有一定的抗菌活性。其中白蘞正丁醇提取物濃度為50mg/ml時對大腸

4、桿菌中度敏感，濃度為25mg/ml時不敏感。提取物對于金黃色葡萄球菌濃度為25mg/ml時中度敏感6.25mg/ml時不敏感。</p><p>　　關鍵詞： 白蘞；抗菌；MTT </p><p>　　Rapid Screening of Ampelopsis antibacterial activity of ethanol extract </p><p>　　A

5、bstract Conventional anti-bacterial detection methods the cycle is long, complicated to operate, causing much inconvenience to the production..Explore a new method for rapid detection of antimicrobial imminent. MTT as a

6、n indicator of the experiment for the rapid detection of Ampelopsis the butanol extract of Escherichia coli and Staphylococcus aureus antibacterial activity, and ultimately obtained by measuring the absorbance value of q

7、uantitative antimicrobial.</p><p>　　After MTT method Ampelopsis butanol extract of antimicrobial activity, proved Ampelopsis butanol extract on Escherichia coli, Staphylococcus aureus has some antibacterial

8、activity. Which Ampelopsis butanol extract of E. coli when the concentration of 50mg/ml moderately sensitive, not sensitive when the concentration of 25mg/ml. Extracts for S. aureus when the concentration of 25mg/ml medi

9、um is not sensitive to the time sensitive 6.25mg/ml.</p><p>　　Keywords：Ampelopsis;Antibacterial;MTT </p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　摘要 …………………………………………………………………………………………

10、………………………………………………（Ⅰ）</p><p>　　Abstract ……………………………………………………………………………………………………………………………………（Ⅱ）</p><p><b>　　1 緒論1</b></p><p>　　1.1 選題的背景、意義1</p><p>　　1.2

11、 我國植物抗菌現(xiàn)狀以及存在問題1</p><p>　　1.2.1 植物資源有待進一步充分利用1</p><p>　　1.2.2 活性成分及其構效關系有待深入研究2</p><p>　　1.3 植物抗菌簡介2</p><p>　　1.3.1 抗菌作用機理2</p><p>　　1.3.2 抗菌性能及其

12、檢測3</p><p>　　1.3.3 植物抗菌優(yōu)勢3</p><p>　　1.3.4 抗菌檢測——MTT法3</p><p>　　1.4 白蘞簡介3</p><p>　　1.5 抗菌植物的展望3</p><p><b>　　2 實驗內容5</b></p>&l

13、t;p>　　2.3.1 實驗器材：6</p><p>　　2.3.2 實驗步驟：6</p><p>　　3 結果與分析8</p><p>　　3.1 加MTT培養(yǎng)4小時后8</p><p>　　3.2 吸光度測定8</p><p>　　4 結論與討論11</p><p&

14、gt;<b>　　參考文獻12</b></p><p><b>　　1 緒論</b></p><p>　　1.1 選題的背景、意義</p><p>　　植物源抗菌物質在自然界中廣泛存在,是綠色殺菌劑的重要來源。植物體內的抗菌化合物是指植物體產生的多種具有抗菌活性的次生代謝產物包含了生物堿類、類黃酮類、蛋白質類、有機酸

15、類和酚類化合物等許多不同的類型。曾經(jīng)有人報道過1389種植物有可能作為殺菌劑。最近幾十年來人們對抗菌植物活性成分的化學結構和生物活性進行了深入的研究，并以此為模板成功地開發(fā)了一些高效農藥。如丙烯甲酸酯類、擬銀杏類等，對防治農作物重要病害發(fā)揮了重要作用。 隨著綠色農藥對環(huán)境生態(tài)的保護推動作用，植物源殺菌劑應用前景將非常廣泛[1]</p><p>　　抗菌藥物是現(xiàn)代醫(yī)療中不可缺少的一大類藥品，臨床應用十分廣泛。但是，

16、目前在應用這類藥物時存在著許多問題，如毒副反應、細菌耐藥性的產生等一系列問題，尤其是細菌耐藥性的迅速上升，使得由這類病菌所致的嚴重感染沒有有效的藥物可供選用，對人類健康造成極大的威脅。由于中草藥的特殊性，細菌很少能對中草藥產生抗藥性。因此，研究和開發(fā)抗菌中藥對解決耐藥菌株的產生和抗生素短缺問題具有重要意義和廣闊的前景。近年來，從天然資源中尋找新的抗菌活性的藥物成為目前研究中的一個熱點。[2]</p><p>　　

17、隨著生物材料產業(yè)的高速發(fā)展，生物材料的相關感染已經(jīng)成了臨床上一個非常棘手的問題。[3]根據(jù)統(tǒng)計，在美國僅因導尿管感染而產生的菌尿癥患者就占總感染30%，相關費用每年超過16億美元。[4]因此，抗菌生物材料的研究已經(jīng)成為目前研究的重點之一。[5]</p><p>　　1.2 我國植物抗菌現(xiàn)狀以及存在問題</p><p>　　我國是一個抗菌植物資源大國，對于中藥更是擁有深厚的文化底蘊和研究歷

18、史?？咕参镔Y源的研究能更合理、經(jīng)濟、有效地開發(fā)利用這些資源?？咕参镌卺t(yī)藥保健、日用化工、食品保藏等方面有著廣泛的應用前景，近年來，在抗菌植物資源的研究和開發(fā)利用方面取得了可喜的成就，同時也存在著一些問題，亟待進一步的研究解決。</p><p>　　1.2.1 植物資源有待進一步充分利用</p><p>　　我國地域遼闊，植物資源豐富，目前的研究僅覆蓋十分有限的種類。我們應繼續(xù)擴大殺菌

19、劑活性資源植物的篩選范圍，進行全面、系統(tǒng)、深入的調查研究以發(fā)現(xiàn)新的高活性植物，并弄清我國抑菌活性植物源的產地、分布、主要作用對象以及范圍,建立供咨詢的數(shù)據(jù)庫。同時，還應充分利用那些已經(jīng)證實具有抑菌活性的植物資源擴大其藥源部位和應用范圍。</p><p>　　1.2.2 活性成分及其構效關系有待深入研究</p><p>　　我國目前對植物源殺菌劑研究的深度遠遠不夠，對活性成分及其構效關系研

20、究較薄弱，作用機制及分子毒理學研究尚未取得突破性進展。制劑加工水平也還比較落后。這些方面的研究都亟待加強，同時為有效成分的人工合成開發(fā)新型殺菌劑奠定理論基礎，為生產實踐提供技術保障。此外，應加強用生物技術對藥用植物進行改造，提高其藥效，增強植物提取液的穩(wěn)定性及作用于寄主時的滲透能力和延展能力，使其充分發(fā)揮效能。</p><p>　　1.3 植物抗菌簡介</p><p>　　隨著科學技術的

21、迅猛發(fā)展和人類社會的進步 ,人們的生活水平顯著提高 ,對環(huán)境微生物的認識和研究水平也不斷深入。人們在利用有用微生物的同時 ,也十分警惕致病微生物的危害。近年來歐洲出現(xiàn)的“瘋牛病 ”和2003年引起全球恐慌的SARS病毒,2004年初日本、韓國出現(xiàn)的禽流感 ,這些傳染病的出現(xiàn)及爆發(fā)不僅嚴重危害了人類的身體健康 ,也帶來嚴重的經(jīng)濟負效益 ,危及各國經(jīng)濟的發(fā)展與社會的進步。為此 ,控制和消滅有害細菌的生長和繁殖 ,是當今科技領域的重要課題。[

22、6]</p><p>　　1.3.1 抗菌作用機理</p><p>　　植物抗菌作用是指一種植物的提取物在體外能抑制防止微生物生長繁殖或具有殺滅作用，其機理主要是干擾微生物的代謝過程，影響其結構和功能。[7]</p><p>　　中藥在防治疾病上作用, 是以調動機體一切有利因素,調動機體的反應性、提高免疫功能和防御功能而祛除病邪,康復機體?？咕兴幾饔脵C理也是如此

23、,少數(shù)是其有效成分直接作用于菌體, 大多數(shù)抗菌機理是激發(fā)調動動物機體內在的抗菌積極因素, 以及降低細菌毒力和減輕細菌對組織細胞的破壞作用等途徑起到抗菌作用。[8]抗菌作用機制有以下幾個方面 :</p><p>　　(1)干擾細胞壁的合成。細菌細胞壁的主要成分為肽聚糖 ,抗菌劑對細胞壁起到干擾作用 ,主要是抑制多糖鏈與四肽交聯(lián)的連結,從而使細胞壁失去完整性和對滲透壓的保護作用,損害菌體而死亡。</p>

24、<p>　　(2)可損傷細胞膜。細胞膜是細菌細胞生命活動的重要結構部分,因此當細胞膜受損傷、遭到破壞時,將導致細菌死亡。</p><p>　　(3)抑制蛋白質的合成。蛋白質的合成需要活化的氨基酸 ,且在各種酶參與下在核糖體上完成。抑制、阻礙和改變其中任何一個結構或其合成環(huán)節(jié)之一 ,都能導致蛋白質合成過程變更、停止 ,而導致細菌死亡。</p><p>　　(4)干擾核酸的合成?？?/p>

25、的說是阻礙遺傳信息的復制傳遞,包括DNA、 RNA的合成以及按 DNA 模板轉錄mRNA等。</p><p>　　1.3.2 抗菌性能及其檢測</p><p>　　抗菌性是衡量抗菌劑性能的重要指標,科學的測試評價方法是客觀反映抗菌性測定結果的關鍵。應根據(jù)抗菌劑的親(疏)水性、所用抗菌劑的溶出性及其外在形態(tài)使用相應的測試方法。在抗菌劑應用中,抗菌性能是材料和制品的特殊功能 ,要求高效、廣譜

26、、長效、安全、耐熱耐光 ,在相關環(huán)境中適用。抗菌性能的檢測屬微生物試驗范圍。</p><p>　　1.3.3 植物抗菌優(yōu)勢</p><p>　　抗菌藥物是現(xiàn)代醫(yī)學治療過程中不可或缺的一大類藥品，臨床應用十分廣泛，應用前景廣闊。但是，目前在應用這類藥物時存在著許多問題，諸如毒副作用，耐藥性等問題。尤其是耐藥菌的出現(xiàn)，對傳統(tǒng)抗菌藥劑更是一個巨大的挑戰(zhàn)，這類耐藥病菌所致的嚴重感染將沒有有效的藥

27、物可供選用，對人類健康造成極大的威脅。由于中草藥自身的特殊性，比較少細菌會對中草藥產生耐藥性。因此，研究和開發(fā)抗菌中藥對解決耐藥菌株的產生和抗生素短缺問題具有重要意義。[9]再者，我國植物資源豐富，擁有數(shù)千年中藥歷史，并且先人已經(jīng)留下諸多著作，供我們研究，學習。從中草藥中提取抗菌物質已經(jīng)成為熱門領域。</p><p>　　1.3.4 抗菌檢測——MTT法</p><p>　　MTT法又稱

28、MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射

29、敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、周期短、經(jīng)濟。[10]</p><p><b>　　1.4 白蘞簡介</b></p><p>　　白蘞為葡萄科蛇葡萄屬植物白蘞Ampelopsis japanica（Thunb.）Makino的塊根，具有清熱散結、生肌直通功效。白蘞入藥歷史悠久，早在《名醫(yī)別錄》中已有記載，是歷代醫(yī)家治療癰的重要藥物[11]。從白蘞的塊根中分離得到十

30、個化合物，根據(jù)理化性質及光譜分析鑒定為大黃素甲醚、 羽扇豆醇、β谷甾醇、大黃酚、碳十六酸、大黃素、富馬酸、胡蘿卜甙、沒食子酸、 衛(wèi)茅醇。其中大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、富馬酸、衛(wèi)茅醇為首次從該屬中獲得。大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、富馬酸、沒食子酸具有抗菌和抗真菌作用, 這與中醫(yī)藥關于白蘞的臨床應用相一致。[12]</p><p>　　1.5 抗菌植物的展望</p><p>　　目前我國對

31、中草藥的抗菌作用研究已做了大量研究工作,在實驗和臨床研究中都取得了很大進展。在人類面臨細菌耐藥性提升和抗生素不良反應不斷增加的嚴峻形勢下 ,對中藥抗感染藥物的正確認識和深入研究 ,將對人們重新認識和思考現(xiàn)代醫(yī)學中以單純抗菌為主要指標的抗感染治療方法提供了一定的啟示。幾種有臨床療效的中藥與西藥的最低抑菌濃度(MIC)比較對照表明 ,幾種中藥的體外MIC值遠遠達不到現(xiàn)代醫(yī)學對抗感染的評價要求。這表明不能僅從體外抑菌、殺菌的實驗效果單純去評價

32、中藥在人體中抗感染的作用 ,必須用全新的觀點和方法去認識中藥抗感染的臨床療效。中藥抗感染的作用與單一的西藥抗感染的作用不同 ,具有多方面的綜合作用。中藥抗感染的重要途徑是增加機體的免疫功能。臨床上中西藥合理應用具有顯著抗菌協(xié)同作用,從而為中西醫(yī)結合治療感染性疾病增加了新的內容和導向。中藥是一個偉大的寶庫 ,從中藥中篩選出有效的抗菌藥物可能是一條抗感染的捷徑。[13] </p><p>　　抗菌植物資源開發(fā)利

33、用是一項多學科滲透的綜合性很強的課題。因此應積極引進新技術加強多學科綜合性的研究,由于植物的抗菌特性具有廣譜性,它的利用領域比較寬廣,因而,就應該做到物盡其用,讓它發(fā)揮應有的作用。如江西的草珊瑚資源十分豐富,最初人們根據(jù)它的抗菌特性,研制了抗菌消炎的藥品草珊瑚含片,以后又相繼開發(fā)了日用品草珊瑚牙膏。近年,江西又推出了保健食品草珊瑚口香糖。由于江西的草珊瑚資源得到了較合理的應用,生產廠家僅利用此一項資源每年就為國家上交利稅超億元。隨著世界

34、新技術革命的到來,抗菌植物資源的利用必然首先會受到生物工程、食品工程、電子計算機等學科先進技術的影響,運用細胞融合、雜交技術來進行抗菌植物的良種選育,能產生出許多在產量和質量上都較傳統(tǒng)方法更好的新品種。目前,我們在這方面研究尚不夠深入 ,有待今后加強。[14]</p><p><b>　　2 實驗內容</b></p><p><b>　　2.1 實驗流程

35、</b></p><p>　　本課題采用將不同濃度白蘞的正丁醇提取物加入到裝有菌懸液的96孔板中隔夜培養(yǎng)，然后加入MTT，培養(yǎng)4個小時后，用DMSO溶解沉淀物，在490nm波長下，用酶標儀測定其吸光度。根據(jù)吸光度的數(shù)值，可以比較得出白蘞的正丁醇提取物對細菌的抗菌活性。</p><p><b>　　實驗流程如下：</b></p><p&g

36、t;<b>　　菌種</b></p><p><b>　　菌種活化</b></p><p><b>　　菌懸液和培養(yǎng)基制備</b></p><p><b>　　接種</b></p><p>　　96孔板中加入提取物并隔夜培養(yǎng)</p><

37、p>　　以MTT為指示劑進行快速篩選</p><p>　　490nm吸光度測定</p><p><b>　　結果與分析</b></p><p><b>　　2.2 分析方法</b></p><p>　　MTT比色法，其檢測原理為活細胞中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶

38、甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。因此我們可以根據(jù)吸光度與提取物濃度的關系定量的測得抗菌活性。</p><p><b>　　2.3實驗內容</b></p><p>　　2.3.1

39、 實驗器材：</p><p>　　試劑及菌種：DMSO MTT 牛肉膏 蛋白胨 瓊脂 蒸餾水 氯化鈉 大腸桿菌 金黃色葡萄球菌 白蘞 正丁醇。</p><p><b>　　儀器：</b></p><p>　　其他：移液槍 容量瓶 移液管 滴管 錐形瓶 培養(yǎng)皿 試管 接種環(huán)</p><p>　　2.3.2 實驗步驟

40、：</p><p>　　粗提物配制：將干燥的白蘞粉碎，篩選，加入一定量的正丁醇，浸提24h，濾過，干燥，得到干燥的粗提物,放置于冰箱保存，以備用。[6]</p><p>　　培養(yǎng)基配制：稱取牛肉膏1.5g 蛋白胨5g 氯化鈉2.5g 瓊脂10g，按以上配制成500ml培養(yǎng)基，調節(jié)PH值于7.0~7.2之間，用電爐加熱，裝入錐形瓶，每個錐形瓶的裝量占總容積的1/3為宜（分裝時，不要讓培養(yǎng)基沾

41、到管口上，避免染菌）。分裝好的錐形瓶，再做一個棉花塞塞住管口。同上再配制一瓶不加瓊脂的液體培養(yǎng)基。</p><p>　　滅菌：將分裝好的錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，進行高壓滅菌，121℃，保持20分鐘，待壓力磅指針回復到零位時，打開高壓鍋蓋，待鍋內溫度下降到60～70C。</p><p>　　培養(yǎng)基：在無菌操作臺上，將滅好菌的錐形瓶中的固體培養(yǎng)基倒入平板中（培養(yǎng)基以覆蓋平板為宜，太厚會使得培

42、養(yǎng)基浪費，太薄會使細菌的營養(yǎng)不夠，操作都需在酒精燈附近進行）。</p><p>　　接種：待瓊脂冷卻凝固，分別取金黃色葡萄菌和大腸桿菌在超凈臺對其進行接種，并做好記號。（接種環(huán)在酒精燈上滅菌后需在試管內部冷卻，以免燙死菌種）</p><p>　　培養(yǎng)：將接種好的培養(yǎng)基倒置于恒溫培養(yǎng)箱中，37℃下培養(yǎng)24小時。</p><p>　　提取物配制：稱取提取物0.1g，分別

43、用DMSO配制成濃度為100mg/ml，50mg/ml，25mg/ml，12.5mg/ml，6.25mg/ml。</p><p>　　菌懸液配置：從生長良好的培養(yǎng)基中,用無菌環(huán)取2～3個菌落的細菌團加入到1ml 生理鹽水中 ,混勻后再取1環(huán)(約 11 μl)帶菌生理鹽水加入到10ml液體培養(yǎng)基中備用。</p><p>　　96孔板：取無菌的96孔板，在其中加入100ul菌懸液和1ul提取物

44、，每個濃度設置5個平行組，并且設置2個對照組，一組為100ul菌懸液和1ul生理鹽水，一組為100ul液體培養(yǎng)基和1ul酯提取物，做好記號。在37℃恒溫箱中培養(yǎng)16~18小時。</p><p>　　MTT配制：避光無菌條件下，用無菌水配制MTT的濃度為5mg/ml（MTT為劇毒，有致癌作用，操作過程注意帶手套和口罩）。</p><p>　　加指示劑：在已經(jīng)培養(yǎng)16~18小時的96孔板中加入

45、3ul MTT溶液，在37℃恒溫箱中培養(yǎng)4小時。</p><p>　　吸?。河靡埔簶屝⌒奈?6孔板中液體部分，保留沉淀。</p><p>　　溶解：在96孔板中加入50ul DMSO，蓋上蓋，輕輕晃動，使沉淀充分溶解。</p><p>　　吸光度測定：用酶標儀，參數(shù)設置為490nm波長 震蕩時間3秒 讀取吸光度，得到結果。</p><p>

46、<b>　　3 結果與分析</b></p><p>　　3.1 加MTT培養(yǎng)4小時后</p><p>　　圖 3-1 大腸桿菌加MTT培養(yǎng)4h結果圖</p><p>　　圖 3-2 金黃色葡萄球菌加MTT培養(yǎng)4h結果圖</p><p>　　上圖為加MTT培養(yǎng)4小時后，第一列為不加提取物，第二列為不加細菌，后面五列提取

47、物濃度分別為6.25mg/ml，12.5mg/ml，25mg/ml，50mg/ml，100mg/ml?？v向是平行對照組。從圖中看出底部有藍色沉淀即藍紫色結晶甲瓚。</p><p>　　3.2 吸光度測定</p><p>　　細菌存活率=（實驗組OD值-空白孔OD值）/（不加藥物的細菌組OD值-空白孔OD值）×100%。</p><p>　　細菌存活率&l

48、t;30%則對該藥為高度敏感（S），細菌存活率30%~50%則對該藥為中度敏感（MS），細菌存活率>50%則對該藥為不敏感（R）。</p><p>　　表 3-1 白蘞正丁醇提物對大腸桿菌抗菌活性的測定</p><p>　　圖 3-3 白蘞正丁醇提取物對大腸桿菌抗菌活性的測定</p><p>　　上圖為提取物濃度與大腸桿菌吸光度的線性圖，因為吸光度越大，表面存

49、活細菌越多，所以此圖也側面反映了提取物濃度與細菌數(shù)量的關系。</p><p>　　表 3-2 白蘞正丁醇提物對金黃色葡萄球菌抗菌活性的測定</p><p>　　圖 3-4 白蘞正丁醇提取物對大腸桿菌抗菌活性的測定</p><p>　　上圖為提取物濃度與金黃色葡萄球菌吸光度的線性圖，因為吸光度越大，表面存活細菌越多，所以此圖也側面反映了提取物濃度與細菌數(shù)量的關系。與上

50、面大腸桿菌得出結果相似。</p><p>　　上述圖表是在490nm測得的提取物濃度與吸光度的關系圖，可以看出，隨著濃度的增加吸光度越低，細菌活性越低，說明白蘞的正丁醇提取物對大腸桿菌以及金黃色葡萄球菌都有明顯的抗菌作用，并且隨著提取物濃度的升高，抗菌作用明顯增強，根據(jù)存活率的計算可以得到明顯的對照結果。此次實驗測得了白蘞的正丁醇提取物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有抗菌作用，同時證明MTT法同樣適合于細菌的檢測，

51、且具有周期短，測量精確等優(yōu)點。</p><p><b>　　4 結論與討論</b></p><p>　　本實驗中，MTT配制過程一定要注重避光無菌操作，并且盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,MTT具有致癌作用，操作過程中要注意安全，佩戴口罩和手套。在加入DMSO后，要注意充分震蕩，使甲瓚沉淀充分溶解，避免引起測量錯誤。酶標儀使用前應該預熱一段時間。在96孔板中加藥劑的時候應該盡量保持量

52、一致，注意無菌操作，且保持96孔板的清潔。吸光度要在盡量短時間內測定，避免時間過久產生變化。在實驗數(shù)據(jù)處理過程中，應去除背景以及明顯錯誤的數(shù)據(jù)。</p><p>　　為消除受試藥液顏色對MTI'法吸光度數(shù)值的影響，可以將每個藥液濃度設對照。如果藥液在490nm處有強的光吸收，應考慮采用別的活性測定方法。另外，一些供試菌在培養(yǎng)過程中能產生有色化合物，能干擾比色測定，這也是MTT法的不足之處。</p&g

53、t;<p>　　通過MTT檢測法對白蘞的正丁醇提取物抗菌活性的測定，證明了白蘞的正丁醇提取物具有抗菌活性。同時也說明MTT法同樣也適用與原核生物，相比于常規(guī)方法，大量的縮短了檢測周期，而且更精確，值得企業(yè)在生產實踐中應用。</p><p>　　最近根據(jù)老師的研究得知白蘞正丁醇的提取物中含有洋芹素-7,4’-二甲醚（apigenin-7,4’-dimethyl ether），洋芹素（apigenin）

54、，槲皮素（quercetin），槲皮苷（quercitrin，Quercetin-3-O-α-L-Rhamnopyranoside），蘆?。╮utin，Quercetin -3-O-[β-D-glucopyranosyl-(6→1)-α-L-rhamnopyranoside]），金絲桃苷（hyperoside Quercetin-3-O-β-D-Galactopyranoside），沒食子酸gallic acid，原兒茶酸protoca

55、techuic acid等幾種物質。由于時間有限，還有待進一步的研究。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　1. 翟鳳艷,郭東峰,劉英杰. 我國植物源殺菌劑研究現(xiàn)狀及展望[J].廣東農業(yè)科學, 2010(8):120-122 </p><p>　　2. 薛偉,宋寶安,周霞,刁春玲,楊松,何偉,胡德禹,金林紅.抗菌植

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