殼聚糖對(duì)香魚(yú)免疫力生理生化的影響【畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　殼聚糖對(duì)香魚(yú)免疫力生理生化的影響</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專(zhuān)業(yè)班級(jí) 生物

2、技術(shù) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱(chēng) </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目　錄</b>

3、</p><p><b>　　摘要1</b></p><p><b>　　1 引言2</b></p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)材料與材料2</p><p>　　2.1 試驗(yàn)材料2</p><p>　　2.1.1試驗(yàn)動(dòng)物2</p><p>　　2.

4、1.2 試驗(yàn)試劑與藥品2</p><p><b>　　2.2試驗(yàn)方法2</b></p><p>　　2.2.1 試驗(yàn)分組與飼養(yǎng)方法2</p><p>　　2.2.2 測(cè)定項(xiàng)目3</p><p>　　2.2.3 樣品的采取與分析3</p><p>　　2.2.4 樣本處理3</p&

5、gt;<p>　　2.3 測(cè)定指標(biāo)及方法3</p><p>　　2.3.1血液紅、白細(xì)胞的計(jì)數(shù)3</p><p>　　2.3.2溶菌酶活性的測(cè)定3</p><p>　　2.3.3 過(guò)氧化物酶測(cè)定4</p><p>　　2.3.4酸性磷酸酶測(cè)定4</p><p>　　2.3.5 丙二醛測(cè)定5&l

6、t;/p><p><b>　　3 結(jié)果5</b></p><p>　　3.1殼聚糖對(duì)血液生理特性的影響5</p><p>　　3.2 殼聚糖對(duì)LSZ活性的影響6</p><p>　　3.3 殼聚糖對(duì)POD活性的影響6</p><p>　　3.4殼聚糖對(duì)ACP活性的影響7</p>

7、<p>　　3.5殼聚糖對(duì)MDA活性的影響8</p><p><b>　　4討論9</b></p><p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)11</b></p><p>　　摘要:在基礎(chǔ)日糧中添加不同濃度的殼聚糖投喂香魚(yú)(Plecoglossus

8、altivelis)，測(cè)定香魚(yú)血液中紅細(xì)胞、白細(xì)胞數(shù)量，血清、肝臟、腎臟、脾、肌肉、鰓的過(guò)氧化物酶（POD）、丙二醛（MDA）、溶菌酶（LSZ）、酸性磷酸酶（ACP）的活性，探討殼聚糖對(duì)香魚(yú)免疫力影響的最有效劑量，以期為香魚(yú)高效配合飼料的開(kāi)發(fā)和產(chǎn)業(yè)化推廣奠定一定的理論基礎(chǔ)，并為香魚(yú)的疾病預(yù)防提供新的途徑。結(jié)果表明：添加1%的殼聚糖能有效的提高香魚(yú)的各個(gè)生理指標(biāo)，提高香魚(yú)的免疫力。</p><p>　　關(guān)鍵字: 殼

9、聚糖；香魚(yú)；免疫力;</p><p>　　ABSTRACT: Fed the same weight size of Plecoglossus altivelis, diet with different concentrations of the chitosan in diet.Then measured ayu of blood red blood cells and white blood cell co

10、unt, Serum, liver, kidney, spleen, muscle, gill of POD, DMA, LSZ and ACP, Combined with the growth of ayu ayu chitosan on immune function, Discussion the most effective dose of immune effects of chitosan on Ayu. Found ay

11、u's disease prevention for the new way. The results showed that addition of 1% chitosan can e</p><p>　　KEYWORDS: Chitosan; Plecoglossus altivelis; Immunity;</p><p><b>　　1 引言</b>&

12、lt;/p><p>　　香魚(yú)（Plecoglossus altivelis）又稱(chēng)海胎魚(yú)、油香魚(yú)、細(xì)鱗魚(yú)、瓜魚(yú)、平魚(yú)、八月香、肥魚(yú)等，屬鮭形目，香魚(yú)種，香魚(yú)屬。香魚(yú)是一種溯河性小型經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，其肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，清香不腥，為上等食用魚(yú)，曾被列入“雁蕩五珍”之一，在國(guó)際市場(chǎng)上有“淡水魚(yú)之王”的美稱(chēng)，備受人們的青睞。近十幾年來(lái)，由于酷捕濫撈、江河水利設(shè)施的興建、各種生產(chǎn)活動(dòng)造成產(chǎn)卵床的破壞以及工業(yè)廢水污染等諸多原因，我國(guó)的

13、香魚(yú)資源日趨枯竭[1]，再加上野生香魚(yú)數(shù)量比較少，生命周期短，故市場(chǎng)價(jià)格日益攀升，國(guó)內(nèi)鮮活香魚(yú)收購(gòu)價(jià)達(dá)150-300元/公斤，日本市場(chǎng)售價(jià)為1000-3000日元/公斤，若加工成“色如黃金、可攜千里”的香魚(yú)干，每千克可達(dá)l000元以上。日本香魚(yú)養(yǎng)殖年產(chǎn)量為8600噸，每年市場(chǎng)需求大約為3萬(wàn)-5萬(wàn)噸，明顯的供不應(yīng)求狀態(tài)，給香魚(yú)的養(yǎng)殖帶來(lái)了很大的利益。</p><p>　　香魚(yú)屬大中型水域自然養(yǎng)殖和人工養(yǎng)殖優(yōu)良品種，

14、具有食物鏈短、生長(zhǎng)速度快、飼料來(lái)源廣、商品周期短、經(jīng)濟(jì)價(jià)值高等特點(diǎn)，是很有發(fā)展前途的增養(yǎng)殖對(duì)象。近年來(lái)我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大，集約化和工廠化程度越來(lái)越高，養(yǎng)殖水域污染日益嚴(yán)重，導(dǎo)致病害的頻繁發(fā)生，嚴(yán)重困擾著香魚(yú)等水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，為了保證水產(chǎn)養(yǎng)殖穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn)，在魚(yú)用飼料中添加抗生素成了重要措施之一，但由于許多飼用抗生素的耐藥性和殘留等問(wèn)題，長(zhǎng)期使用會(huì)降低藥效并造成一種抗生素濫用的現(xiàn)象，一方面使致病病原體的抗藥性不斷增加，使機(jī)體的細(xì)

15、胞免疫、體液免疫功能下降[2]，另一方面嚴(yán)重影響了水產(chǎn)品的質(zhì)量，直接危害到人體的健康，因此開(kāi)發(fā)和篩選高效且安全的飼料添加劑已成為目前水產(chǎn)養(yǎng)殖中一項(xiàng)重要課題。魚(yú)用免疫增強(qiáng)劑在水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌病、病毒病及寄生蟲(chóng)病的防治上均有較好的效果[3]，能夠預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物傳染病的發(fā)生并降低死亡率。</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)采樣殼聚糖做為魚(yú)用免疫增強(qiáng)劑，來(lái)增強(qiáng)香魚(yú)的免疫力，提高香魚(yú)的養(yǎng)殖存活率。殼聚糖又名幾丁質(zhì)糖、 脫乙?；讱に?，是

16、一種天然的陽(yáng)離子生物聚合物，它無(wú)毒、無(wú)害，安全可靠，易于生物降解，不污染環(huán)境，可直接活化巨噬細(xì)胞、自然殺傷 N K細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞的活性，促進(jìn)其分裂增殖，使機(jī)體自身合成分泌的免疫球蛋白和細(xì)胞因子增多[4]。殼聚糖具有抗微生物活性、激活淋巴細(xì)胞、調(diào)節(jié)脂肪代謝、降低血脂和膽固醇等多種生理功能，能有效增強(qiáng)水生動(dòng)物體內(nèi)殺菌酶類(lèi)的活性和吞噬細(xì)胞的吞噬能力[5]。另外，殼聚糖還能抗真菌活性，殼聚糖的衍生物如殼寡糖也有很強(qiáng)的抑制作用[6]

17、。近年來(lái)，殼聚糖在水產(chǎn)養(yǎng)殖中(軟體類(lèi)、甲殼類(lèi)、魚(yú)類(lèi)等)得到了廣泛的應(yīng)用，童春等[7]對(duì)淡水白鯧投喂不同濃度的殼聚糖研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖可以顯著提高血中顆粒細(xì)胞的吞噬指數(shù)。常青等[8]在基礎(chǔ)飼料中分別添加殼聚糖，連續(xù)投喂花鱸60d，結(jié)果表明，殼聚糖可以顯著促進(jìn)花鱸的生長(zhǎng)。Wang等[9]發(fā)現(xiàn)，給白蝦注射4ug /g體重的殼聚糖后，血清酚氧化酶活性也明顯增強(qiáng)。但國(guó)內(nèi)外目前還沒(méi)有關(guān)于飼料中添加殼聚糖對(duì)香魚(yú)生長(zhǎng)及非特異性免疫功能影響的報(bào)道，因此，選

18、用</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)材料與材料</b></p><p><b>　　2.1 試驗(yàn)材料</b></p><p><b>　　2.1.1試驗(yàn)動(dòng)物</b></p><p>　　香魚(yú)購(gòu)自寧海鳧溪養(yǎng)殖廠。</p><p>　　2.1.2 試驗(yàn)試

19、劑與藥品</p><p>　　殼聚糖購(gòu)于寧波奧博生物有限公司；血清（漿）組織過(guò)氧化物酶（POD）測(cè)定試劑盒、酸性磷酸酶（ACP）測(cè)定試劑盒、溶菌酶（LSZ）檢測(cè)試劑盒、丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于南京建成科技有限公司。</p><p><b>　　2.2試驗(yàn)方法</b></p><p>　　2.2.1 試驗(yàn)分組與飼養(yǎng)方法</p>

20、<p>　　擇取體質(zhì)健壯、大小基本保持一致的香魚(yú)作為本次試驗(yàn)用香魚(yú)，采用單因子濃度梯度法設(shè)計(jì)飼料，也就是在基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0%、0.5%、1%、2%、3%的殼聚糖，0%的為對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各設(shè)三個(gè)平行組，每組實(shí)驗(yàn)組為20尾。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)在室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行，在實(shí)驗(yàn)條件下馴養(yǎng) [10]，待其攝食和生長(zhǎng)趨于正常后，開(kāi)始進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。養(yǎng)殖用水為曝氧處理12小時(shí)后的自來(lái)水，每

21、天8∶00和20∶00投喂兩次，在投喂前用濾網(wǎng)清理水中污垢，加換新水，換水量約為網(wǎng)箱水量的三分之二，24h充氣增氧。水溫維持在（17±2.0)℃，水體pH值為7.1～7.5。試驗(yàn)進(jìn)行30天，在飼養(yǎng)過(guò)程中，隨時(shí)注意水溫的變化并定期測(cè)定水的質(zhì)量。</p><p>　　2.2.2 測(cè)定項(xiàng)目</p><p>　　香魚(yú)養(yǎng)殖30天后，實(shí)驗(yàn)結(jié)束，對(duì)試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行取樣操作，測(cè)定香魚(yú)血液中紅、白細(xì)胞的

22、總數(shù)，以及血清、肝臟、腎臟、脾臟、肌肉、鰓的過(guò)氧化物酶（POD）、溶菌酶（LSZ）、丙二醛（DMA）、酸性磷酸酶（ACP）的活性[11]。</p><p>　　2.2.3 樣品的采取與分析</p><p>　?。?）取樣程序：尾靜脈取血 解剖 分離個(gè)器官 清洗、稱(chēng)重 放入自封袋內(nèi)，做好標(biāo)記，封好 低溫保存。</p><p><

23、;b>　?。?）取樣過(guò)程：</b></p><p>　　血清樣品：撈取香魚(yú)，在冰盤(pán)上進(jìn)行操作，以一次性無(wú)菌注射器從尾靜脈取血。將每尾魚(yú)的血液分為2份，一部分加肝素鈉抗凝；另一部分不加抗凝劑，待析出血清后，于4℃條件下以4000r/min離心10min，收集上層血清，保存在-20℃冰箱備用。</p><p>　　鰓絲樣品：剪取香魚(yú)的鰓，去掉鰓耙、鰓弓，只留鰓絲，用冷緩沖液沖

24、洗干凈，用濾紙擦干水分，稱(chēng)重，放人自封袋內(nèi)，封好，做好標(biāo)記，放入冰箱中保存[12]。</p><p>　　肌肉樣品：在香魚(yú)背部剪取一塊肌肉，去掉魚(yú)皮、刺，用冷緩沖液洗沖洗干凈，用濾紙擦干水分，稱(chēng)重，放人自封袋內(nèi)，封好，做好標(biāo)記，放入冰箱中保存。</p><p>　　腎臟樣品：取全部腎臟，去掉雜質(zhì)組織，用冷緩沖液沖洗干凈，用濾紙擦干水分，稱(chēng)重，放人自封袋，封好，做好標(biāo)記，放入冰箱中保存。&l

25、t;/p><p><b>　　肝臟樣品：同腎臟。</b></p><p><b>　　脾臟樣品：同腎臟。</b></p><p>　　2.2.4 樣本處理</p><p>　　取脾臟、肝臟、腎臟、肌肉、鰓絲組織（0.5g～1g），用移液管量取預(yù)冷的勻漿介質(zhì)（勻漿介質(zhì)的體積總量為組織塊重量的9倍[13]）

26、，用移液管取總量2/3的勻漿介質(zhì)于燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（操作要在冰水浴中進(jìn)行），剪碎的組織迅速倒入玻璃勻漿管中（勻漿管放入冰水中，整個(gè)勻漿過(guò)程在冰上進(jìn)行），再用剩余的勻漿介質(zhì)將燒杯中的碎組織塊殘留沖洗出來(lái)，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，上下左右不停的轉(zhuǎn)動(dòng)，研磨數(shù)幾十次（6～8分鐘），直到充分研碎，組織勻漿化為止。取出勻漿液，4℃ 2000rpm離心15min，小心吸取取上層清液，將上層清液-80℃保存?zhèn)溆?。在此過(guò)程中，每一指標(biāo)都

27、做一式三份的平行試驗(yàn)。</p><p>　　2.3 測(cè)定指標(biāo)和方法</p><p>　　2.3.1血液紅、白細(xì)胞的計(jì)數(shù)</p><p>　　2.3.2.1主要儀器</p><p>　　顯微鏡、載玻片、計(jì)數(shù)器、移液槍等。</p><p>　　2.3.2.2樣品測(cè)定</p><p>　　白細(xì)胞：98

28、ml 蒸餾水加入1 %亞甲藍(lán)3滴，冰醋酸2ml，配制成100ml白細(xì)胞稀釋液。取20L抗凝血加入盛有380 l白細(xì)胞稀釋液的試管，待紅細(xì)胞全部溶解后，吸取白細(xì)胞懸液，在低倍鏡下用血球計(jì)數(shù)器計(jì)算白細(xì)胞總數(shù)。</p><p>　　紅細(xì)胞：取20L全血用生理鹽水稀釋 200倍后，在Neubauer計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)。</p><p>　　2.3.2溶菌酶活性的測(cè)定</p><p&g

29、t;　　2.3.2.1 主要儀器</p><p>　　722型可見(jiàn)光分光光度劑、培養(yǎng)箱、水浴箱等。</p><p>　　2.3.2.2 主要試劑</p><p>　　溶壁微球菌（Micrococcus Lysodeiktics），溶菌酶（Lysozyme）：購(gòu)于南京建成生物工程研究所，南京建成科技有限公司。</p><p>　　2.3.2.3

30、 實(shí)驗(yàn)過(guò)程</p><p>　　將溶壁微球菌菌種接種到瓊脂培養(yǎng)基上，37℃條件下，經(jīng)過(guò)24h培養(yǎng)，用無(wú)菌蒸餾水洗下菌苔，并稀釋成菌懸液。將2%瓊脂糖倒在培養(yǎng)皿內(nèi)，制成瓊脂糖凝膠板，高溫滅菌。冷卻后均勻涂布菌懸液。</p><p>　　將上次低溫保存的血清和組織勻漿在室溫條件下進(jìn)行解凍，然后按照南京建成生物工程研究所溶菌酶檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試驗(yàn)操作。</p><p>

31、;　　2.3.2.4計(jì)算公式</p><p>　　2.3.3 過(guò)氧化物酶測(cè)定</p><p>　　2.3.3.1主要儀器</p><p>　　可見(jiàn)光分光光度計(jì)、離心機(jī)等。</p><p>　　2.3.3.2 樣品測(cè)定</p><p>　　將上次低溫保存的血清和組織勻漿在室溫條件下解凍，然后按照南京建成生物工程研究所過(guò)氧

32、化物酶測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試驗(yàn)操作。</p><p>　　2.3.3.3 定義及計(jì)算公式</p><p>　　血清（漿）中POD定義：在37℃條件下，每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1μg的底物酶量為一個(gè)酶活力單位。</p><p><b>　　計(jì)算公式</b></p><p>　　組織中POD定義：在37℃條件下，每毫克

33、組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg的底物酶量為一個(gè)酶活力單位。</p><p><b>　　計(jì)算公式</b></p><p>　　2.3.4酸性磷酸酶測(cè)定</p><p>　　2.3.4.1 主要儀器</p><p>　　可見(jiàn)光分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、移液槍、試管等。</p><p>　　2.3.5.2 樣

34、品測(cè)定</p><p>　　將上次低溫保存的血清及組織勻漿在室溫條件下解凍，然后按照南京建成生物工程研究所酸性磷酸酶測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試驗(yàn)操作。</p><p>　　2.3.4.3 定義及計(jì)算公式</p><p>　　血清中ACP定義為: 100 mL血清在37 ℃與基質(zhì)作用 30min產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)活力單位。</p><p>　　組織

35、中ACP定義為：每克組織在37 ℃與基質(zhì)作用 30min產(chǎn)生1mg酚為1個(gè)活力單位。</p><p>　　2.3.5 丙二醛測(cè)定</p><p>　　2.3.5.1 主要儀器</p><p>　　可見(jiàn)光分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、離心機(jī)、玻璃試管等。2.3.5.2 樣本測(cè)定</p><p>　　將上次低溫保存的血清及組織勻漿在室溫條件下解凍，然

36、后按照南京建成生物工程研究所丙二醛測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行試驗(yàn)操作。</p><p>　　2.3.5.3計(jì)算公式</p><p>　　血清（漿）中MDA含量計(jì)算公式：</p><p>　　組織中MDA含量計(jì)算公式：</p><p><b>　　3 結(jié)果</b></p><p>　　3.1殼聚糖對(duì)血液生

37、理特性的影響</p><p>　　香魚(yú)血液中具有吞噬功能的細(xì)胞主要為紅細(xì)胞和白細(xì)胞。血液中該細(xì)胞數(shù)量的高低能從一定程度上反應(yīng)香魚(yú)的細(xì)胞吞噬功能。本試驗(yàn)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼料中添加一定的殼聚糖后，香魚(yú)血液中紅細(xì)胞數(shù)和白細(xì)胞數(shù)均有不同幅度的改變。由表1可見(jiàn)，飼料中添加0.5%的殼聚糖的香魚(yú)血液中的紅細(xì)胞總數(shù)高于其他組，其余組與對(duì)照組相比，紅細(xì)胞數(shù)都有所下降。由表2可見(jiàn)，投喂殼聚糖對(duì)香魚(yú)血液白細(xì)胞數(shù)量的影響與其對(duì)血液紅細(xì)胞

38、數(shù)量的影響一致。飼料中添加0.5%的殼聚糖的香魚(yú)血液中的白細(xì)胞總數(shù)高于其他組，其余組與對(duì)照組相比，1%、3%的都有所上升，但上升幅度不太，2%的有稍微降低。</p><p>　　表1 殼聚糖對(duì)香魚(yú)紅細(xì)胞數(shù)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）</p><p>　?。硎九c對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05）,＊＊表示與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01）</p><

39、;p>　　表2 殼聚糖對(duì)香魚(yú)白細(xì)胞數(shù)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）</p><p>　?。硎九c對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05）,＊＊表示與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01）</p><p>　　3.2 殼聚糖對(duì)LSZ活性的影響</p><p>　　飼料中添加不同劑量的殼聚糖后，所取香魚(yú)的肝、腎、脾、鰓和肌肉組織中的溶菌酶活性均有不同幅度的

40、改變。由表3可知，在血清、脾臟、肝臟、腎臟、鰓絲中1%殼聚糖組的LSZ活性比對(duì)照組分別提高了19%（P<0.05）、91%（P<0.01）、69%（P<0.01）、91%（P<0.01）、67%（P<0.05）。其中1%殼聚糖組的肝臟、腎臟、對(duì)照組有極差異，血清、脾臟、鰓絲與對(duì)照組有顯著差異。由圖1可見(jiàn)，LSZ活性會(huì)隨著飼料中添加低濃度殼聚糖的升高而增大，到1%達(dá)到最大值，之后會(huì)隨之濃度的升高，LSZ活性降

41、低。</p><p>　　表3 殼聚糖對(duì)香魚(yú)溶菌酶（LSZ）活性的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）</p><p>　?。硎九c對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05）,＊＊表示與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01）</p><p>　　圖 1 不同濃度的殼聚糖對(duì)香魚(yú)溶菌酶（LSZ）活性的影響</p><p>　　3.3 殼聚糖對(duì)PO

42、D活性的影響</p><p>　　飼料中添加不同劑量的殼聚糖后，所取香魚(yú)的脾、肝、腎、鰓絲和肌肉組織中的POD活性均有不同幅度的改變。由表4可見(jiàn)，在血清、脾臟、肝臟、腎臟、鰓絲中1%殼聚糖組的POD活性比對(duì)照組分別提高了36%（P<0.01）、45%（P<0.05）、74%（P<0.01）、16%（P<0.05）、10%（P<0.05）。其中1%殼聚糖組的血清、肝臟與對(duì)照組有極差異，

43、脾臟、腎臟、鰓絲與對(duì)照組有顯著差異。由圖2可見(jiàn)，飼料中添加不同濃度的殼聚糖，POD活性呈現(xiàn)拋物線形式，在1%處達(dá)到最大值。</p><p>　　表4 殼聚糖對(duì)香魚(yú)過(guò)氧化物酶（POD）活性的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）</p><p>　　＊表示與對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05）,＊＊表示與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01）</p><p>　　

44、圖 2 不同濃度的殼聚糖對(duì)香魚(yú)過(guò)氧化物酶（POD）活性的影響</p><p>　　3.4殼聚糖對(duì)ACP活性的影響</p><p>　　飼料中添加不同劑量的殼聚糖后，所取香魚(yú)的脾、肝、腎、鰓絲和肌肉組織中的ACP活性均有不同幅度的改變。由表5可見(jiàn)，在血清、脾臟、肝臟、腎臟、鰓絲和肌肉中1%殼聚糖組的ACP活性比對(duì)照組分別提高了86%（P<0.01）、24%（P<0.05）、6%

45、（P<0.05）、87%（P<0.01）、6%（P<0.05）41%（P<0.05）。其中1%殼聚糖組的血清、腎臟與對(duì)照組有極差異，脾臟、肝臟、鰓絲、肌肉與對(duì)照組有顯著差異。由圖3可見(jiàn)，飼料中添加1%的殼聚糖能顯著的提高ACP活性。</p><p>　　表5 殼聚糖對(duì)香魚(yú)酸性磷酸酶（ACP）活性的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）</p><p>　?。硎九c對(duì)照組比

46、較差異顯著（P<0.05）,＊＊表示與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01）</p><p>　　圖 3 不同濃度的殼聚糖對(duì)香魚(yú)酸性磷酸酶（ACP）活性的影響</p><p>　　3.5殼聚糖對(duì)MDA活性的影響</p><p>　　飼料中添加不同劑量的殼聚糖后，所取香魚(yú)的脾、肝、腎、鰓絲和肌肉組織中的MDA活性均有不同幅度的改變。由表6可見(jiàn)，在血清、脾臟

47、、肝臟、腎臟、鰓絲和肌肉中1%殼聚糖組的MDA活性比對(duì)照組分別提高了46%（P<0.01）、85%（P<0.01）、39%（P<0.05）、46%（P<0.05）、65%（P<0.01）、1%（P<0.05）。其中1%殼聚糖組的血清、脾臟、鰓絲與對(duì)照組有極差異，肝臟、腎臟、肌肉與對(duì)照組有顯著差異。由圖4可見(jiàn)，飼料中添加1%的殼聚糖能顯著的提高M(jìn)DA活性。</p><p>　　表

48、6 殼聚糖對(duì)香魚(yú)丙二醛（MDA）活性的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）</p><p>　?。硎九c對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05）,＊＊表示與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01）</p><p>　　圖 4 不同濃度的殼聚糖對(duì)香魚(yú)丙二醛（MDA）活性的影響</p><p><b>　　4討論</b></p>&

49、lt;p>　　在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面，現(xiàn)已研究表明，在飼料中添加一定濃度的殼聚糖對(duì)促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物非特異性免疫及病害防治具有良好的效果，先在銀鯽、蝦中有所報(bào)告，但在香魚(yú)養(yǎng)殖中的應(yīng)用到現(xiàn)在還沒(méi)未見(jiàn)報(bào)道。</p><p>　　血細(xì)胞是動(dòng)物機(jī)體免疫的重要組成部分，這類(lèi)細(xì)胞對(duì)自身生理狀態(tài)變化和對(duì)外界環(huán)境因子刺激表現(xiàn)非常敏感[14]，血細(xì)胞的功能與維持體內(nèi)各種生理環(huán)境的穩(wěn)定性都有著密切的關(guān)系，魚(yú)類(lèi)的白細(xì)胞可參與機(jī)體的傷口修復(fù)、防

50、御等生理機(jī)制。紅細(xì)胞的主要功能包括血紅蛋白攜帶、運(yùn)輸氧氣，另外，還具有吞噬作用[15]。香魚(yú)血液中紅、白細(xì)胞的總數(shù)量能很好的反映出機(jī)體的免疫水平。本試驗(yàn)表明，添加0.5%的殼聚糖組可以顯著提高香魚(yú)血液中紅、白細(xì)胞數(shù)，從而達(dá)到了增強(qiáng)免疫力的效果。</p><p>　　溶菌酶活力是魚(yú)類(lèi)非特異免疫的重要指標(biāo)，具有多種不同的生理生化作用，如血凝作用；參與粘多糖的生物合成代謝；作為調(diào)理素促進(jìn)吞噬作用，或直接激活多核形白細(xì)胞

51、和巨噬細(xì)胞；直接殺菌作用等[16]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，添加適量的殼聚糖能極大提高香魚(yú)個(gè)器官溶菌酶的活性，對(duì)肝臟和腎臟中的LSZ活性影響較大。王樹(shù)芹[17]等在殼聚糖對(duì)異育銀鯽溶菌酶活力影響的研究中指出，殼聚糖能極大的提高異育銀鯽溶菌酶的活力。沈錦玉[18]等分別對(duì)中華絨螯蟹注射和口服殼聚糖均顯著提高了血清中LSZ活性。本試驗(yàn)的研究結(jié)果與這是一致的。然而其具體作用原理還不清楚，有待于進(jìn)一步系統(tǒng)的研究。</p><p>

52、;　　高等動(dòng)物的酸性磷酸酶作為體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶，在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝 ,主要存在于各臟器、血細(xì)胞和骨髓中。在魚(yú)類(lèi)免疫研究中，也測(cè)定組織器官或血清中的磷酸酶活性。本實(shí)驗(yàn)研究表明，添加適量的殼聚糖能很大程度的提高香魚(yú)各個(gè)器官中的酸性磷酸酶活性，尤其對(duì)肝、脾和腎中的ACP活性影響最大。華雪銘等[19]對(duì)暗紋東方鲀進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖能顯著提高東方鲀的酸性磷酸酶活性。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果與這是一致的，都能提高魚(yú)的非特異性免疫

53、力。然而其具體作用機(jī)制還不清楚，有待遇進(jìn)一步系統(tǒng)的研究。</p><p>　　過(guò)氧化物酶活性與機(jī)體免疫水平密切相關(guān)，對(duì)于增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的防御功能和整個(gè)機(jī)體的免疫機(jī)能有重要作用[20]，能清除機(jī)體內(nèi)多余的自由基，從而免除自由基對(duì)生物的危害。目前，還沒(méi)有關(guān)于殼聚糖對(duì)組織中過(guò)氧化物酶活性影響的研究報(bào)道，在本實(shí)驗(yàn)研究中，添加適量的殼聚糖投喂香魚(yú)，能極大的提高它各個(gè)器官中過(guò)氧化物酶的活性，對(duì)肝、脾和腎中的POD活性影響較大，

54、但對(duì)肌肉的影響稍微弱。關(guān)于殼聚糖對(duì)過(guò)氧化物酶活性影響的機(jī)理。還需進(jìn)一步深入研究探討。</p><p>　　丙二醛屬于活性氧清除劑，可分解機(jī)體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧如過(guò)氧化氫，超氧陰離子等，這些物質(zhì)可對(duì)機(jī)體尤其是質(zhì)膜產(chǎn)生毒害作用，測(cè)定丙二醛活力可以評(píng)價(jià)機(jī)體受活性氧毒害程度，評(píng)價(jià)質(zhì)膜受損程度。本實(shí)驗(yàn)研究表明，添加適量的殼聚糖投喂香魚(yú)，能極大的提高香魚(yú)各個(gè)器官中丙二醛的活性，對(duì)脾和腎中的MDA活性影響較大，對(duì)肌肉中的M

55、DA活性影響微弱。因此將殼聚糖作為香魚(yú)的免疫增強(qiáng)劑具有較好的應(yīng)用前景。張璐等[21]對(duì)鱸魚(yú)投喂肽聚糖證實(shí)，隨著飼料中肽聚糖添加量的升高，鱸魚(yú)的生長(zhǎng)和非特異性免疫力均顯著上升。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果與這接近，殼聚糖能提高魚(yú)類(lèi)的丙二醛活性。</p><p>　　根據(jù)飼料中添加不同濃度的殼聚糖對(duì)香魚(yú)免疫生理生化的影響，測(cè)定了香魚(yú)血液和脾、肝、腎臟、鰓和肌肉的LSZ活性、POD活性、ACP活性和MDA活性的指標(biāo)，確定殼聚糖可作

56、為香魚(yú)飼料中一種安全高效的免疫添加劑，適宜添加量為 0.5%～1.0%。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 仇建標(biāo), 陳少波, 黃麗, 周志明, 陳志儉, 李尚魯, 池偉, 胡益遷. 浙江香魚(yú)資源現(xiàn)狀與衰退原因分析[J]. 漁業(yè)現(xiàn)代化, 2009, 6 (36): 63-65.</p><p>　　[2

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