中藥學畢業(yè)論文(含文獻綜述)蒲地藍消炎片中板藍根有效成分(r,s)-告依春含量測定方法的研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　蒲地藍消炎片中板藍根有效成分(R,S)-告依春含量測定方法的研究</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專

2、業(yè)班級 中藥學(中藥分析與鑒定方向) </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　誠 信 聲

3、明</b></p><p>　　我聲明，所呈交的畢業(yè)論文是本人在老師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。我承諾，論文中的所有內(nèi)容均真實、可信。</p><p>　　畢業(yè)論文作者（簽名）： </p>

4、;<p>　　年 月 日</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要I-Ⅱ</b></p><p><b>　　1 前言1</b></p><p>　　1.1蒲地藍消炎片及板藍根概況1</p>&

5、lt;p>　　1.2（R,S）-告依春的研究2</p><p>　　1.3本論文研究的意義2</p><p><b>　　2 材料與儀器3</b></p><p>　　2.1 試劑與試藥3</p><p><b>　　2.2 儀器3</b></p><p>&

6、lt;b>　　3 方法4</b></p><p>　　3.1（R,S）-告依春含量測定方法4</p><p>　　3.2方法學考察4</p><p>　　3.3 單因素考察方法7</p><p><b>　　3.4 結(jié)果9</b></p><p><b>　　

7、4 討論9</b></p><p>　　4.1 提取條件分析13</p><p>　　4.2測定條件分析10</p><p><b>　　5 結(jié)論11</b></p><p><b>　　參考文獻11</b></p><p><b>　　綜述

8、13</b></p><p><b>　　致謝21</b></p><p>　　蒲地藍消炎片中板藍根有效成分(R,S)-告依春含量測定方法的研究</p><p>　　摘要：目的 建立蒲地藍消炎片中(R,S)-告依春成分提取及含量測定的方法。方法 本論文采用的提取方法是超聲法。提取溶液選擇甲醇，體積為25ml，時間30min。采用的

9、測定方法是高效液相色譜法。以(R,S)-告依春為對照品，以甲醇-0.02%磷酸溶液（7：93）為流動相，流速為0.8ml/min在242nm波長處測定RS-告依春的含量。結(jié)果 通過高效液相色譜法測得蒲地藍消炎片中(R,S)-告依春的含量。結(jié)論 本方法快速簡便，重復(fù)性好，專屬性強，可用于蒲地藍消炎片(R,S)-告依春含量的檢測方法。</p><p>　　關(guān)鍵詞：蒲地藍消炎片；(R,S)-告依春；高效液相色譜法；含量

10、測定</p><p>　　A research for the measurement method of the (R,S)-epigoitrin content within theisatidis radix of Pudilan xiaoyan Tablets</p><p>　　Abstract: Objective To establish the method of extr

11、action and method of active ingredient (R,S)-epigoitrin from Pudilan xiaoyan Tablets. Method In this paper,the method of ultrasonic were used for extraction.HPLC was used for measurement. 25ml of 20℃Methanol was used as

12、extract solutions for 30 minutes. Whit the comparison of (R,S)-epigoitrin,and the Methanol:0.02%Phosphoric acid solution(7:93)the mobile phase and the flow rate was 0.8ml/min,the content of (R,S)-epigoitrin was detected

13、in 242nm </p><p>　　Keywords: Pudilan xiaoyan Tablets；(R,S)-epigoitrin；HPLC；Determination of content</p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　1.1蒲地藍消炎片及板藍根概況</p><p>　　蒲

14、地藍消炎片由黃芩、蒲公英、苦地丁、板藍根組成，具有清熱解毒，抗炎消腫的功效，主要用于治療癤腫、淋巴腺炎、腮腺炎、咽炎、扁桃體炎等，廣譜抗菌，抗病毒、抗炎癥、增強肌體免疫力功能及調(diào)節(jié)能力、有助于感染性疾病的治療。據(jù)文獻報道，復(fù)方中黃芩所含的黃酮類成分蒲公英所含的咖啡酸、綠原酸以及板藍根所含的腺苷和(R,S)-告依春可能是該制劑的主要活性成分。國家藥品標準( 試行)[YBZ12702005]中以測定蒲地藍消炎片中黃芩苷的含量為其質(zhì)量控制指標

15、;蒲地藍消炎片中咖啡酸、綠原酸的含量測定方法也已均有相關(guān)的文獻報道，在蒲地藍消炎片中起重要作用的板藍根藥材只有關(guān)于腺苷的含量測定方法[1-5]。板藍根為十字花科植物菘藍的干燥根，具有涼血利咽、清熱解毒等功效，臨床上常用于病毒及細菌感染性疾病，尤其在抗病毒方面療效確切[6]，在蒲地藍消炎片中是不可或缺的重要成份。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為“熱毒”是由火熱旺盛所致，多數(shù)體現(xiàn)在溫熱病和熱毒熾盛癥，都為里熱。中醫(yī)臨床中的“里熱證”主要包括現(xiàn)代醫(yī)學的多種急

16、性傳染、感染性的熱性疾病。清熱解毒藥的藥理作用主要有以下幾個方面: ①抗病原微生物作用; ②抗細菌內(nèi)毒素作用; ③抗炎</p><p>　　現(xiàn)代藥理學研究表明,板藍根抗病毒作用的有效部位為總生物堿,并從中分離得到有效單體成分（R,S）-告依春。隨著人們對板藍根中抗病毒活性成分進行越來越多的研究,已經(jīng)證明（R,S）-告依春為板藍根抗流感病毒的有效成分之一。</p><p>　　1.2（R,S

17、）-告依春的研究 </p><p>　　最新版的《中國藥典》2010年版一部中對于板藍根藥材的質(zhì)量控制是（R,S）-告依春成分的含量測定[1]，可見（R,S）-告依春是板藍根藥材中的主要成分。過去認為靛藍、靛玉紅等成分為板藍根抗病毒的有效成分，但現(xiàn)有的研究表明靛藍、靛玉紅沒有抗病毒活性，而（R,S）-告依春等成分具有顯著的抗病毒活性，故（R,S）-告依春的含量是反映板藍根顆粒質(zhì)量的一個重要指標[6]。</p

18、><p>　　近年來國內(nèi)外對板藍根的清熱解毒功效物質(zhì)及機制日益增多。如研究板藍根水提物、醇提物、總生物堿可知其具有較強抗流感病毒作用，且作用強度相近; 靛玉紅無抗流感病毒作用，喹唑二酮略有抗流感病毒作用，（R,S）-告依春及總生物堿提取物有明顯的抗流感病毒作用且二者作用強度相當[7]。</p><p>　　吳靜等[2]采用加水水浴加熱提取法提取板藍根流浸膏中的（R,S）-告依春，并通過HPLC

19、法測定（R,S）-告依春的含量。確定最佳條件為：提取時間為30min，提取溫度為80℃，水量：50ml，流動相：甲醇－0.02%磷酸（7:93），檢測波長：245nm，色譜柱：Agilent XDB-C18 150mm，進樣量：10uL。</p><p>　　范春芳等[3]采用超聲提取法提取板藍根顆粒中（R,S）-告依春，并通過HPLC法測定（R,S）-告依春的含量。確定最佳條件為：提取時間為30min，，水量：

20、25ml，流動相：乙腈∶0.1％磷酸水=10∶90，檢測波長：245nm，柱溫：30℃色譜柱：Hypersil ODS2 柱（250mm×4.6 mm，5 μm），進樣量：10uL，流速：1.0 ml/min。</p><p>　　中成藥成分的定量檢測方法主要有：HPLC法、可見分光光度法、和紫外分光光度法等。HPLC是目前中成藥含量測定應(yīng)用尤為廣泛的一種檢測方法。本論文采用HPLC測定法測定（R,S）

21、-告依春的含量[8-9]。</p><p>　　1.3本論文研究的意義 </p><p>　　為完善藥品的質(zhì)量控制，本文參考相關(guān)文獻資料，采用高效液相色譜法對蒲地藍消炎片中（R,S）-告依春成分進行定性定量分析，建立蒲地藍消炎片中(R,S)-告依春成分提取及含量測定的方法，以期為蒲地藍消炎片中板藍根的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。</p><p><b>　　2

22、材料與儀器</b></p><p><b>　　2.1 試劑與試藥</b></p><p><b>　　2.2 儀器</b></p><p><b>　　3 方法</b></p><p>　　3.1（R,S）-告依春含量測定方法</p><p&g

23、t;　　3.1.1 色譜條件</p><p>　　色譜柱：⑦COSMOSIL nacalai tesque The quality for certainty 38020-41 5C18-MS-II 4.6ID×250MM；流動相：甲醇-0.02%磷酸溶液（7：93）；流速0.8ml/min；檢測波長：242nm；柱溫：30℃； 進樣量：20μl。理論塔板數(shù)按RS-告依春峰計算不低于4000，(R,S)

24、-告依春峰與相鄰峰的分離度不低于1.5。</p><p>　　3.1.2對照品溶液制備</p><p>　　精密稱取RS-告依春對照0.01014g置100ml,加甲醇溶解稀釋到刻度作為儲備液。</p><p>　　3.1.3供試品溶液制備</p><p>　　取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細，精密稱取約3片重，至具塞錐形瓶中，精密加入

25、甲醇25ml，密塞，精密稱定，加冰袋超聲處理（功率400W，頻率40KH在）30min，取出，放冷，精密稱定，用甲醇補足缺失的重量，搖勻，過濾，用0.45μm微孔濾膜過濾。</p><p>　　3.1.4對照藥材制備</p><p>　　精密稱取板藍根對照藥材約0.5g，精密加入甲醇25ml，密塞，精密稱定，加冰袋超聲處理（功率400W，頻率40KH在）30min，取出，放冷，精密稱定，用

26、甲醇補足缺失的重量，搖勻，過濾，用0.45μm微孔濾膜過濾。</p><p><b>　　3.2方法學考察</b></p><p>　　3.2.1線性關(guān)系考察</p><p>　　取3.1.2對照品溶液，按不同比例加甲醇稀釋成6個不同濃度，以對照品質(zhì)量濃度（μg/ml）為橫坐標（X），以相應(yīng)對照品峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，得線性回歸方程

27、及相關(guān)系數(shù)“y = 167295x + 25282，R2 = 0.9999”。結(jié)果表明：(R,S)-告依春在0～60.84μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見表1及圖1。</p><p>　　表1 線性關(guān)系考察</p><p>　　圖1 線性關(guān)系考察</p><p>　　3.2.2檢測限和定量限</p><p>　　取3.1.2的對照品溶

28、液用甲醇不斷稀釋后分析，分別得到(R,S)-告依春的檢測限（LOD,S/N≈3～4）0.02μg/ml和定量限（LOQ,S/N≈10～12）0.08μg/ml。</p><p>　　3.2.3 精密度試驗</p><p>　　按上述色譜條件，連續(xù)進樣6次，每次20μl，測定RS-告依春峰面積，(R,S)-告依春峰面積平均值為6824885，RSD為0.41%（n=6）。實驗結(jié)果表明，在該條

29、件下(R,S)-告依春精密度表現(xiàn)良好。見表2。</p><p>　　表2 儀器精密度試驗結(jié)果</p><p>　　3.2.4 穩(wěn)定性試驗</p><p>　　取2.2.1對照品溶液，在0、2、4、8、12、16、24h分別進樣20μl，記錄峰面積，結(jié)果7次進樣RS-告依春峰面積平均值為6824137 RSD為1.11%（n=7）.結(jié)果表明(R,S)-告依春在24h內(nèi)

30、穩(wěn)定。見表3。</p><p>　　表3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果</p><p>　　3.2.5 陰性對照試驗</p><p>　　取對照品溶液，供試品溶液，陰性對照溶液，按“3.1.1”項下色譜條件測定，在陰性對照色譜圖中，與(R,S)-告依春對照品色譜相應(yīng)位置的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其它組分對其測定無干擾。見圖2。</p><p>　　圖2

31、 蒲地藍消炎片HPLC圖譜</p><p>　　3.2.6 重復(fù)性試驗</p><p>　　取樣5按“3.1.3”供試品溶液制備方法平行處理5份，進行測定，峰面積代入2.3.1回歸方程中求得每片含(R,S)-告依春為分別為25.7、25.8、25.1、25.7、26.7μg每片，RSD（n=5）為2.14%，結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性良好。</p><p>　　3.2.

32、7 加樣回收率試驗</p><p>　　分別稱取已知含量樣5約1.5片9份，分別加入對照品（3種濃度），每個濃度平行做3份，按3.1.3至“至具塞錐形瓶中…”同法操作，測定峰面積，計算回收率，結(jié)果見表4。</p><p><b>　　表4回收率結(jié)果</b></p><p>　　3.2.8 樣品含量的測定</p><p>

33、　　取不同廠家不同批次蒲地藍消炎片7批，按“3.1.3” 供試品溶液的制備，按“3.1.1”色譜條件進行含量測定，計算各批中(R,S)-告依春的平均每片含量（n=3），結(jié)果見表5。</p><p><b>　　表5 樣品信息</b></p><p>　　3.3 單因素考察方法</p><p>　　3.3.1 (R,S)-告依春的提取</

34、p><p>　　參考《中國藥典》2010年版藥典一部板藍根藥材中(R,S)-告依春的提取方法[1]及國內(nèi)外各種文獻報道[10-13]，比較了幾種提取溶劑及提取方式，方法5提取效率高，方法簡單，過程損耗少，結(jié)果重現(xiàn)性高，確定為實驗方法。見表6。</p><p>　　表6 提取方法比較</p><p>　　3.3.2 檢測波長選擇</p><p>

35、;　　《中國藥典》2010年版藥典一部板藍根藥材中(R,S)-告依春的檢測波長是254nm， 取樣5按“3.1.3”制備供試品，在200～800nm范圍內(nèi)用二極管陣列檢測器對樣品進行全時段全波長掃描，在蒲地藍消炎片中(R,S)-告依春主成分保留時間處的200～800nm全波長掃描顯示在242nm波長處有最大吸收峰，與其它成分的分離度也最佳，綜合考慮選擇242nm為檢測波長。見圖3。</p><p>　　圖3 樣品

36、二極管陣列掃描圖譜</p><p>　　3.3.3 提取溫度的考察</p><p>　　超聲提取時超聲超過5分鐘超聲儀里面的水會開始發(fā)熱，發(fā)熱溫度與時間成正比遞升，比較了加入冰袋與沒有加冰袋超聲30min，發(fā)現(xiàn)沒加冰袋的樣品中(R,S)-告依春比加入冰袋的普遍偏低，所以超聲過程必須加入冰袋。</p><p><b>　　3.3.4 柱溫</b>

37、</p><p>　　分別于20℃、30℃、40℃柱溫下分析樣品溶液，結(jié)果顯示20℃柱溫時樣品中各種成分的分離度不理想，出峰時間延后，RS-告依春塔峰板數(shù)也偏低；30℃與40℃柱溫時(R,S)-告依春峰與相鄰峰分離度達到1.5以上，塔板數(shù)均能達到4千以上，30℃柱溫比較接近室溫，溫度波動不大,容易恒定，為了保證方法的重現(xiàn)性，最終確定柱溫為30℃。</p><p>　　3.3.5 流速的選擇

38、</p><p>　　分別在0.5、0.8、1、1.2ml/min分析樣品，結(jié)果顯示，大于等于1ml/min流速時樣品中各種成份分離度不理想，小于0.8ml/min流速時樣品出峰時間過久，所以選擇0.8ml/min為最理想流速。</p><p><b>　　3.4 結(jié)果</b></p><p>　　3.4.1蒲地藍消炎片中（R,S）-告依春的提

39、取測定方法</p><p>　　根據(jù)（R,S）-告依春的性質(zhì)，考察了提取方法、提取溫度、檢測波長、柱溫、流速5個因素，結(jié)合以上單因素試驗結(jié)果，可以確定提取溶液選擇甲醇，體積為25ml，時間30min，流速為0.8ml/min，柱溫為30℃。在242nm波長處測定為最佳方法。</p><p><b>　　4 討論 </b></p><p>　　4

40、.1 提取條件分析 </p><p>　　4.1.1 蒲地藍消炎片不同提取方法的分析</p><p>　　取蒲地藍消炎片適量，去其包衣并在在研缽中研成細粉。稱重之后，平均分為6份，分別按照表6的提取方法進行提取。由表6可知，采用25ml甲醇超聲30min，蒲地藍消炎片中（R,S）-告依春的溶出效率最佳。</p><p>　　在采用水加熱回流提?。≧,S）-告依春時

41、，溶液會變得非常粘稠而導致過濾效率太慢，而后需改用抽濾才能過濾完整。而用水超聲和甲醇超聲時并不會發(fā)生此類情況。而后測定含量可發(fā)現(xiàn)，用水加熱回流法所得的（R,S）-告依春的含量是最低的。推測有可能（R,S）-告依春在高溫下不穩(wěn)定，易被分解。</p><p>　　4.1.2 提取溫度的影響</p><p>　　在使用25ml甲醇超聲提取蒲地藍消炎片中的（R,S）-告依春時，超聲過程中，由于頻

42、繁震動而導致室溫下的水會升溫。實驗過程中，超聲環(huán)節(jié)需要加入冰袋，使得超聲器中的水保持在室溫。如果不加入冰袋，會導致提取的（R,S）-告依春含量變低。所以，提取過程中，需注意保持室溫下提取。</p><p>　　4.1.3 提取時間的影響</p><p>　　由表6知，使用25ml甲醇超聲1h，所得（R,S）-告依春含量比25ml甲醇超聲30min更高一點。但是考慮到時間成本，以及臨床推廣

43、的實用性。還是選擇超聲30min為最佳提取工藝。</p><p>　　4.2 測定條件分析</p><p>　　4.2.1 檢測波長選擇</p><p>　　查閱《中國藥典》2010年版藥典一部，板藍根藥材中(R,S)-告依春的檢測波長是254nm。而按“3.1.3”法制備的供試品溶液在200～800nm范圍內(nèi)用二極管陣列檢測器對樣品進行全時段全波長掃描，發(fā)現(xiàn)蒲地

44、藍消炎片中(R,S)-告依春主成分保留時間處的200～800nm全波長掃描顯示在242nm波長處有最大吸收峰，與其它成分的分離度也最佳，因此，綜合考慮選擇242nm為檢測波長?？梢妶D2。</p><p>　　4.2.2柱溫的選擇</p><p>　　按“3.1.3”法制備的供試品溶液，用0.45uL微孔濾膜過濾后測定(R,S)-告依春的含量。進樣前設(shè)置柱溫，分別在20℃、30℃、40℃時分

45、析(R,S)-告依春的含量。結(jié)果顯示20℃柱溫時樣品中各種成分的分離度不理想，出峰時間延后，RS-告依春塔峰板數(shù)也偏低；30℃與40℃柱溫時(R,S)-告依春峰與相鄰峰分離度達到1.5以上，塔板數(shù)均能達到4千以上，30℃柱溫比較接近室溫，溫度波動不大容易恒定，為了保證方法的重現(xiàn)性，最終確定柱溫為30℃。</p><p>　　4.2.3流速的選擇</p><p>　　按“3.1.3”法制備的

46、供試品溶液，用0.45uL微孔濾膜過濾后測定(R,S)-告依春的含量。設(shè)置流速，分別在0.5、0.8、1、1.2ml/min分析樣品，結(jié)果顯示，大于等于1ml/min流速時樣品中各成份分離度不理想，而在小于0.8ml/min流速時樣品出峰時間過久，因此選擇0.8ml/min為最理想流速。</p><p><b>　　5 結(jié)論</b></p><p>　　實驗結(jié)果表明，

47、蒲地藍消炎片中(R,S)-告依春的提取及測定方法為采用甲醇提取，體積為25ml，時間30min，流速為0.8ml/min，柱溫為30℃，在242nm波長處檢測。本方法快速簡便，重復(fù)性好，專屬性強，可用于蒲地藍消炎片中（R,S）-告依春的定量檢測。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 國家藥典委員會． 中華人民共和國藥典: 2010

48、 年版一部［S］． 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社，2010: 191</p><p>　　[2]吳靜,陳麗芬. 板藍根顆粒流浸膏（R,S）-告依春的含量測定研究[J].大眾科技，2008，16（180）：107-108.</p><p>　　[3]范春芳,張枚.高效液相色譜法測定板藍根顆粒中表告依春的含量[N].武警后勤學院學報（醫(yī)學版），2012，21（5）：346-348.</p&

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51、;/p><p>　　[9]聶黎行,王鋼力，戴忠等. 手性高效液相色譜法測定板藍根中表告依春和告依春含量[J]. 色譜.2010，10（28）：1001-1004</p><p>　　[10]P.Zou,Y.Hong,H.L.Koh. Chemical fingerprinting of Isatis indigotica root by RP-HPLC and hierarchic

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54、88-691.</p><p><b>　　綜 述</b></p><p><b>　　板藍根的研究進展</b></p><p>　　板藍根（學名：Radix Isatidis.），為十字花科菘藍屬植物菘藍的干燥根，原產(chǎn)于我國，分布于江蘇、廣西、浙江、福建、河南、臺灣等地，目前全國各地均有栽培。板藍根始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》

55、，歷代本草對其均有描述，《本草便讀》載“板藍根即靛青根，入肝胃血分，具清熱、解毒、辟疫、殺蟲之功”。 本品味苦性寒，歸心、肝、胃經(jīng)。具有清熱解毒、涼血利咽的功效。臨床上常用于治療瘟毒發(fā)斑、高熱頭痛、爛喉丹疹、水痘、麻疹、疼腮、喉痹、瘡腫、肝炎、流行性感冒等病癥,其主要的產(chǎn)品為板藍根顆粒沖劑。當前隨著國際上應(yīng)用人然藥物的潮流，板藍根的藥理活性及有效成分得到了深入的研究，并引起了國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注。隨著對板藍根研究的深入, 人們從板藍根中

56、提取分離出了越來越多的化學成分, 并發(fā)現(xiàn)了其中越來越廣泛的藥理作用。其中的水溶性成分具有抗病毒、抗真菌及免疫等功效, 脂溶性成分在其抑菌、抑制血小板凝聚、抗炎、抑制細菌內(nèi)毒素等方面起著十分重要的作用。 [1-3]。板藍根分為北板藍根和南板藍根，北板藍根來源為十字花科植物菘藍的根；南板藍根為爵床科植物馬藍的根莖及根。其性寒，味先微甜后苦澀，具有清熱解毒、預(yù)防感冒、利咽之功</p><p>　　1 板藍根化學成分的研

57、究</p><p>　　板藍根富含吲哚類化合物、有機酸、生物堿類等化合物。王璐璐等[4] 采用正交試驗設(shè)計法分別對板藍根提取物中的水溶性成分及脂溶性成分的工藝進行了研究, 最終采用二次提取法, 既能充分地提取出板藍根中的有效成分, 減少提取過程中有效成分的流失, 又能把水、脂兩種成分進行有效地分離, 以便根據(jù)兩種成分的不同性質(zhì), 更有效地保護板藍根有效成分的完整性, 充分地發(fā)揮其藥效作用。</p>

58、<p>　　Zuo Li等[5] 通過各種色譜技術(shù)進行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定手段的理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)的分析，并且從其中分離鑒定出了十一個化合物。如（R,S）-告依春，腺苷等。</p><p>　　任國萍等[6] 采用2，4-二硝基氟苯柱前衍生法及微波水解-柱前衍生法測定板藍根藥材中10 種游離氨基酸和水解氨基酸的含量，再通過水解氨基酸與游離氨基酸的差值計算出結(jié)合氨基酸的含量。能精確計算出板藍根內(nèi)含量較多且水解

59、前后含量偏差較大的游離氨基酸和結(jié)合氨基酸。</p><p>　　黃家娣[1] 經(jīng)過溶劑法和各種色譜方法從十字花科菘藍屬植物板藍根的抗病毒有效部位中分離得到10 個化合物，通過譜學分析和理化常數(shù)測定并結(jié)合文獻鑒定了其中7 個化合物的化學結(jié)構(gòu)。其中有1 個新化合物和6 個己知化合物。并通過藥理實驗表明，板藍根提取物在體外也具有較強的抗病毒活性。</p><p>　　2 板藍根化學成分提取方法的

60、研究</p><p>　　何立巍等[7]應(yīng)用正交設(shè)計安排試驗因素，以得率和總生物堿量為指標，比較不同工藝條件對板藍根總生物堿的提取純化效果。得出最佳提取工藝為：乙醇體積分數(shù)為80%，提取時間為1 h，溶媒量為12 倍，提取次數(shù)為2 次。大孔吸附樹脂純化板藍根總生物堿最佳工藝條件為: 上樣液pH 為10，上樣液質(zhì)量濃度為1 g /mL，洗脫液( 乙醇) 體積分數(shù)80%。</p><p>　　

61、王璐璐[4]以靛玉紅為板藍根中脂溶性成分的測定指標, HPLC方法測定;以還原糖為其水溶性成分的測定指標, 剩余碘量法測定, 采用正交試驗方法確定提取板藍根水溶性成分及脂溶性成分的最佳提取工藝。并將兩種工藝進行結(jié)合。得出最佳提取工藝為：將板藍根粗粉用雙蒸水浸泡24 h后, 以15倍量的雙蒸水滲漉提取, 流速10滴/min, 板藍根中脂溶性成分的最佳提取工藝為以10倍量的無水乙醇回流提取3次, 每次4 h。結(jié)合兩種工藝, 采用二次提取法,

62、 先采用水滲漉法充分提取板藍根中的水溶性成分, 殘渣干燥后, 采用無水乙醇回流提取脂溶性成分。</p><p>　　3 板藍根藥理作用的研究</p><p>　　板藍根具有清熱、解毒、涼血、利咽的功效。在臨床上板藍根的根莖提取物通過限制病毒分裂而起到對甲型禽流感病毒，乙型禽流感病毒的抑制殺滅作用，其提取物的水溶液對普通感冒病毒有抑制作用。 對流行性乙型腦膜炎病毒有抑制和殺滅作用。</

63、p><p>　　3.1 抗內(nèi)毒素作用</p><p>　　劉云海等[8]提取分離并篩選出F022部位為抗內(nèi)毒素活性部位，初步確認F02207成分為其活性指標成分，并證實F022部分對于內(nèi)毒素誘生炎性介質(zhì)(TN F-α, IL - 6)有抑制作用。陳凱，竇月，陳智等在板藍根抗病毒與抗內(nèi)毒素等清熱解毒藥效作用及化學基礎(chǔ)研究進展[2] 中總結(jié)了板藍根的清熱解毒作用實質(zhì)是抗內(nèi)毒素的外在表現(xiàn)。</

64、p><p>　　黃家娣[1] 從板藍根中分離出31 個化合物，其中3- (2，-羥基苯基)- 4(3H)- 喹唑酮、4( 3H) - 喹唑酮、丁香酸、鄰氨基苯甲酸、水楊酸、苯甲酸具有體外抗內(nèi)毒素活性，丁香酸有半體內(nèi)抗內(nèi)毒素作用。其中，水楊酸( 10umol/L)可顯著抑制LPS 誘導HL - 60 細胞釋放IL- 8，抑制率達82. 67%。采用LPS 預(yù)刺激、LPS 后刺激、LPS 與板藍根多糖同時刺激J744.

65、a. 1 小鼠巨噬細胞株，分離核蛋白，定量分析N F - kB 與DNA 結(jié)合活性，發(fā)現(xiàn)板藍根多糖在上述3 種</p><p>　　情況均可抑制LP5 刺激引起的N F - kB 與DNA 結(jié)合活性的升高。</p><p>　　李楚源等[3]采內(nèi)毒素由細菌產(chǎn)生的能引起恒溫動物體溫異常升高的致熱物質(zhì)。板藍根具有抗大腸桿菌內(nèi)毒素作用。比較發(fā)現(xiàn), 不同地產(chǎn)板藍根抗內(nèi)毒素作用差異顯著, 有的抗內(nèi)毒

66、素作用為0.4U·L-1·g-1, 而較低的只有0.001 U·L-1·g-1?？箖?nèi)毒素活性物質(zhì)為其中的有機酸類, 如3-（2’-羥基苯基）-4-（3H）-喹唑酮、4（3H）一喹唑酮、丁香酸、鄰氨基苯甲酸、水楊酸和苯甲酸等。</p><p><b>　　3.2抗腫瘤作用</b></p><p>　　黃家娣[1] 采用MTT 法測

67、定板藍根二酮B 對人肝癌BEL- 7402 細胞及卵巢癌A2780 細胞的抑制作用，集落形成實驗觀察藥物的誘導分化作用，PCR- ELISA 試劑盒測定細胞的端粒酶活性，結(jié)果顯示：板藍根二酮可抑制肝癌BEL - 7402細胞及卵巢癌A 2780 細胞的增殖，并具有誘導分化、降解低端粒酶活性的表達和逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞向正常細胞轉(zhuǎn)化的能力。采用MTT 法亦證實板藍根高級不飽和脂肪組酸有體外抗人肝癌BEL- 7402 細胞活性，并且還發(fā)現(xiàn)該酸可以致

68、S180 肉瘤的生長，延長H22 腹水型肝癌小鼠的生命。</p><p>　　李楚源等[3]在體外細胞培養(yǎng)時, 板藍根注射液（ψ=50%）對小鼠Friend紅白血病3CL-8細胞有強大的直接殺傷作用, 其最低作用劑量可達1：80, 小鼠注射3CL-8細胞處皮下注射板藍根0.2mL, 每日次,連續(xù)7天, 對實體瘤有一定治療作用, 其中靛玉紅是抗腫瘤的主要活性物質(zhì)。除此之外,MTT 實驗表明, 脂溶性的板藍根二酮對肝

69、癌EL-7402細胞、卵巢癌A-2780細胞具有較強的體外殺傷能力。</p><p><b>　　3.3 抗病毒作用</b></p><p>　　板藍根對多種病毒均有較強的抵抗能力。如流感病毒，孫惠惠等[9]通過研究發(fā)現(xiàn)板藍根可明顯延長甲型H1N1 流感病毒感染小鼠的存活天數(shù)并提高存活率，且對受感染的小鼠的肺組織有一定程度的保護作用。石磊，萬宗明，董堞瑾等[10]也通

70、過研究表明板藍根酸性提取物具有較強的直接抑制流感病毒的作用。</p><p>　　在抵抗其他病毒方面，方建國等[11]研究板藍根及其不同化學部位抑制單純皰疹病毒-Ⅰ( HSV-Ⅰ) 等典型呼吸道病毒對Hep-2細胞感染的作用。結(jié)果表明板藍根各部位在不同質(zhì)量濃度時( 0. 25 ～ 32 g·L-1 ) ，均出現(xiàn)典型的HSV-Ⅰ感染所致CPE，其程度隨藥液濃度增加有所降低，病毒抑制率皆與藥物濃度呈正相關(guān)，

71、顯示板藍根具有直接滅活HSV-Ⅰ的作用。</p><p>　　蔣錫源等[12]采用酶聯(lián)免疫吸附測定法及放射免疫測定法檢測發(fā)現(xiàn)板藍根提取物及板藍根注射液對乙型肝炎表面抗原( HBsAg) 、乙型肝炎病毒e 抗原( HBeAg) 、乙型肝炎病毒的核心抗原( HBcAg) 及HBV-DNA 有顯著的抑制作用，其程度與三氮唑核苷( 25 g·L -1) 、聚肌胞( 0. 5 g·L -1 )相似。&l

72、t;/p><p>　　3.3 板藍根其它方面的作用</p><p>　　黃文玉等[13]通過研究發(fā)現(xiàn)藍根水浸液對金黃色葡萄球菌、流感桿菌、腦膜炎雙球菌等10 種細菌均有抑制作用。而且有研究發(fā)現(xiàn)同屬板藍根中，不同品種的板藍根對金黃色葡萄球菌的殺滅作用并不相同，小葉板藍根明顯優(yōu)于大葉板藍根。</p><p>　　高欣等[14]通過研究發(fā)現(xiàn)板藍根水提醇沉提取物中酸性、中性和兩

73、性化合物抗炎作用不明顯，而堿性化合物和板藍根都具有明顯的抗炎作用。</p><p>　　金明哲等[15]通過研究發(fā)現(xiàn)板藍根70% 乙醇提取液能使脾指數(shù)、T、B 淋巴細胞刺激指數(shù)、RBC-C3bR 花環(huán)陽性率都明顯增高，RBC-IC 花環(huán)陽性率顯著降低，其提高紅細胞免疫系統(tǒng)功能的作用極其顯著。有研究表明板藍根低極性部分對PMN化學發(fā)光部分有雙向免疫活性，濃度低時能產(chǎn)生興奮作用，而濃度高時能產(chǎn)生抑制作用。</p

74、><p>　　4 板藍根的研究展望</p><p>　　查閱文獻可知，板藍根在有機酸、總生物堿等成分中都有比較多的研究，尤其是對總生物堿成分研究更多，而對板藍根總生物堿中的單獨活體成分研究甚少。板藍根臨床應(yīng)用較為廣泛，相關(guān)制劑也很多，然而這些制劑目前都存在生產(chǎn)工藝不穩(wěn)定，制劑質(zhì)量標準較單一的問題。因此，建立板藍根相關(guān)制劑中板藍根質(zhì)量控制的標準是十分必要的。建議在質(zhì)量標準的研究中，應(yīng)更加注重指紋

75、圖譜研究，并選擇能代表板藍根臨床藥效的有效成分為指標，例如4( 3H) 一喹唑酮、水楊酸、(R,S)-告依春等建立質(zhì)量標準。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 黃家娣. 板藍根化學成分和藥理作用綜述[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3（15），197-198.</p><p>　　[2] 陳凱，竇月，陳

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82、<p><b>　　致 謝</b></p><p>　　本論文是在李曉茵老師和王穎芳老師的共同悉心指導與嚴格教誨下完成的，在實驗過程中，兩位老師給予了我細致耐心的指導，專業(yè)的分析。同時，老師的豐富學識，嚴謹?shù)闹螌W精神，嚴格的實驗研究態(tài)度時刻影響著我，這些都在實驗中提供了強有力的幫助。在課題進行過程中，也得到藥檢所同事們的支持與熱心幫助，在此也對他們表示最誠摯的感謝！<