紫甘藍花青素的提取弛化、結(jié)構(gòu)鑒定及其生物學(xué)作用的研究.pdf

1、紫甘藍花青素具有很強的抗氧化作用，具有清除體內(nèi)自由基、抗變異、抗腫瘤、抗過敏、保護胃粘膜等多種功能，引起了國內(nèi)外學(xué)者廣泛關(guān)注。目前，對花青素的研究主要集中于花青素的提取、分離純化、熱穩(wěn)定性、抗氧化性及其生理功能等方面。
　　 本文主要研究了紫甘藍花青素的提取工藝；用大孔樹脂初步純化紫甘藍花青素；對紫甘藍花青素結(jié)構(gòu)進行了初步鑒定，測定了紫甘藍花青素的抗自由基活性；用光譜法研究了矢車菊-3-O-葡萄糖苷(C3G)與牛血清白蛋白(BS

2、A)的結(jié)合機理。
　　 1、采用“溶劑提取、萃取、樹脂純化、薄層色譜”相結(jié)合的方案對紫甘藍花青素進行了分離純化。研究表明：紫甘藍色素的較佳提取條件為：浸提劑為酸性(3.5％的鹽酸)甲醇溶液、浸提溫度為25℃、時間為1h、液固比為30:1(mL：g)，提取兩次。通過考察五種大孔樹脂的靜態(tài)吸附和解吸實驗，選擇合適的大孔樹脂純化紫甘藍色素，優(yōu)化了吸附和解吸條件。結(jié)果表明：D101樹脂為純化紫甘藍色素的較佳樹脂；優(yōu)化的吸附條件：吸附溫度

3、25℃，吸附時間75-90min；優(yōu)化解吸條件：解吸液為70％的乙醇水溶液，解吸時間15-30min，解吸溫度25℃。
　　 2、用聚酰胺薄膜對紫甘藍花青素進行分離純化，對花青素粗品進行了抗羥自由基及抗超氧陰離子自由基活性測定，結(jié)果表明：花青素粗品有抗羥自由基、抗超氧陰離子自由基的能力。相同濃度下，兒茶素對兩種自由基的抑制作用最強，茶多酚次之，紫甘藍色素粗品最弱。對從聚酰胺薄膜展開的四個花青素組分進行測定，結(jié)果表明：各組分對兩種

4、自由基均具有不同程度的抑制作用。在羥基自由基抑制率方面，其平均抑制率是兒茶素的5.7倍，Vc的2.8倍，與C3G對羥基自由基抑制率相當(dāng)；在超氧陰離子自由基抑制方面，平均抑制率是兒茶素的3.9倍，Vc的4.8倍，低于C3G對超氧自由基的抑制率。
　　 3、采用液-質(zhì)聯(lián)用和紫外光譜相結(jié)合的方法對紫甘藍花青素苷元及花青素組分進行的結(jié)構(gòu)鑒定，鑒定出兩種主要苷元，分別是芍藥色素和矢車菊素；鑒定出五種花青素，分別是：矢車菊素-3-O-葡萄糖

5、苷、芥子酰芍藥色素-3-槐糖苷、芥子酰芍藥色素、阿魏酰芍藥色素、芥子酰矢車菊素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷。其中芥子酰芍藥色素和阿魏酰芍藥色素未見報道。
　　 4、在模擬人體生理條件下，用紫外、熒光和同步熒光光譜法研究了矢車菊-3-O-葡萄糖苷(C3G)與牛血清白蛋白(BSA)的相互結(jié)合的分子機理。研究表明：C3G對BSA的熒光猝滅機制為靜態(tài)猝滅。25℃，30℃，37℃下，C3G與BSA的靜態(tài)猝滅速率常數(shù)分別為1.81×104，2

6、.63×104，3.10×104L·mol-1，結(jié)合常數(shù)分別為4.21×104，5.92×104，8.89×104L·mol-1，結(jié)合位點數(shù)為1，C3G對BSA構(gòu)象影響較小。根據(jù)Forster非輻射能量轉(zhuǎn)移機理，C3G與BSA之間的作用距離約為3.29nm，能量轉(zhuǎn)移效率為0.0288。熱力學(xué)分析表明：C3G與BSA的作用力類型為疏水作用。研究了離子強度及溶液極性對C3G與BSA相互作用帶來的影響，結(jié)果表明：隨著離子強度或溶液極性的增加，