黃檗（Phellodendron amurense）叢枝菌根真菌鑒定及菌群結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、黃檗(Phellodendron amurense Rupr.)屬蕓香科闊葉喬木，是我國東北闊葉紅松林的重要伴生樹種，也是東北著名的三大硬闊之一，為珍貴的藥用植物和用材樹種。由于不合理的藥材資源采收和過度采伐，黃檗這一野生資源已處于瀕危狀態(tài)。叢枝菌根(arbuscular mycohizal，AM)真菌是自然界中普遍存在的一種寡營養(yǎng)活體微生物，能與絕大多數(shù)陸生植物根系形成共生體。AM真菌能夠提高植物對營養(yǎng)元素的吸收，促進(jìn)植物生長，改善植

2、物對干旱及毒性污染的耐受性，增強(qiáng)植物的抗病性等。目前，關(guān)于黃檗AM真菌的研究仍處于起步階段，而黃檗AM真菌的鑒定及菌群結(jié)構(gòu)分析國內(nèi)外尚無人問津，我們開展本項(xiàng)研究，擬采用分子生物學(xué)方法鑒定和分析黃檗AM真菌及菌群結(jié)構(gòu)，因此，本項(xiàng)研究不僅對豐富和發(fā)展群落生態(tài)學(xué)具有重要的理論意義，而且對于收集、保護(hù)及利用AM真菌微生物資源，為黃檗菌根功能菌群的研究奠定了基礎(chǔ)。 從東北林業(yè)大學(xué)林場采集黃檗根系及根際土壤，采用堿解離-酸性品紅染色法對黃檗

3、根系進(jìn)行染色，濕篩傾析-蔗糖離心法分離黃檗根際土壤AM真菌孢子。采用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法對分離得到的AM真菌孢子進(jìn)行分類鑒定，并應(yīng)用Nested-PCR技術(shù)檢測根際土壤AM真菌侵染黃檗根系情況。依據(jù)AM真菌孢子形態(tài)特征及25S rDNA D1／D2區(qū)域序列分析鑒定出黃檗根際土壤中存在4種AM真菌：根內(nèi)球囊霉(Glomus intraradices)，摩西球囊霉(Glomus mosseae)，美麗盾孢囊霉(Scutellospora

4、calospora)和變形球囊霉(Glomus versiforme)，而應(yīng)用Nested-PCR技術(shù)從黃檗根內(nèi)只檢測到了G．intraradices，G．mosseae和Scu．calospora，表明G．versiforme未侵染黃檗根系。 同時(shí)，采用Nested-PCR技術(shù)擴(kuò)增黃檗菌根及根際土壤AM真菌18S rDNANS31／Glol區(qū)域，利用該產(chǎn)物優(yōu)化AM真菌DGGE條件，并結(jié)合測序、系統(tǒng)發(fā)育分析及DGGE圖譜分析技術(shù)

5、對黃檗AM真菌菌群結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果表明，Nested-PCR技術(shù)具有較高的靈敏性，可有效的從微量DNA中擴(kuò)增出約230bp的目的片段；AM真菌最佳DGGE條件為：凝膠變性梯度范圍30％-60％，純化后的PCR產(chǎn)物作為DGGE上樣樣品，丙烯酰胺濃度8.0％，電泳電壓130V，電泳時(shí)間8h，電泳溫度60℃；DGGE條帶測序及圖譜分析表明，2種樣品具有不同的DGGE指紋圖譜特征，DGGE帶譜在條帶的數(shù)量、亮度、優(yōu)勢度等方面均存在較大差異；全