油茶內(nèi)生拮抗細(xì)菌Y13定殖動態(tài)及對葉內(nèi)微生物調(diào)整效應(yīng)研究.pdf

1、ColonizationandAdjustedeffectofinoculatingwithAntagonisticStrainsY13onMicrobeinCamelliaoleiferabyWANGRuiqinAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencelnMicrobiologylnCentralSouthUn

2、iversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictChangshaHunan410004，ERCHINASupervisorProfessorZHOUGuoyingMay2014摘要油茶炭疽病(Camelliaoleiferaanthracnose)是我國油茶產(chǎn)區(qū)的主要病害之一，嚴(yán)重影響油茶質(zhì)量和產(chǎn)量。本課題組從健康油茶葉片內(nèi)分離篩選得到一株對油茶炭疽病

3、具有較好防治效果的內(nèi)生拮抗細(xì)菌Y13，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)。菌株Y13對油茶炭疽病病原菌有較強的拮抗作用，盆栽苗木病害防治實驗效果好，，為了更好開發(fā)菌株Y13為生防菌劑，本論文研究Y13在油茶植株體內(nèi)的定殖動態(tài)及其對油茶葉內(nèi)微生物的調(diào)整效應(yīng)，主要研究結(jié)果如下：(1)內(nèi)生拮抗細(xì)菌Y13在油茶植株體內(nèi)定殖動態(tài)研究。采用抗利福平誘導(dǎo)法，篩選出抗利福平濃度為300pg／mL的標(biāo)記菌株Y13R，然后采用灌根法、

4、噴霧法、注射法和刺傷葉片法四種接種方法對油茶苗接種菌株Y13R，并于接種后不同時間段對油茶組織內(nèi)Y13R菌株的定殖量進(jìn)行檢測，結(jié)果表明：標(biāo)記菌株Y13R能通過自然孔口或傷口侵入油茶根莖葉內(nèi)，并在油茶體內(nèi)繁殖和傳導(dǎo)。不同濃度的Y13R菌液均能在油茶體內(nèi)定殖，但隨著Y13R菌液濃度的增加，定殖時間逐漸延長，回收Y13K菌株數(shù)量也相應(yīng)增加，Y13R菌液的最佳接種濃度為109cfu／mL，最佳接種方法為刺傷法。刺傷法接種Y13R菌液在油茶植株體

5、內(nèi)的定殖趨勢為“先增后減最后趨于穩(wěn)定”，接種20d后，Y13R菌株定殖量趨于穩(wěn)定，最終定殖量為359103cfu／g。(2)油茶健株與病株體內(nèi)主要微生物區(qū)系差異的研究。油茶健株與病株體內(nèi)微生物區(qū)系主要由細(xì)菌和真菌兩大類群組成，沒有分離到放線菌。可培養(yǎng)內(nèi)生細(xì)菌主要屬于5個屬的7個已知種，內(nèi)生真菌主要屬于9個屬的7個已知種。油茶健株與病株不同組織內(nèi)生菌的群落組成及優(yōu)勢菌類群有所不同。病株各組織內(nèi)細(xì)菌的種類均多于健株，枯草芽孢桿菌(Bacil

6、lussubtilis)、球形賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillussphaericus)和蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)為油茶健株與病株體內(nèi)所共有的優(yōu)勢細(xì)菌；炭疽芽孢桿菌(Bacillusanthracis)、鞘氨醇單胞菌屬(Sphingomonasspp)和克雷伯氏菌(Klebsiellapneumoniae)為病株特有的優(yōu)勢細(xì)菌。健株體內(nèi)真菌的種類多于病株，尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)、擬莖

7、點霉屬(Phomopsisspp)、芒果球座菌(Guignardiamangiferae)和膠孢炭疽菌(Colletotrichumgloeosporioides)為健株和病株所共有的優(yōu)勢真菌。油茶健株與病株葉片內(nèi)細(xì)菌數(shù)量均顯著高于真菌(P005)。病株葉內(nèi)細(xì)菌的數(shù)量是健株的1122663倍。健株葉片內(nèi)真菌數(shù)量是病株的133240倍。對油茶健株與病株葉內(nèi)微生物群落的多樣性和均勻性進(jìn)行分析，結(jié)果表明健株葉內(nèi)微生物群落多樣性和均勻性程度均高