豬繁殖與呼吸綜合征病毒遺傳變異分析及感染后抗體消長規(guī)律的研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病為特征的傳染病。該病自發(fā)現(xiàn)以來給我國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。近幾年我國大部分地區(qū)夏秋季出現(xiàn)的高熱病，我國農(nóng)業(yè)部2007年確定引起高熱病的主要病原是豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株。 自2006年6月至2008年10月，從河南省各個地區(qū)規(guī)模豬場及散養(yǎng)戶中隨機采集方式收集豬血樣和病料，接種Marc-145細胞，采用RT-PC

2、R方法擴增PRRSV的ORF5和Nsp2基因，共獲得PRRSV的16個ORF5基因和4個Nsp2基因的部分片段，將擴增得到的cDNA片段克隆于PTG19-T載體中，進行序列測定和分析，所獲得的16個ORF5基因序列長度均為603bp，均未發(fā)現(xiàn)有缺失；而所獲得的4株分離株Nsp2的序列均存在缺失，Hn-4、Hn-8和Hn-14缺失的位置同國內(nèi)報道的PRRSV變異株相同，即與本試驗分析所用的HUB1、HUB2、HEB、Jx0612、JXA1

3、和Jxwn06相同，均存在89個缺失，其中3個缺失位點與另外86個缺失位點不連續(xù)，而86個缺失位點卻是連續(xù)的；HB-2有13個氨基酸缺失；而本次分離的毒株Hn-2只有3個核苷酸缺失，其他序列16244B、BJ-4、CH-1a、CC-1、RespRRSMLV和VR-2332的序列均不存在缺失。 序列比較結(jié)果表明所獲得ORF5基因序列核苷酸的同源性為85.6％～99.8％，與VR2332株的同源性為88.6％～99.0％，與LV株的

4、同源性為62.2％～64.8％，表明所獲得序列的流行毒株均屬美洲型。獲得Nsp2基因序列核苷酸的同源性性為80.0％～99.7％，與VR2332株的同源性為80.6％～82.2％，與國內(nèi)所報道的高熱病變異株的同源性為96.0％～99.3％，參考國內(nèi)外已經(jīng)發(fā)表的ORF5基因和Nsp2基因序列，采用分子生物學(xué)軟件繪制了PRRSV的遺傳演化關(guān)系圖。16株分離株中只有Hn-3與疫苗株同源性高，而其它分離株卻與國內(nèi)分離的變異株JXA1、Jx061

5、2、Jxwn06、HUN、HUB1和HUB2等的同源性很高。遺傳演化關(guān)系圖顯示，獲得的流行毒株和國內(nèi)目前使用的疫苗株屬于不同分支，遺傳距離較遠；和國內(nèi)分離的變異株屬于同一分支，有較近的親緣關(guān)系，由此說明所分離的毒株可能是野毒株，不是疫苗株演化而來。 有資料報道，新出現(xiàn)的以Nsp2基因部份缺失為特征的PRRSV對豬是高致病性的，為了弄清我們所分離毒株的致病性，選取Nsp2基因連續(xù)有3個缺失和有89個連續(xù)缺失的兩個毒株Hn-2和Hn