牛α1-抗胰蛋白酶基因多態(tài)性及其與產(chǎn)奶性狀的關(guān)系.pdf

1、α1-抗胰蛋白酶(Alpha1-Antitrypsin，α1-AT)可通過抑制蛋白酶活性從而保護(hù)乳蛋白的完整性。本研究以中國(guó)荷斯坦奶牛為研究對(duì)象，以α1-抗胰蛋白酶基因?yàn)槟膛Ｉa(chǎn)性狀候選基因，采用DNA測(cè)序、PCR-RFLP等技術(shù)，進(jìn)行了該基因單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotide polymorphism，SNP)與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)性分析，以及5'側(cè)翼區(qū)不同單倍型組合對(duì)生產(chǎn)性狀的影響分析，為奶牛繁殖育種提供了一定的理論依據(jù)。研

2、究結(jié)果如下:
　　 1.以294頭中國(guó)荷斯坦牛為研究對(duì)象，擴(kuò)增5'側(cè)翼區(qū)668 bp和999 bp的片斷并進(jìn)行測(cè)序，首次發(fā)現(xiàn):在第3，142 bp處P1和第4，408 bp處P2分別發(fā)生C-T、T-C突變，隨后采用PCR-RFLP方法對(duì)樣本進(jìn)行了檢測(cè)，進(jìn)行遺傳變異和產(chǎn)奶性狀分析。結(jié)果顯示:兩個(gè)位點(diǎn)的等位基因(A/B，E/F)在群體中都有分布，且處于中度多態(tài)。P1位點(diǎn)A和B等位基因的頻率分別為50.34％和49.66％;AA，AB

3、和BB基因型頻率分別為23.81％，53.06％和23.13％;P2位點(diǎn)E和F等位基因的頻率分別為30.61％和69.39％，EE，EF，F(xiàn)F基因型頻率分別為11.90％，37.41％和50.68％.x2適合性檢驗(yàn)表明，該群體在P1位點(diǎn)的突變達(dá)到Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P＞0.05)，在P2位點(diǎn)未達(dá)到平衡.基因與產(chǎn)奶性狀關(guān)聯(lián)分析表明:AB基因型個(gè)體產(chǎn)奶量與脂蛋比顯著高于AA基因型個(gè)體（P＜0.05）;FF基因型個(gè)體乳蛋白率

4、顯著高于EF基因型個(gè)體(P＜0.05）;9種單倍型組合與乳脂率、乳蛋白率、體細(xì)胞數(shù)、產(chǎn)奶量及脂蛋比均存在不同程度的相關(guān)性.
　　 2.以360頭中國(guó)荷斯坦牛為研究對(duì)象，擴(kuò)增該基因5'側(cè)翼區(qū)之外的816bp、926bp、752bp的序列進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)C7646T、C7706A、A8744T、C8935T、C8178T五處突變，除C8178T外均為新發(fā)現(xiàn)的位點(diǎn)。五個(gè)位點(diǎn)的等位基因在群體中都有分布，除C7646T外的四個(gè)位點(diǎn)均呈中度多

5、態(tài)。C7646T處A等位基因頻率為94.69％，處于絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。x2適合性檢驗(yàn)表明，C7706A處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P＞0.05)。在隨后的基因型與生產(chǎn)數(shù)據(jù)的相關(guān)分析中，我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)于C7706A形成的三種基因型，在產(chǎn)奶量上有CC＞CD＞DD，CC與DD差異達(dá)顯著水平(P＜0.05)，體細(xì)胞評(píng)分DD＞CD＞CC，CC與DD差異顯著(P＜0.05);C8935T形成的三種基因型，在乳蛋白率上有MM＞MN＞NN，MM與N

6、N差異顯著(P＜0.05)。
　　 整項(xiàng)研究工作，我們重點(diǎn)關(guān)注了奶牛α1-抗胰蛋白酶基因七處突變位點(diǎn)，除C8178T外均為新發(fā)現(xiàn)的位點(diǎn)。對(duì)七個(gè)位點(diǎn)均進(jìn)行了群體遺傳參數(shù)的分析，并對(duì)C3142T、T4408C多態(tài)性與產(chǎn)奶量、乳蛋白率、乳脂率、脂蛋比做了關(guān)聯(lián)性分析，對(duì)C7706A、C8935T多態(tài)性與產(chǎn)奶量、乳蛋白率、乳脂率、體細(xì)胞評(píng)分做了相關(guān)分析。找到了B、F、C、M四個(gè)對(duì)于奶牛生產(chǎn)指標(biāo)具有有利作用的等位基因，從而作為分子遺傳標(biāo)記為