酵母細胞壁多糖對羅氏沼蝦免疫相關同工酶的影響.pdf

1、我國在水產產業(yè)中占據著舉足輕重的作用,就2003年的海水養(yǎng)殖蝦總產量就已達到了全球總量的31％。但由于集約化養(yǎng)殖的發(fā)展,養(yǎng)殖規(guī)模的盲目擴大和養(yǎng)殖水域的過度開發(fā),破壞了水體生態(tài)平衡,引起病原菌的大量繁殖給我國養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經濟損失。因此采取何種有效的方法來預防控制這些疾病已成為熱點問題。近幾年來免疫多糖類免疫促進劑的研究及應用備受學者們的關注,而酵母細胞壁多糖已經被證明是一種良好的免疫促進劑,它不僅能夠加快蝦蟹免疫器官的發(fā)育,又能激發(fā)

2、機體非特異性免疫反應。因此關于酵母細胞壁多糖在水產養(yǎng)殖實際應用中的給藥方法、適宜使用量及處理時間都是目前研究的熱點。本研究課題采用浸浴和注射兩種給藥方法,分析比較酵母細胞壁多糖在不同濃度和不同時間對羅氏沼蝦體內心臟、肝臟、鰓和肌肉4種組織中酸性磷酸酶(ACP)、過氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)等4種免疫相關同工酶的作用,以進一步探討這種免疫促進劑對羅氏沼蝦體內免疫系統的作用機理,并為酵母細胞壁多糖在蝦

3、類等水產養(yǎng)殖生產實踐中的應用提供參考。
　　 ⑴不同濃度酵母細胞壁多糖浸浴對羅氏沼蝦免疫相關同工酶的影響。將酵母細胞壁多糖配制成0.00mg／L、31.25 mg／L、62.50mg／L、125.00mg／L,和250.00mg／L5個濃度,對羅氏沼蝦進行浸浴處理120h后,通過聚丙烯酰胺凝膠電泳方法及酶活力測定方法來探討酵母細胞壁多糖對羅氏沼蝦心臟、肝臟、鰓和肌肉4種組織中幾種免疫相關同工酶(酸性磷酸酶(ACP),過氧化物酶(

4、POD),多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD))的影響。結果如下:ACP、POD、PPO和SOD4種免疫相關酶在所取得的4種組織中均有分布,且不同組織各種酶的表達不同,具有很明顯的組織特異性。經不同濃度的酵母細胞壁多糖浸浴處理后,羅氏沼蝦4種組織中的ACP等4種同工酶酶譜變化主要表現在酶帶顏色深淺上,無酶帶的新增和缺失現象,各組織中的各同工酶酶帶數保持不變。并且不同濃度的酵母細胞壁多糖浸浴處理明顯提高了羅氏沼蝦體內鰓、肝臟和心

5、臟組織中的ACP酶活力,鰓中的POD和PPO酶活力,心臟和鰓中的SOD酶活力,除鰓中的SOD酶活力在62.50mg／L濃度浸浴時增強作用最顯著外,其余均在125.00mg／L濃度浸浴時增強作用最顯著。因此,本實驗結果表明浸浴酵母細胞壁多糖能明顯提高羅氏沼蝦體內的免疫功能,尤其對鰓中的4種免疫相關酶的增強作用最明顯,且在酵母細胞壁多糖濃度為125.00mg／L效果最佳。
　　 ⑵酵母細胞壁多糖浸浴不同時間對羅氏沼蝦免疫相關同工酶的

6、影響。利用上述實驗確定的最佳濃度(125.00 mg／L)酵母細胞壁多糖作為免疫激活劑對羅氏沼蝦進行浸浴處理,分別在0h、48h、96h、144h和196h取蝦體心臟、肝臟、鰓和肌肉組織,測定其ACP、POD、PPO和SOD的活性并結合聚丙烯酰胺凝膠電泳酶譜分析發(fā)現,經酵母細胞壁多糖浸浴不同時間后,羅氏沼蝦4種組織中的POD、PPO和SOD同工酶圖譜變化主要表現在酶帶顏色深淺上,而ACP酶譜不但在顏色上有一定的變化,在浸浴時間達到144

7、h后,心臟和肝臟組織中均新增了一條ACP-4酶帶。酶活力測定結果與酶譜結果相一致,并且都顯示在浸浴時間達144h后,各組織中的ACP活力,鰓和肝臟中POD活力以及心臟組織中的SOD活力均達到酶活力峰值,與相應對照組具有顯著性差異。鰓和肝臟中PPO雖在浸浴96h后達到酶活力峰值,但在144h時酶活力仍維持較高水平,差異依然顯著。因此本實驗結果表明,對羅氏沼蝦浸浴酵母細胞壁多糖的有效作用時間為96h至144h。
　　 ⑶不同濃度酵母

8、細胞壁多糖注射對羅氏沼蝦免疫相關同工酶的影響。對羅氏沼蝦注射不同濃度(0.0％、1.0％、2.0％和3.0％)的酵母細胞壁多糖溶液0.1ml／尾,72h后取蝦心臟、肝臟、鰓和肌肉組織,測定其ACP、POD、PPO和SOD的活性并結合電泳酶譜來分析研究注射酵母細胞壁多糖對羅氏沼蝦免疫系統的影響。結果發(fā)現,在注射濃度為2.0％時,4種免疫酶活力均有明顯提高,酶帶顏色明顯加深或變寬,尤其在肌肉組織中的變化最顯著,表現為其ACP、PPO和SOD

9、活力均達到峰值,分別為38.995 U／L、0.532U和12.297U／mg,且都與相應對照組差異顯著。心臟組織中的ACP活力和肝臟組織中的POD活力也達到酶活力峰值,分別為89.131 U／L和22.517 Eu／(g.min),也均顯著高于對照組。由此表明,采用2.0％的酵母細胞壁多糖對羅氏沼蝦進行腹腔注射處理效果最佳。
　　 ⑷注射酵母細胞壁多糖不同時間后對羅氏沼蝦免疫相關同工酶的影響。利用上述最佳注射濃度(2.0％)的

10、酵母細胞壁多糖作為免疫激活劑對羅氏沼蝦進行腹腔注射處理,分別在24h,48h,72h,96h和120h取肝臟、心臟和肌肉組織,測定其ACP和POD的活性。結果發(fā)現,心臟和肌肉組織中的ACP活力均在72h后顯著提高且均達到峰值,分別為93.0U／L和34.5 U／L。而肝臟組織中的ACP活力在96h才有明顯提高,達到峰值284U／L。3種組織中的ACP活力自從上升后均一直維持較高水平,直到120h后依然顯著高于對照組(P<0.05)。由過

11、氧化物酶(POD)活性測定數據顯示,經注射酵母細胞壁多糖后,沼蝦心臟和肝臟中的POD活力分別于72h和48h后顯著提高且達到峰值,分別為5.38 Eu／(g.min)和23.16 Eu／(g.min),均顯著高于對照組水平(P<0.05),且兩種組織中的POD活力上升后均維持了24h,分別于96h和72h仍然顯著高于對照組。肌肉組織中的POD酶活力雖有提高但變化不明顯?？傊?實驗結果表明酵母細胞壁多糖可以激活沼蝦的免疫系統,增強其抵抗病

12、毒的能力,并且對沼蝦注射酵母細胞壁多糖48h后就可以起到明顯的免疫增強作用,且可維持至120h。
　　 綜上所述,采用浸浴和注射的方法均能誘導羅氏沼蝦的體液免疫反應,提高各種免疫酶活力,從而增強蝦體防病抗病能力。浸浴的給藥方法對蝦體的作用比較溫和但見效較慢,本實驗用125.00mg／L的酵母細胞壁多糖浸浴羅氏沼蝦96h后才有明顯的免疫增強效果,144h時增強效果最佳；而注射的給藥方法對蝦體的刺激較大但是作用見效相對較快,本實驗用