花生2s蛋白特性及其在萌發(fā)過(guò)程中的動(dòng)員研究.pdf

1、以花生（Arrachis hypogaea L.）汕油523種子為材料，在實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上，對(duì)花生種子2s蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定、組成型分析和胰蛋白酶抑制活性特點(diǎn)進(jìn)行研究，并分析其在萌發(fā)過(guò)程中的動(dòng)員情況。
　　 本文建立了重復(fù)性、穩(wěn)定性高的雙向電泳系統(tǒng)，通過(guò)質(zhì)譜分析鑒定了2s蛋白各組分。2s蛋白均屬于conglutin家族，2s-5、2s-4主要是Ara h2的各種異構(gòu)體，2s-3為Ara h6的各種異構(gòu)體，而2s-2、2s-1

2、可能是Ara h6降解形成的短肽。在天然狀態(tài)下2s蛋白是復(fù)合蛋白，有兩種存在形式。它們分別是由多個(gè)分子量不同的亞基組成的，且是以Ara h2和Ara h6組合的復(fù)合狀態(tài)的形式存在的。2s蛋白在膠內(nèi)活性檢測(cè)中呈現(xiàn)兩條明顯的胰蛋白酶抑制條帶，其中第二條帶的抑制活性較第一條帶的抑制活性強(qiáng)，揭示了2s蛋白的亞基組合狀態(tài)對(duì)其抑制活性的強(qiáng)弱是有影響的。而在亞基狀態(tài)下，只有低分子量的2s蛋白才表現(xiàn)出抑制活性。還原劑導(dǎo)致2s蛋白易被降解和抑制活性的降低

3、或完全喪失，表明二硫鍵對(duì)2s蛋白構(gòu)象和抑制活性的保持具有重要作用。牛胰蛋白酶和重組人胰蛋白酶消化實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步提示了二硫鍵對(duì)2s蛋白構(gòu)象和抑制活性維持的重要性，同時(shí)也進(jìn)一步揭示了2s-2、2s-1可能是通過(guò)酶解產(chǎn)生的短肽。
　　 對(duì)萌發(fā)過(guò)程中花生子葉2s蛋白動(dòng)員情況進(jìn)行研究表明，2s含量隨著種子萌發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)，其含量急劇下降。其中有兩個(gè)比較關(guān)鍵的時(shí)期，一個(gè)時(shí)期是萌發(fā)0～4 d，另一個(gè)時(shí)期是萌發(fā)6～12 d。第一個(gè)時(shí)期，2s蛋白被迅速

4、動(dòng)員，尤其是萌發(fā)2～4 d，降解速率較大，萌發(fā)4d后2s蛋白就幾乎被動(dòng)員完畢。隨著花生種子的萌發(fā)，2s蛋白被逐漸降解，不管在天然狀態(tài)還是亞基狀態(tài)，其胰蛋白酶抑制活性也逐漸被削弱甚至消失，降解產(chǎn)生的新片段也無(wú)抑制活性。通過(guò)雙向電泳分析表明，在花生萌發(fā)0-4 d期間，2s-5兩個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)最早被動(dòng)員，呈現(xiàn)不斷下降的態(tài)勢(shì)。2s-4、2s-3各蛋白質(zhì)點(diǎn)表現(xiàn)出在萌發(fā)初期（0～2 d），先有所增加，而后隨著種子吸脹的加?。?～4 d），呈比較明顯的下