兩種淡水龜微衛(wèi)星標(biāo)記的篩選及烏龜養(yǎng)殖群體遺傳多樣性分析.pdf

1、烏龜(Chinemys reevesii)是我國(guó)的廣布種,國(guó)外分布于日本和朝鮮,具有很高的食用和藥用價(jià)值,其人工養(yǎng)殖在我國(guó)非常廣泛。黃喉擬水龜(Mauremysmutica)是我國(guó)南方常見龜類之一,國(guó)外分布于越南和日本,是培植綠毛龜?shù)膬?yōu)選品種,集美食、保健、藥用與觀賞于一身,受到消費(fèi)者青睞,是當(dāng)前龜類養(yǎng)殖的熱門品種之一。由于生態(tài)平衡破壞、農(nóng)藥大量使用及人為濫捕等因素的影響,兩種淡水龜類的野生資源明顯減少,種質(zhì)資源也面臨著嚴(yán)重危機(jī)。烏龜在

2、中國(guó)紅皮書中被列為依賴保護(hù),在IUCN和中國(guó)物種紅色名錄中被列為瀕危(EN)等級(jí)；黃喉擬水龜在中國(guó)紅皮書、中國(guó)物種紅色名錄以及IUCN中,都被列為瀕危等級(jí)。
　　 烏龜和黃喉擬水龜都是我國(guó)龜類養(yǎng)殖的熱門品種,帶動(dòng)了我國(guó)地區(qū)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。另外,對(duì)于不存在“家化”問題的淡水龜來說,人工養(yǎng)殖就是一種遷地保護(hù),這在很大程度上保護(hù)了野生龜資源。目前為止,人們對(duì)這兩種龜類的種質(zhì)資源尚不清楚,也缺乏遺傳方面的信息。這與野生龜資源急劇減少、人工養(yǎng)

3、殖迅猛發(fā)展的趨勢(shì)相比,理論方面的研究明顯不能滿足生產(chǎn)實(shí)踐的需要,這不僅阻礙了對(duì)該物種野生資源的有效保護(hù),而且也極大地制約了其規(guī)?；B(yǎng)殖和產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)通過磁珠富集法和FIASCO法對(duì)兩種淡水龜進(jìn)行了微衛(wèi)星標(biāo)記的開發(fā),并對(duì)烏龜養(yǎng)殖群體進(jìn)行了遺傳多樣性分析,以期能夠?yàn)槠浔Ｗo(hù)和養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.利用磁珠富集法成功篩選出8個(gè)具有多態(tài)性的烏龜微衛(wèi)星位點(diǎn)。這8個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的等位基因數(shù)(NA)從

4、7到17個(gè)不等(平均10.88),觀測(cè)雜合度(Ho)和期望雜合度(HE)的范圍分別為0.321-0.966和0.703-0.920。
　　 經(jīng)過連續(xù)的Bonferroni校正,有3個(gè)位點(diǎn)顯著偏離了哈迪-溫伯格平衡(Cre9,Cre37,Cre46),通過MICRO-CHECKER軟件分析推測(cè)該偏離是由無效等位基因引起。在連鎖不平衡檢測(cè)當(dāng)中,所有位點(diǎn)都是獨(dú)立的,
　　 不存在連鎖的現(xiàn)象,表明篩選出來的微衛(wèi)星位點(diǎn)能夠單獨(dú)利用

5、,并能夠提供有效的遺傳信息。
　　 2.通過FIASCO法成功篩選出14個(gè)具有高度多態(tài)性的黃喉擬水龜微衛(wèi)星位點(diǎn)。等位基因數(shù)目(NA)從5到15不等。觀測(cè)雜合度(Ho)和期望雜合度(HE)的范圍分別為0.448-0.889和0.593-0.923。經(jīng)過連續(xù)的Bonferroni校正,有7個(gè)位點(diǎn)顯著偏離了哈迪-溫伯格平衡(P<0.001)(Mmu3,Mmu4,Mmu7,Mmu8,Mmu9,Mmu.10和Mmu11)。通過MICRO-

6、CHECKER軟件分析得到,這7個(gè)位點(diǎn)的無效等位基因頻率范圍為0.032到0.243。在連鎖不平衡檢測(cè)當(dāng)中,所有位點(diǎn)都獨(dú)立分開,不存在連鎖現(xiàn)象。
　　 3.利用8個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)7個(gè)烏龜養(yǎng)殖群體進(jìn)行了遺傳多樣性水平的檢測(cè)。結(jié)果顯示:7個(gè)群體中共檢測(cè)到等位基因130個(gè),各位點(diǎn)等位基因數(shù)目(NA)為9-26個(gè),平均16.25個(gè)；多態(tài)信息含量為0.57-0.92；觀測(cè)雜合度(Ho)和期望雜合度(HE)分別為0.30-0.87和0.60-

7、0.93,表明這8個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的遺傳多樣性豐富。分子變異方差分析(AMOVA)表明,5.91％的分化存在于群體間,84.29％的分化存在于個(gè)體間。雖然烏龜存在著較高的遺傳多樣性水平和較低的群體間分化程度,但仍存在著明顯的地理變異模式。UPGMA聚類分析得出湖北荊州(HBJZ)自聚為一支；湖南益陽(yáng)(HNYY),湖南漢壽(HNHS),江蘇蘇州(JSSZ),上海(SH),浙江海寧(ZJHN),江西弋陽(yáng)(JXYY)聚為另一支。其中湖北荊州(HB