不同季節(jié)不同生境下茶樹(shù)內(nèi)生真菌的多樣性分析.pdf

1、內(nèi)生真菌物種豐富且數(shù)量龐大，而且與其它生物之間具有緊密的生態(tài)關(guān)系，同時(shí)也是天然活性物質(zhì)的潛在來(lái)源。近年來(lái)，植物內(nèi)生真菌引起人們的廣泛關(guān)注，成為目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。相對(duì)于其他植物內(nèi)生真菌的研究情況，茶樹(shù)作為重要的經(jīng)濟(jì)作物，其內(nèi)生真菌的研究起步相對(duì)較晚。本研究以茶樹(shù)無(wú)性系品種龍井茶葉為材料，結(jié)合對(duì)真菌ITS區(qū)段的分子鑒定，首次對(duì)茶樹(shù)內(nèi)生真菌在不同生境、不同季節(jié)和不同的分離部位的種類(lèi)與多樣性進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，并分離鑒定出3個(gè)真菌新種

2、與1個(gè)茶樹(shù)內(nèi)生真菌的新記錄種。得到了茶樹(shù)內(nèi)生真菌16屬21種的ITS完整序列，并對(duì)茶樹(shù)內(nèi)生真菌的泌酸性進(jìn)行了初步的分析。主要研究成果如下：
　　 ⑴對(duì)內(nèi)生真菌的分離方法進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：僅使用酒精并不能對(duì)用于進(jìn)行內(nèi)生真菌分離的樣品完成表面消毒，而傳統(tǒng)使用升汞的滅菌方法的污染率控制很好，內(nèi)生真菌的分離能夠達(dá)到較好的效果。濃度為1.5％次氯酸鈉溶液是升汞的較好替代品，在1.5％次氯酸鈉溶液中，葉片浸泡3 min，莖段浸泡8 mi

3、n即可達(dá)到較好的消毒效果。實(shí)驗(yàn)中所采用的樣本接種方法對(duì)真菌可分離種類(lèi)和數(shù)量不存在顯著影響，但切口與培養(yǎng)基接觸面積大的接種方式能夠使菌落生長(zhǎng)更開(kāi)展，從而有利于實(shí)驗(yàn)的后續(xù)進(jìn)行。
　　 ⑵本研究中分離得到的Melanconia sp.和Pleosporales sp.由于與其他已知真菌在ITS區(qū)段上存在較大差距，可能是與茶樹(shù)協(xié)同進(jìn)化的專(zhuān)性?xún)?nèi)生真菌種類(lèi)，在這里鑒定為新種。長(zhǎng)盤(pán)孢屬真菌Glomerella sp.經(jīng)鑒定與已知長(zhǎng)盤(pán)孢屬其他真

4、菌ITS區(qū)段差別在3％以上，也可以鑒定為新種。而座堅(jiān)殼屬真菌Rosellinia sp.則在茶樹(shù)內(nèi)生真菌中屬首次分離得到。
　　 ⑶茶樹(shù)內(nèi)生真菌的最大優(yōu)勢(shì)種為莖點(diǎn)霉屬Phoma真菌茶莖點(diǎn)霉Phomopsis sp4.，其次為盤(pán)長(zhǎng)孢屬Gloeosporium的茶盤(pán)孢菌Glomerella sp.。此外脈孢菌屬Neurospora的粗壯脈紋胞菌Neurospora crassa和盤(pán)長(zhǎng)孢屬Gloeosporium的膠孢炭疽菌Colle

5、totrichum gloeosporioides也是茶樹(shù)的優(yōu)勢(shì)內(nèi)生真菌種。而假尾孢屬Pseudocercospora的柿假尾孢Pseudocercospora kaki，擬莖點(diǎn)霉屬Phomopsis的Phomopsis sp1.和Phomopsis sp3.則為茶樹(shù)內(nèi)生真菌中的偶然種。
　　 ⑷林下茶園相對(duì)于非林下茶園有著更好的物種多樣性和更加良好的物種豐富度。但兩者的均勻度指數(shù)相近，兩者的種群也處于極高相似度水平。
　

6、　 ⑸在春季葉片和莖段的物種多樣性均好于冬季和秋季，冬季則略好于秋季，這一差別在莖段中更為明顯。葉片普遍比莖段有著更好的物種多樣性，但是這也不排除莖段中部分優(yōu)勢(shì)種在培養(yǎng)基中的長(zhǎng)勢(shì)過(guò)快，從而抑制了某些長(zhǎng)勢(shì)弱的真菌，導(dǎo)致了分離到的真菌種類(lèi)偏少的結(jié)果。從均勻度指數(shù)來(lái)看，葉片和莖段在冬季均有較高的均勻度，而春季次之，秋季最低。各個(gè)季節(jié)內(nèi)，葉片的均勻度指數(shù)均略高于莖段。
　　 ⑹春茶采摘時(shí)期，茶樹(shù)莖、芽、葉中的內(nèi)生真菌群落相似性較低，可

7、能與內(nèi)生真菌的定植和轉(zhuǎn)移分別發(fā)生在不同的季節(jié)有關(guān)。
　　 ⑺不同的內(nèi)生真菌在茶樹(shù)的各部位存在一定的組織專(zhuān)化性。茶樹(shù)內(nèi)生芒果球座菌Guignardia mangiferae、綠色木霉Trichoderma viride、菌核青霉Penicilliumsclerotiorum和新發(fā)現(xiàn)種Pleosporales sp.在葉片中表現(xiàn)出較強(qiáng)的偏好性，而茶莖點(diǎn)霉Phomopsis sp4.、膠孢炭疽菌Colletotrichum gloeo

8、sporioides、棒形擬盤(pán)多毛孢Pestalotiopsis clavispora、茶盤(pán)孢菌Glomerella sp.和粗壯脈紋胞菌Neurosporacrassa則表現(xiàn)出較強(qiáng)的莖段偏好性。
　　 ⑻不同的內(nèi)生真菌對(duì)PDA液態(tài)培養(yǎng)基的pH值有不同的影響。但大多數(shù)真菌在培養(yǎng)的過(guò)程中會(huì)加重培養(yǎng)基的酸化，導(dǎo)致酸化最為嚴(yán)重的真菌菌株JF07和JF02屬于新種Melanconia sp.，YZ01和YZ02則是菌核青霉Penicil

9、lium sclerotiorum。相對(duì)與CK而言能夠較大提高pH值的幾個(gè)菌株分別是膠孢炭疽菌Colletotrichumgloeosporioides的菌株JF04，Phomopsis sp2.的菌株EF3和EF6，尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum的菌株JZ02，球毛殼菌Chaetomium globosum的菌株EF9，串珠狀赤霉Gibberella moniliformis的菌株ZH01，以及圍小從殼菌Glomere