阿散酸對仔豬肝臟蛋白質表達的影響.pdf

1、有機砷制劑(如阿散酸等)作為飼料添加劑已經(jīng)得到廣泛應用。動物對砷有蓄積作用,長期飼喂阿散酸,不僅會導致動物源性食品中砷含量殘留超標,而且引發(fā)土壤生態(tài)污染。動物性食品的獸藥殘留問題已經(jīng)引起了國內外的廣泛關注,但現(xiàn)有的研究主要集中在獸藥殘留的快速篩選、檢測等驗證性的分析方法上,對獸藥殘留在畜禽體內引發(fā)各種變化的生物學機制目前仍缺乏足夠和有效的研究。蛋白質組學的研究成為探索生物體各種動態(tài)的生物學機制的有效手段,雙向電泳和質譜技術作為蛋白質組學

2、分析的重要工具,可以直觀快速地發(fā)現(xiàn)蛋白質表達的差異和變化。
　　 本實驗運用雙向電泳技術對仔豬肝臟的蛋白質表達譜進行分析,以探索阿散酸在豬體內作用的生物學機制,及對豬的影響。期望能夠直觀地反映有機砷制劑在畜禽體內的代謝情況以及控制該獸藥在豬飼養(yǎng)過程中的科學應用提供新的思路。
　　 1、分別對豬肝臟的電泳參數(shù)、樣品處理、染色方法、凝膠孔徑、蛋白上樣量、IPG膠條的選擇等方面對雙向電泳體系進行了優(yōu)化,建立了豬肝臟蛋白質的雙向

3、電泳體系。確定雙向電泳條件為:超速離心法,Clean up試劑盒處理,17 cm pH5-8 IPG膠條,樣品蛋白上樣量120μ L。經(jīng)上述條件優(yōu)化后,建立的雙向電泳圖譜的重復性良好,匹配率達到76％±1.7％,蛋白點有1412±8個,已經(jīng)達到后續(xù)實驗分析的要求。
　　 2、參照全盲法,對各種不同的豬肝臟樣品進行準確性和重復性試驗,樣品的匹配率都在70％以上,且圖譜中蛋白點的相對遷移率都在實驗室的控制標準之內,可以篩選出既具有統(tǒng)

4、計學意義又具有量分析意義的蛋白點,也可以用于區(qū)分不同的豬肝臟樣品。表明本實驗建立的豬肝臟蛋白質雙向電泳體系能滿足不同豬肝臟樣品的雙向電泳分析。
　　 3、單因子完全隨機化實驗下阿散酸對仔豬肝臟蛋白質的影響。得到了具有重復性和穩(wěn)定性良好的仔豬肝臟蛋白質雙向電泳圖譜,針對實驗組和對照組仔豬肝臟蛋白質雙向電泳表達圖譜比較,用PDQuest軟件進行差異分析,結果得到兼具統(tǒng)計學意義和分析意義的差異蛋白點共13個,均為上調蛋白質。
　

5、　 4、對實驗組和對照組仔豬肝臟蛋白質雙向電泳圖的13個差異蛋白點進行質譜MS+MS/MS分析,用MASCOT軟件搜索與之相匹配的蛋白質,成功鑒定12個點,得到10種蛋白質,分別為分別為ChainB,Refined1.8 Angstroms Resolution Crystal Structure Of PorcineEpsilon-Trypsin,Rho GDP dissociation inhibitor alpha,PREDIC

6、TED:hypothetical protein LOC100512997,PREDICTED:26S proteasomenon-ATPase regulatory subunit13-like,PREDICTED:LOW QUALITYPROTEIN:heat shock cognate71kDa protein-like.PREDICTED:synapticvesicle membrane protein VAT-1.cytosk