梨樹主要病害的分子檢測及其生物化學協(xié)同控制研究.pdf

1、梨黑斑病、梨輪紋病和梨炭疽病是梨樹三大主要病害，主要為害果實，葉片，也能侵染枝條。三種病害在我國普遍發(fā)生，均曾經(jīng)大范圍流行，造成重大損失。
　　 本文以三種病害為研究對象，建立了一套梨輪紋病和炭疽病的分子檢測體系;測定了市場上常見化學藥劑對三種病害病原菌的室內(nèi)毒力指數(shù);開展微生物-化學復配藥劑田間防治三種病害的試驗;熒光定量PCR監(jiān)測生防菌處理后對梨葉片抗氧化相關(guān)基因的表達豐度，以探明生防機理，為三種病害有效控制提供理論和實踐依

2、據(jù)。主要研究內(nèi)容如下:
　　 采集病樣，分離純化后獲得梨炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)和輪紋病菌(Botryosphaeria berengeriana)菌株各20株，提取菌株基因組DNA。根據(jù)Genebank上炭疽屬和輪紋屬不同小種的ITS序列差異設計兩對引物TJ1/TJ2和LW1/LW2。由此建立的PCR體系可分別從炭疽菌菌株和輪紋菌菌株中擴增出317bp和325bp的特異性條帶，對

3、其他相似或相近的病原真菌則無擴增條帶，表明設計的兩對引物具有較高的種屬?；?。本文還比較了常規(guī)PCR和巢式PCR技術(shù)的靈敏度。常規(guī)PCR技術(shù)檢測梨輪紋病菌基因組DNA的靈敏度為10pg，巢式PCR技術(shù)的靈敏度為100ag，巢式PCR技術(shù)的靈敏度比常規(guī)PCR提高了約105倍。將不同稀釋倍數(shù)(10個/ml、102個/ml、103·個/ml、104·個/ml、105·個/ml)的輪紋病菌孢子懸浮液噴施在梨果上，提取梨果實DNA進行巢式PCR檢

4、測，均能成功地檢測出病原菌。實驗結(jié)果表明:利用巢式PCR技術(shù)，可以準確、靈敏地監(jiān)測梨輪紋病菌在果園的種群消長動態(tài)。
　　 選取市場常見的20種化學藥劑，對黑斑病菌A-1、梨輪紋病菌P-16、炭疽病菌I-1進行室內(nèi)毒力測定。結(jié)果表明，25％丙環(huán)唑乳油能有效抑制梨黑斑病菌、輪紋病菌、炭疽病菌菌絲生長，EC50值分別為0.031μg/ml、0.019μg/ml、0.020μg/ml。此外，10％苯醚甲環(huán)唑可濕性粉劑、25％咪酰胺乳油、

5、40％氟硅唑乳油，30％己唑醇可濕性粉劑等四種藥劑對梨輪紋、黑斑、炭疽病菌均表現(xiàn)出較高毒力，對菌絲的生長抑制作用較強，而50％烯酰嗎啉可濕性粉劑、25％甲霜靈可濕性粉劑、15％三唑酮可濕性粉劑等藥劑對菌絲的生長抑制作用較弱。本文評估了常見20種化學藥劑對梨三大病害的抗藥性風險，為果園的合理施藥提供參考依據(jù)。
　　 目前生產(chǎn)上通常采用化學藥劑防治上述三大病害。這種化學防治果樹病害的方法不僅造成生態(tài)環(huán)境嚴重污染，而且直接增加了有毒化

6、學物質(zhì)在果品中的殘留量，對人類健康帶來危害。生物防治可以降低化學農(nóng)藥的使用量、降低梨果表面化學殺菌劑的殘留量、保護生態(tài)環(huán)境。本研究利用一株對黑斑病、輪紋病和炭疽病均具有良好防治效果的枯草芽孢桿菌sf-628和25％丙環(huán)唑乳油復配(2∶1)防治果樹病害。田間試驗結(jié)果顯示，復配劑、化學藥劑、sf-628對梨輪紋病的平均防治效果分別為86.2％、86.9％、64.9％;對梨炭疽病的平均防治效果分別為80.1％、78.8％、63.0％;對黑斑病

7、的平均防治效果為83.1％、85.8％、77.0％。結(jié)果表明，復配藥劑與常規(guī)使用的化學藥劑防效大致相同，但是只使用1/3的化學藥劑用量，實現(xiàn)生物農(nóng)藥部分替代化學藥劑的作用。
　　 本文采用熒光定量PCR分析了噴施生防菌sf-628茵液后對梨葉片苯丙氨酸解氨酶(PAL)和過氧化氫酶(CAT)基因表達的影響。結(jié)果表明:生防菌液處理能誘導梨樹產(chǎn)生抗性，提高梨葉片內(nèi)部PAL和CAT基因表達水平。Real-time PCR分析結(jié)果表明:噴