豬繁殖與呼吸綜合征病毒兩種快速診斷方法的建立與初步研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的豬的一種高度傳染性疫病，又稱“藍(lán)耳病”，本病以妊娠母豬的繁殖障礙（后期流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、弱胎）及各種年齡豬特別是仔豬的呼吸道疾?。ㄩg質(zhì)性肺炎）為主要特征。該病自從1987年首次在美國發(fā)現(xiàn)以來，迅速傳播至全世界養(yǎng)豬發(fā)達(dá)的國家與地區(qū)，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。

2、　　 本研究主要采用美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒SX-1株作為陽性對照，選取其保守的N蛋白基因中一段高度保守的基因序列為模板，設(shè)計了4條RT-LAMP的檢測引物，通過優(yōu)化反應(yīng)條件，建立了一種快速檢測PRRSV的RT-LAMP診斷方法。特異性和敏感性試驗結(jié)果顯示，該方法能夠特異地檢測美洲型PRRSV，其最低檢測限為1×10-7ng/μL，其敏感性比常規(guī)RT-PCR高104倍，且比較穩(wěn)定，與常規(guī)RT-PCR的符合度達(dá)87％，判定檢測結(jié)果時

3、不需要借助昂貴的儀器設(shè)備，僅需加入1μL橙紅色核酸染料就可以進(jìn)行判斷，顏色變綠判定為陽性，仍保持橙紅色判定為陰性。RT-LAMP可以快速、直觀、準(zhǔn)確地檢測PRRSV，是一種適合豬場現(xiàn)地應(yīng)用的檢測方法。
　　 運用檸檬酸三鈉還原氯金酸方法，制備膠體金顆粒，最終選取直徑約25nm的顆粒作為標(biāo)記物，將純化的PRRSV單抗與膠體金顆粒標(biāo)記，最適標(biāo)記濃度約為12μg/ml，用噴膜儀將其兩者結(jié)合物均勻噴至玻璃纖維膜上，并于硝酸纖維素膜（NC