復(fù)合植物提取物的組方、安全性評價(jià)及其在小鼠上的應(yīng)用研究.pdf

1、植物提取物因含有多種生理活性成分，在動(dòng)物體內(nèi)具有增強(qiáng)免疫、抗氧化、調(diào)節(jié)代謝等多重生理功能，且兼有無殘留和無耐藥性等特點(diǎn)，被公認(rèn)為是飼用抗生素的理想替代品之一。因此本研究針對目前畜禽生產(chǎn)中存在的抗生素耐藥性和藥物殘留等問題，從多種具有較強(qiáng)體外抑菌和抗氧化功能的植物中篩選復(fù)合植物原料，提取后加以組方，進(jìn)一步通過安全性評價(jià)并初步在小鼠上進(jìn)行應(yīng)用研究，為其最終在畜禽健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供科學(xué)基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　 論文主要研究結(jié)果如下:

2、>　　 1.復(fù)合植物原料的遴選、提取及體外抑菌和抗氧化試驗(yàn)
　　 遴選具有較強(qiáng)抑菌和抗氧化活性的艾葉、石榴皮、五味子等17種天然植物原料，利用微波輔助提取法制備上述植物原料的水提物，濃縮至含生藥0.5g/ml，逐一檢測各提取物的體外抑菌和抗氧化活性。抑菌試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果表明，五味子(WWZ)和吳茱萸(WZY)對大腸埃希氏菌C83912、臨床分離菌株鏈球菌和副傷寒沙門氏菌等3種菌株均有較強(qiáng)抑制作用，其中WWZ對上述三種菌株的抑菌率分

3、別為100％，91％和100％，WZY對各菌株的抑制率分別為34％、14％和91％，其它植物提取物的抑菌率均較低或未檢測到抑菌效果?？寡趸囼?yàn)結(jié)果表明石榴皮(SLP)和艾葉(AY)具有較強(qiáng)的抗氧化能力，其對DPPH·自由基的半清除濃度IC50分別為1.64mg/ml和6.19mg/ml，其它各種植物提取物的IC50值均在10.10～152.54mg/ml之間。
　　 2.復(fù)合植物提取物的組方研究與功能活性成分分析
　　

4、根據(jù)上述結(jié)果，選取具有較好抑菌效果的WWZ和WZY及較強(qiáng)抗氧化功能的AY和SLP作為植物組方的原料，采用L9(43)正交組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)，按上述方法分別制備9種復(fù)合植物組方的提取物并測定其體外抑菌率和IC50。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果推導(dǎo)出最優(yōu)植物組方，即組方1(AY∶SLP∶WWZ∶WZY=3∶1∶9∶9)和組方2(AY∶SLP∶WWZ∶WZY=3∶9∶9∶9)。抑菌試驗(yàn)結(jié)果顯示組方1對大腸埃希氏菌C83912、鏈球菌和副傷寒沙門氏菌的最小抑菌濃度M

5、IC分別500、250、250mg/ml，組方2對三種菌株的MIC分別為250、500、500mg/ml。抗氧化試驗(yàn)結(jié)果表明，組方1和組方2的IC50分別為6.46mg/ml和3.63mg/ml。
　　 分別采用Folin-Ciocaileu法、苯酚-硫酸法、NaNO2-Al(NO3)3比色法、電位滴定法檢測組方1和組方2提取物中總酚、總多糖、總黃酮及總有機(jī)酸的含量。各試驗(yàn)結(jié)果顯示，組方1含總酚8.02％、總多糖1.74％、總黃

6、酮10.38％和總有機(jī)酸9.71％;組方2相應(yīng)成分含量分別為10.63％、2.16％、8.02％及7.31％。
　　 3.復(fù)合植物提取物的安全性評價(jià)
　　 參照GB15193.3-2003的要求，采用霍恩氏法并稍作修改對上述2種復(fù)合及4種單方植物提取物進(jìn)行安全性評價(jià)。一次性口服試驗(yàn)結(jié)果表明，分別給予60、600、6000mg·kg-1·bw-1劑量的2種組方及其4種單方提取物未檢測到小鼠半致死量(LD50)，在最大給藥量

7、(6000mg·kg-1·bw-1)下小鼠仍未見明顯中毒癥狀。另選取125只13-15g清潔級ICR雌性小鼠，5只口服生理鹽水為對照組，其余120只隨機(jī)分成6個(gè)處理，分別口服組方1、組方2、艾葉、石榴皮、五味子、吳茱萸，每個(gè)處理設(shè)111、333、1000、3000mg·kg-1·bw-14個(gè)劑量水平，試驗(yàn)期為14d。試驗(yàn)結(jié)果表明各處理組均未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡及明顯中毒癥狀，且組方1和組方2均有提高小鼠日增重和飼料轉(zhuǎn)化率的趨勢，其中以1000m

8、g·kg-1·bw-1劑量組提高幅度最大。
　　 4.復(fù)合植物提取物在小鼠上的應(yīng)用研究
　　 選取80只11-13g的Balb/c雌性小鼠，隨機(jī)分成5組，分別為正常對照組、模型對照組、抗生素組、F1組和F2組。正常對照組小鼠每日灌服生理鹽水并每4d注射一次生理鹽水;模型對照組小鼠每日灌服生理鹽水并每4d注射一次環(huán)磷酰胺制造小鼠免疫抑制模型，前2次環(huán)磷酰胺注射劑量分別為100mg·kg-1·bw-1，第3、4次均為50mg

9、·kg-1·bw-1;抗生素組在模型對照基礎(chǔ)上每日口服50mg·kg-1·bw-1劑量的金霉素代替口服生理鹽水;試驗(yàn)F1和F2組分別在模型對照組基礎(chǔ)上每日口服1000mg·kg-1·bw-1劑量組方1和組方2代替口服生理鹽水。記錄全期采食量和日增重，試驗(yàn)期為14d。試驗(yàn)結(jié)束每組隨機(jī)選取8只進(jìn)行屠宰，收集相關(guān)樣品進(jìn)行免疫指標(biāo)和抗氧化功能研究。結(jié)果表明:①與正常對照組比，模型組小鼠的日增重、飼料轉(zhuǎn)化率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及肝臟過氧化氫酶(C

10、AT)活性與總抗氧化能力(T-AOC)均顯著降低(P＜0.05)，肝臟MDA含量顯著性升高(P＜0.05);②與模型對照組比，F(xiàn)1組和F2組的日增重、飼料轉(zhuǎn)化率及肝臟超氧化物歧化酶(SOD)、CAT、T-AOC活力均顯著提高(P＜0.05)，肝臟MDA含量顯著性降低(P＜0.05);F1的脾臟指數(shù)顯著提高(P＜0.05)。③與抗生素組相比，F(xiàn)1和F2的日增重、飼料轉(zhuǎn)化率、SOD活性、CAT活性及T-AOC均顯著提高(P＜0.05)，MD

11、A含量均顯著降低(P＜0.05);F1的脾臟指數(shù)顯著提高(P＜0.05)。每組剩余小鼠于第15d腹腔注射大腸桿菌，并繼續(xù)口服相應(yīng)組方，觀察并記錄48h內(nèi)死亡率和腹瀉率。結(jié)果表明，正常對照組、模型對照組、抗生素組、F1和F2組小鼠腹瀉率分別為25％、66.6％、25％、25％和75％，死亡率分別為0％、33.3％、0％、0％和37.5％。
　　 綜上所述，本研究通過體外抑菌和抗氧化試驗(yàn)，獲得由艾葉、石榴皮、五味子、吳茱萸等植物原料