淡水魚類細(xì)胞現(xiàn)采現(xiàn)培技術(shù)的初步建立與關(guān)鍵技術(shù)點(diǎn)研究.pdf

1、依據(jù)患病魚體的組織細(xì)胞就是該疾病病原體的敏感細(xì)胞這一原則,探索一種“現(xiàn)采現(xiàn)培”的細(xì)胞培養(yǎng)法,即采集與患病魚同種類的健康魚組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。
　　 本課題從實(shí)驗(yàn)室布局建設(shè)開始進(jìn)行,以草魚(Ctenopharyngodonidellus)和胡子鯰(clarias.fuscus)的腎臟、吻端組織為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,同時(shí),外購(gòu)細(xì)胞系——CO作為細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)照組。試驗(yàn)結(jié)果表明:外購(gòu)細(xì)胞系,經(jīng)胰酶消化,傳代后細(xì)胞可貼壁且生長(zhǎng)狀態(tài)良好,現(xiàn)已成功傳至16

2、代;試驗(yàn)對(duì)象采用胰酶消化和組織塊法獲得原代細(xì)胞,兩種方法均可獲得大量單一、分散的細(xì)胞,將所得的細(xì)胞通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色,倒置顯微鏡下觀察,計(jì)算后細(xì)胞存活率可高達(dá)92％以上,但按胰酶消化后,通過(guò)6個(gè)方案進(jìn)行培養(yǎng)條件的篩選與優(yōu)化后,細(xì)胞仍未能貼壁;組織塊法所得細(xì)胞可進(jìn)行貼壁培養(yǎng),由于組織塊附近的遷移細(xì)胞過(guò)于密集,發(fā)生接觸抑制,造成部分細(xì)胞狀態(tài)不良,最終細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡以及顆粒狀物質(zhì),細(xì)胞之間空隙增大,裂解為碎片。經(jīng)吹打傳代后,進(jìn)行接種,細(xì)胞難以