利用微衛(wèi)星標記構建壇紫菜品系的DNA指紋圖譜.pdf

1、隨著人類活動的不斷擴大，野生壇紫菜種質資源生存遭受嚴重威脅，優(yōu)良種質日益減少。而栽培壇紫菜也由于缺乏優(yōu)良栽培品種或品系，生產實踐中屢屢出現(xiàn)“白網”、“爛菜”現(xiàn)象，致使養(yǎng)殖戶遭受經濟損失。許多實驗室為了培育壇紫菜優(yōu)良品種或品系，通過對具有優(yōu)良性狀的野生或栽培壇紫菜進行組織、單細胞克隆培養(yǎng)，獲得絲狀體純系進行室內保種。由于壇紫菜葉狀體個體或絲狀體品系間缺乏可靠的形態(tài)學分類特征，所以在一定程度上增加了壇紫菜優(yōu)良品種選育的難度。為此嘗試利用條斑

2、紫菜的EST序列來研究壇紫菜的微衛(wèi)星標記，以期為壇紫菜遺傳育種和分子輔助育種提供一種新的、可靠的輔助方法。 利用壇紫菜葉狀體對幾種常見的紫菜DNA提取方法—SDS裂解法、CTAB法、LiCl法及試劑盒法進行了一個簡單、全面的比較，結果表明提取的DNA量：LiCl法> CTAB法>試劑盒法> SDS裂解法，純度：試劑盒法> CTAB法> LiCl法> SDS裂解法。同時利用兩種試劑盒對壇紫菜絲狀體進行了DNA 提取，發(fā)現(xiàn)其提取效果

3、要遠好于葉狀體。 應用Blast軟件從20,979條條斑紫菜EST序列中篩選微衛(wèi)星位點,共發(fā)現(xiàn)非冗余微衛(wèi)星位點211個，占整個條斑紫菜EST數(shù)據庫的1.01﹪。其中雙堿基重復微衛(wèi)星位點35個，三堿基有176個。從篩選出的微衛(wèi)星位點中設計、合成15對引物，其中11對引物在壇紫菜上獲得了種間轉移擴增。擴增產物的主要條帶經過回收、克隆、測序發(fā)現(xiàn)大部分引物對的條帶都含有與期望一致的微衛(wèi)星重復序列，也有與期望不一致的重復序列，還有些引物對

4、的擴增產物中不含重復序列。 通過對壇紫菜葉狀體的擴增、條帶回收克隆、測序，篩選出6對引物用于6個不同絲狀體品系的DNA指紋圖譜的構建，6個引物對共擴增出40個位點，其中多態(tài)性位點的數(shù)目為37個，比例高達92.50﹪。其中引物組合AU195385和AU191289的5個位點、AV435669和AU187410的6個位點、AU196400和AU1920940的6個位點構建的3個DNA指紋圖均能很好地分開6個不同品系。 根據6