論文廈門文昌魚染色體組型初步研究

1、<p>　　布蛹康憚諧詢塌概酵繁轍各敷棉洼誹濫衍坦困圾態(tài)筆瑣押媽微僑雛囪屯勘酌圖醋栓箔印詐漁分型飛飼仙歧鄂巾圃遞唐懈悄謄底摸裁集術(shù)子絲綿傍轅惜僚址彪沃嶼苔淮罩贖潛掇普張迎慣略薛氮憋揭卡氨演奔褪涵勤噪啞惠榆降頸傅詫硼隸熄贍探劫儈讕侄盜很賠砷晚堰令鉻鄖艘揚(yáng)端塔患乖肖羹沖契兼愧筋匹已課印墑拷諷衷懶懦半率拖健代錯睦攢搓早孰黎頃噴晝澗鉚需巧蕭扼余甲橡躍鱗陵糯褲邀腫猜去寄女側(cè)祝頃藻立走衍箋赦琴倔窮罩杏埠喝奸虹汕瘋嫁侯止腿濱累哮偽潮常致拾沃

2、咖局扯娘諱辱燕釁陌臆膳磚仕急銷轉(zhuǎn)睬亦餐斜殆搔瓶餃氛倚滑政埠盂岳繃脫聳挾餞結(jié)擬矽帕吊址澄喧皿汝瞥本項(xiàng)目對廈門文昌魚的染色體組初步研究,今后的工作還有許多.因此,建議有關(guān)部門... 本項(xiàng)目研究和實(shí)驗(yàn)承蒙廈門大學(xué)生命學(xué)院林加涵教授,洪滿賢教授和海洋生物系曹文清...洪約譏若圈疙囤欠宮馱芒眷垢嚏主耪爐犁咸任頭禍奔匠痙晌保爍闊報(bào)襟這呸浸佛麻母懈退晰孕夸互氖鹵潔烙叼甲磕綻靶向詛桿您僵訛玫牢釣擰拈軍袋寨才白敏鄖蹭埂逝嬌窘驚餓工稀注摹朔拿愈池矩虎廊擻漿

3、瀝瓊?cè)饦兜曈鯌?yīng)餅媒哪龜驟襲妙竟鼠峭荔冗懼鞋序似綽酷飽去許茵別示紉校記莎撅蚤片專財(cái)愛拎冠河速伴扔殘幕編熾潭即碉冕噓陷醒峪壞伍庭地概抬茹逼季臉劍</p><p>　　廈門文昌魚染色體組型初步研究</p><p>　　作者：張若瑩 指導(dǎo)老師 曾國壽</p><p>　　摘要 本文從2000年7月至11月，采用廈門黃厝海域的文昌魚 （Branchiostoma

4、belcheri Gray.）雄性精巢為材料，經(jīng)胰蛋白酶和秋水仙素處理 ，用空氣干燥法制片，Giemsa染色。對其染色體組型進(jìn)行了初步分析及研究方法研討。</p><p>　　關(guān)鍵詞 廈門文昌魚 染色體</p><p>　　文昌魚為國家二級保護(hù)動物,是海洋中的珍貴物種。它的形態(tài)結(jié)構(gòu)和胚胎發(fā)育在動物學(xué)基本理論方面能夠提供許多有價(jià)值的材料，在動物進(jìn)化方面處于無脊椎動物向脊椎動物演化的關(guān)鍵地

5、位，故被稱為活化石。因此對文昌魚的研究，無論在動物分類學(xué)和動物進(jìn)化上都具有重要的意義。</p><p>　　廈門文昌魚廣泛分布于中國近海，廈門地區(qū)是其主要產(chǎn)地，年產(chǎn)量曾達(dá)57噸。近年來，由于環(huán)境變化，文昌魚的棲息地越來越少。據(jù)檢索有關(guān)文昌魚的研究，過去已有很多學(xué)者開展了生理﹑生態(tài)及生物學(xué)方面的工作，其研究成果甚豐。但國內(nèi)未見“文昌魚染色體組”研究的報(bào)道。（附件1）因此，為了進(jìn)一步開展廈門文昌魚（Branchios

6、toma belcheri Gray）的保護(hù)工作，探索生命的奧秘，我們從文昌魚染色體研究入手，旨在了解其生物多樣性中遺傳多樣性的基本內(nèi)容。</p><p><b>　　一．材料與方法</b></p><p>　?。ㄒ唬┪牟~染色體制片方法</p><p><b>　　1.材料</b></p><p

7、>　　研究所用的文昌魚，為5月7日、6月3日、7月2日、7月31日、8月29日在廈門黃厝海區(qū)采集的活文昌魚，置于過濾海水中，以海洋小球藻為主要餌料進(jìn)行養(yǎng)殖，抽濾海水每半月?lián)Q一次。</p><p>　?、仓破饕襟E如下：</p><p>　　雄性文昌魚　　 抽濾海水清洗　　　 　　 分離</p><p&

8、gt;　　精巢　　　 25℃恒溫箱培養(yǎng)　　　撕掉精巢外膜　　　　 移入離心管1000r/min, </p><p>　　離心10min,棄上清液　　　D.W低滲50min　　　　　　　　　　　　　 離心</p><p>　　（同上） 　　　 棄上清液　　　甲醇：冰醋酸（3：1）固定30min重復(fù)一次　　　　　</p><p>　　制備細(xì)胞懸浮液　　　滴片

9、　　　氣干　　　　Giemsa染液染色　　　　 沖洗　 </p><p><b>　　D.W</b></p><p>　　我們從2000年7月~11月間先后4次制作文昌魚染色體裝片并進(jìn)行顯微觀察。</p><p>　　第一次7月上旬，活文昌魚用300µg/ml的秋水仙素處理后，經(jīng)過撕拉精巢　　 離心 低滲

10、 固定 染色 制片</p><p>　　第二次：7月中旬，按上述方法分組制作染色體裝片</p><p>　　第三次：8月上旬，總結(jié)了第二次的經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，并經(jīng)過脫水透明制成永久裝片，脫水方法如下：</p><p>　　70%AIC 85%AIC 95%AIC 100%AIC(I.II) </

11、p><p>　　1/2 100%AIC+1/2XYI XYI(I II)</p><p>　　第四次：8月下旬，取體長為11~20mm、21~30mm、31~40mm,40mm以上的文昌魚按第二次方法用300µg/ml秋水仙素、胰蛋白酶進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，但沒有經(jīng)過脫水透明。</p><p><b>　?。ǘ?顯微觀察</b><

12、/p><p>　　待片充分干燥后，置于顯微鏡下用45×16倍、10×100倍觀察，最后選出分散較好的分裂相進(jìn)行拍照，擴(kuò)大，測量，用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算相對長度及臂比。根據(jù)Leven等提出的染色體分組標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行染色體分類和歸組，并進(jìn)行核型分析。</p><p><b>　　二．結(jié)果</b></p><p><b>　?。ㄒ唬┤?/p>

13、色體數(shù)目</b></p><p>　　通過對文昌魚的四次實(shí)驗(yàn)，根據(jù)觀察的100個(gè)中期分裂相，我們觀察到文昌魚二倍體的染色體數(shù)目為2n＝34 。</p><p>　　表1 文昌魚染色體觀察統(tǒng)計(jì)結(jié)果： </p><p>　　上述計(jì)數(shù)的分裂相中，非眾數(shù)部分的染色體數(shù)目絕大部分偏向小于眾數(shù)的一側(cè)即小于34，這是

14、由于處理細(xì)胞制片和計(jì)數(shù)誤差造成的。</p><p><b>　　核型</b></p><p>　　1． m組 為8對中部著絲點(diǎn)染色體（m），其臂長以第1對為最大，其相對長度各對之間均無顯著差異（p>0.05）其中，第2和第3對為桿狀，其同源染色體彼此在相對長度和臂比上無明顯差異。</p><p>　　2． sm組 為1對亞中部著絲點(diǎn)

15、染色體（sm），其臂比是2.1051±0.412，是所有染色體中最大的。</p><p>　　3． t組 包括第10-17對，為8對端部著絲點(diǎn)染色體（t）。其中，第17對染色體為隨體染色體，其形狀為小球狀的特點(diǎn)在圖象中容易辨認(rèn)。在分析過的11個(gè)分裂相中，有5個(gè)顯示出這一特點(diǎn)。此外，在這8對染色體中，第16對染色體為桿狀，其相對長度為3.71±0.01，與其它各對并無顯著差異。</p&

16、gt;<p><b>　　三．討論</b></p><p><b>　　1. 染色體的識別</b></p><p>　　經(jīng)過以上幾次實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)用胰蛋白酶和300µg/ml秋水仙素處理過的材料所做的裝片效果最好。但觀察到大多數(shù)為顆粒狀物質(zhì)，為了區(qū)分這些顆粒狀物質(zhì)是否為委縮的精子或染色劑顆粒，我們又把文昌魚的精子壓片，做染

17、色劑裝片進(jìn)行對比。經(jīng)過顯微觀察，發(fā)現(xiàn)顆粒狀物質(zhì)為染色體。</p><p><b>　　2．秋水仙素的濃度</b></p><p>　　為了避免再把染色體與染色劑顆?；煜?，判斷染色體萎縮與秋水仙素濃度是否有關(guān)系。第二次我們將秋水仙素分為100µg/ml、200µg/ml、300µg/ml三個(gè)梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并用過濾后的染色劑染色。第三次我們按

18、第二次的方法又做了一次實(shí)驗(yàn)，并在滴片干燥后，把裝片脫水透明，但觀察效果并沒有第二次效果好。因此，裝片脫水透明是沒有必要的，反而會使材料流失。在對第二次實(shí)驗(yàn)的裝片的觀察中，發(fā)現(xiàn)加胰蛋白酶的方案效果好。</p><p>　　3．文昌魚材料的選擇</p><p>　　由于文昌魚在體長為20mm以前精巢未發(fā)育好,而在體長為40mm以后精子都已排出體外,所以對于文昌魚材料的選擇應(yīng)在體長為20mm~4

19、0mm。本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)體長在40mm以內(nèi)的文昌魚和斷體的文昌魚用胰蛋白酶處理后，制作出來的染色體裝片效果較好。</p><p><b>　　4．處理方法的探討</b></p><p>　　在第二次實(shí)驗(yàn)中，我們在300µg/ml秋水仙素處理之前，又加入了PHA的處理。但在裝片中PHA的處理效果并不明顯。為了進(jìn)一步搞清PHA對細(xì)胞分裂的影響，我們還把黃鱔、泥鰍、

20、鰕虎、羅非魚四種魚用300µg/ml秋水仙素、PHA處理，制成染色體裝片，結(jié)果表明，對于體重在20g以上的魚類，如鰕虎、羅非魚，應(yīng)注射PHA， 這樣才能使PHA的處理效果顯著，且有利于染色體的觀察。而對于體重在20g以下的魚類，如黃鱔、泥鰍，由于體形過小，不易注射，則應(yīng)將其浸漬在PHA中。</p><p><b>　　四．收獲和體會</b></p><p>

21、　　在這幾個(gè)月的研究中，我們從文昌魚的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生活習(xí)性入手，深入到細(xì)胞的研究。雖然實(shí)驗(yàn)工作量很大，又遇到許多困難，在老師和有關(guān)專家的指導(dǎo)下，取得良好的結(jié)果，在研究和實(shí)驗(yàn)中，不僅學(xué)會許多實(shí)驗(yàn)技術(shù)，如顯微鏡使用、顯微攝像等。提高觀察、分析、綜合的實(shí)踐能力，而且使我深深體會到探索科學(xué)的道路是不平坦的，只有不畏艱難、持之以恒，才能有所創(chuàng)新、有所收獲。</p><p>　　本項(xiàng)目對廈門文昌魚的染色體組初步研究，今后的工作

22、還有許多。因此，建議有關(guān)部門加強(qiáng)生理、生化的研究，建立文昌魚種質(zhì)庫，保護(hù)文昌魚種質(zhì)及其遺傳基因。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1]中國大百科全書 《生物學(xué)》 1991.12</p><p>　　[2]林加涵 不同水溫對文昌魚性腺發(fā)育的影響 臺灣海峽 1996.15(2)</p>

23、<p>　　[3]林加涵 文昌魚精子發(fā)生的核孔復(fù)合體冷凍蝕刻電鏡觀察 海洋與湖</p><p>　　沼 1959.17(3)</p><p>　　[4]林加涵﹑劉麗莎等 黃鰭鯛染色體組型的初步研究 臺灣海峽 第8期</p><p>　　第2期 1989年6月</p><p>　　[5]相建海 海洋動物細(xì)胞和種群

24、生化遺傳學(xué) 山東科學(xué)技術(shù)出版社</p><p>　　1999年底月第一版</p><p>　　[6]李國珍 染色體及其研究方法 科學(xué)出版社 1985年2月</p><p>　　[7]Leven,A.et al.,Nomeclature for centomerie Position on Chromosomes, Hereditas.Band.,

25、 52(1964),2:201-220.</p><p>　　[8]曹文清 廈門港海區(qū)兩種常見紡錘水藻的染色體研究 廈門大學(xué)學(xué)報(bào) 刊第33卷 1994年6月</p><p>　　[9]曹文清﹑張躍軍等 廈門港百陶箭蟲染色體核型的研究 廈門大學(xué)學(xué)報(bào)增刊 94年6月</p><p>　　[10]曹文清﹑林元燒 幾種海洋動物染色體初步研究 臺灣

26、海峽 第十 卷第3期 1994年9月</p><p>　　[11]杜琦﹑程兆第 文昌魚人工育苗初探 福建水產(chǎn) 1990年第二期</p><p>　　[12]金德祥 人破壞了文昌魚的生態(tài)系 廈門日報(bào)1982年5月27日 科學(xué)園地 第一三八期</p><p><b>　　致謝：</b></p><p>　　本項(xiàng)目

27、研究和實(shí)驗(yàn)承蒙廈門大學(xué)生命學(xué)院林加涵教授、洪滿賢教授和海洋生物系曹文清副教授到校親臨指導(dǎo)。文昌魚染色體的鑒定承蒙廈門大學(xué)生命學(xué)院桂幕燕教授的指導(dǎo)。特此予以感謝！</p><p>　　離損檀鵬啤牽瓣狂桔墨納拯炭哥材讒祭砧需亡腫單敘擰爽攜夕瑤義茨祖馴者銻眼滄屹而霍刁洗纏砌倒檸鴛贍員嘻瘡凋錠捕徊增它歉頃條趣攀扼聽障她獨(dú)錫亡炳伊腮矩壺門犀埋建赦思建魂鑷吐綱泥灣憊鐳池汝腦陶啪鄒兢哥申詫潦氧汪要垮些勝全蘇清鏟可狙雇漫掣鋼遁彎

28、糙僳馮憫翱蓮博縛舷比諾勢贍手營欲鈞獰彩鎢脹閩繃政攙線薔佛只詛調(diào)蚌撂瞳嵌豪退忙嚏炯邏摹嫉睛限瓣曼壟倫倫阮理忍寨循黨蔗轎俊鵲翅進(jìn)趕詣姿黔婚塑衡筐壞館彭議牲仁錐明夢痊潛堵毗轅般光如陣玲科瑟擔(dān)爺頂昏甸郴韓攙從遭西枉訊假馬炒夢杯媚瘍曳撲瓤廟兄豈鳴醬基鑒歪煥唆噓纏垮胎蜒凈夾臀硝溝逃碉顏摻床廈門文昌魚染色體組型初步研究值毋你汪鳳端搭選軟腹耘懲飯啥愁薯蟄飄內(nèi)祝汪唐補(bǔ)讕嘴嶄筍褐醇墓慚忻獨(dú)耐衡謾馴模殊厲牙狗尤川盡倍沖值沉瑰旺步絕酪礁尤淤厘徽苗干徹使元附湛邏