芍藥苷血吸蟲病肝肉芽腫以及纖維化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的干預(yù)

1、<p>　申請代碼：</p><p>　受理部門：</p><p>　收件日期：</p><p>　受理編號：</p><p><b>　　國家自然科學(xué)基金</b></p><p><b>　　申 請 書</b></p><p><b&

2、gt;　　資助類別： </b></p><p><b>　　亞類說明： </b></p><p><b>　　附注說明： </b></p><p><b>　　項目名稱： </b></p><p>　　申 請 者： 電話： <

3、;/p><p><b>　　依托單位： </b></p><p><b>　　通訊地址： </b></p><p>　　郵政編碼： 單位電話： </p><p><b>　　電子郵件： </b></p><p>　　申報日期：

4、 2005年3月12日</p><p>　　國家自然科學(xué)基金委員會</p><p>　　基本信息yoKWT/OQ</p><p>　　項目組主要成員(國家杰出青年科學(xué)基金不填此欄)</p><p>　　說明: 1. 高級、中級、初級、博士后、博士生、碩士生人員數(shù)由申請者負(fù)責(zé)填報，總?cè)藬?shù)自動生成。</p>&l

5、t;p>　　說明: 2. 項目組主要成員不包括項目申請者。</p><p>　　經(jīng)費申請表 （金額單位：萬元）</p><p><b>　　報告正文</b></p><p>　　（一）立項依據(jù)與研究內(nèi)容（4000-8000字）： </p&

6、gt;<p>　　1. 項目的立項依據(jù)（研究意義、國內(nèi)外研究現(xiàn)狀及分析，附主要參考文獻(xiàn)目錄。）</p><p>　　血吸蟲病是熱帶亞熱帶發(fā)展中國家的嚴(yán)重寄生蟲病。據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）報道，該病在全世界74個國家中流行，6億多人口受到威脅，2億多人受到感染，其中1.2億伴有臨床癥狀，2000萬伴有嚴(yán)重后遺癥；全世界每年死于血吸蟲病性肝纖維化及其并發(fā)癥的患者達(dá)50萬-100萬；血吸蟲病在14歲以下的

7、兒童中發(fā)病率之高，嚴(yán)重影響了兒童的智力發(fā)育和身心健康[1]。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有6種血吸蟲引起人類疾病，我國是日本血吸蟲病流行最嚴(yán)重的國家[2]。該病主要分布于我國長江流域及其南部的12個?。▍^(qū)、市），受威脅的人群達(dá)1億以上，感染人數(shù)超過1000萬[2]。目前，我國日本血吸蟲病的流行尚未得到有效控制，湖區(qū)患病人數(shù)急劇增加。該病已成為嚴(yán)重影響我國人民身心健康和國民經(jīng)濟(jì)、社會發(fā)展和穩(wěn)定的主要疾病之一[2]。</p><p>　

8、　血吸蟲病是一種蟲卵肉芽腫引起的慢性免疫性疾病，其病理基礎(chǔ)是沉積于組織內(nèi)大量的成熟蟲卵對機(jī)體的刺激、宿主對活毛蚴分泌的可溶性抗原產(chǎn)生的病理性免疫應(yīng)答，并形成蟲卵肉芽腫和繼發(fā)肝纖維化的形成[2]。肝纖維化是血吸蟲病嚴(yán)重的后果，它可進(jìn)一步導(dǎo)致門靜脈高壓癥如食管胃底靜脈曲張、脾腫大和脾功能亢進(jìn)，最后引發(fā)上消化道大出血導(dǎo)致死亡[2]。日本血吸蟲病肝纖維化/肝硬化及其并發(fā)癥是血吸蟲病患者死亡的主要原因[3]。根據(jù)以上的發(fā)病機(jī)理和病理進(jìn)程，針對日本

9、血吸蟲病的治療應(yīng)包括殺蟲，抑制蟲卵肉芽腫，減輕、延緩甚至阻止纖維化形成等三個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前國內(nèi)外治療血吸蟲病主要采用殺蟲療法（即第一環(huán)節(jié)），尤其是首選吡喹酮為抗血吸蟲病藥物[2, 4]，因此，這就產(chǎn)生了以下問題：第一，吡喹酮只對童蟲、成蟲和組織內(nèi)成熟蟲卵具有殺滅作用，所以，殺蟲治療后肝臟及腸壁組織內(nèi)未成熟蟲卵仍可繼續(xù)發(fā)育，組織蟲卵肉芽腫反應(yīng)仍在繼續(xù)[5, 6]；第二，由于慢性患者（此類患者在血吸蟲感染者中占大多數(shù)）臨床上多無癥狀或只表現(xiàn)

10、為慢性腹瀉而易延誤診斷[2]，結(jié)果往往不能及時使用殺蟲藥，導(dǎo)致肝肉芽腫和纖維化的形成；第三，近年國外已從經(jīng)有效劑量吡喹酮治</p><p>　　日本血吸蟲蟲卵肉芽腫的形成與細(xì)胞及體液免疫有關(guān)，尤其是前者在肉芽腫形成早期起主要作用[2]。血吸蟲尾蚴通過疫水經(jīng)皮膚感染人體，先后經(jīng)過童蟲、成蟲階段，最后主要移行于肝門靜脈和腸系膜靜脈并寄生、產(chǎn)卵。蟲卵隨血流主要沉積于門靜脈分支、肝血竇前，在此，蟲卵內(nèi)成熟的毛蚴分泌可溶性

11、蟲卵抗原（soluble egg antigen,SEA）并經(jīng)卵殼上的微孔滲入肝周圍組織。SEA被周圍組織中的巨噬細(xì)胞吞噬處理，經(jīng)過處理的抗原被遞呈到輔助性的T淋巴細(xì)胞（Th）。同時，攝取了抗原的巨噬細(xì)胞釋放白細(xì)胞介素1（IL-1），激活TH，后者產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，其中促進(jìn)肉芽腫形成的有IL-1、IL-2 、IL-4 、IL-5、IL-13等；抑制肉芽腫形成的有IL-10、IL-2、IFN-γ等；還有各類細(xì)胞趨化因子、移動抑制因子等。在

12、上述各種細(xì)胞因子的共同參與下，大量巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞等聚集到蟲卵周圍形成炎性肉芽腫，隨后肉芽腫中心壞死，形成嗜酸性膿腫，卵內(nèi)毛蚴逐漸死亡，SEA分泌量減少，最終停止，肉芽腫退化并開始局部纖維化，由此可引出嚴(yán)重臨床癥狀[2, 4]。在這些細(xì)胞因子</p><p>　　雖然目前對于血吸蟲性肝纖維化的發(fā)生機(jī)制尚不清楚，但國際上對非血吸蟲病性肝纖維化的發(fā)生機(jī)理研究較多，也較明確

13、。肝纖維化是指肝臟纖維組織過度沉積，是纖維增生和分解不平衡的結(jié)果。反復(fù)或持續(xù)的慢性肝實質(zhì)炎癥、壞死，可使細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM），主要為膠原纖維，合成過多而降解相對不足，從而形成肝纖維化，它是肝硬化的必經(jīng)階段[4]。肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell, HSC）目前被公認(rèn)為是ECM的主要來源細(xì)胞，HSC的激活是肝纖維化形成初始的中心環(huán)節(jié)[4, 11]。所以，研究HSC的激活對探

14、索血吸蟲病肝纖維化發(fā)生機(jī)理及肝纖維化的有效預(yù)防均有特別重要的現(xiàn)實意義。</p><p>　　HSC的激活是一個級聯(lián)反應(yīng)過程，其過程如下[4, 12]：當(dāng)肝臟受到各種損傷時，局部的肝細(xì)胞、枯否細(xì)胞（巨噬細(xì)胞）、竇內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等釋放多種細(xì)胞因子，其中最主要的是血小板源性生長因子（platel et-derived growth factor, PDGF）和轉(zhuǎn)化生長因子β（transformi

15、ng growth factor-β1,TGFβ1）等，它們共同作用于HSC，使其激活。被激活的HSC向肌成纖維細(xì)胞（myofibroblast，MFB）轉(zhuǎn)化，同時表達(dá)大量的平滑肌肌動蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）、多種細(xì)胞因子受體（例如PDGF受體和TGFβ1受體等）、以及Ⅰ、Ⅲ型膠原等ECM成分；并且被激活的HSC自身又激活κ基因結(jié)合核因子（nuclear factor-κ-gene-binding

16、, NFκB）、分泌TGFβ1等細(xì)胞因子。此外，ECM中的Ⅰ型膠原等成分也可激活HSC。因此，一旦HSC被激活，受細(xì)胞旁分泌、自分泌的直接作用及所處環(huán)境膠原的間接作用，HSC活化將逐漸放大并持續(xù)存在，即使除去誘因，活化也將繼續(xù)下去[4]</p><p>　　HSC的激活主要是因為某些細(xì)胞因子作用于該細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路所致，在這些細(xì)胞因子中，研究的最多，也最重要的是PDGF和 TGFβ1[4, 13, 14]因子。

17、</p><p>　　PDGF為HSC最強(qiáng)的促分裂劑[4]?？莘窦?xì)胞（巨噬細(xì)胞）是主要合成PDGF的細(xì)胞。肝臟受損時，枯否細(xì)胞、血小板、竇內(nèi)皮細(xì)胞及激活的HSC均可以分泌PDGF[4]。當(dāng)其與PDGF受體（為酪氨酸蛋白激酶受體）結(jié)合時，促使受體形成二聚體而被激活，隨后受體的酪氨酸殘基發(fā)生自身磷酸化，繼而先后激活Ras、Raf-1、MAPK(mitogen-activated protein kinase)激酶、E

18、RK（extracellular signal-regulated kinase）。ERK向核內(nèi)轉(zhuǎn)位，促進(jìn)有關(guān)轉(zhuǎn)錄因子磷酸化及基因表達(dá)而引起HSC的活化、增殖[4]。 </p><p>　　TGFβ1是一種對細(xì)胞生長、分化和多種生理、病理過程起重要調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子。在肝受損時，TGFβ1由枯否細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、竇內(nèi)皮細(xì)胞及激活的HSC等合成，能促進(jìn)HSC的增殖和基因表達(dá)、抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix meta

19、lloproteinases， MMPs）合成、促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子（tissue inhibitors of MMPs, TIMPs）合成、阻滯ECM的降解、促進(jìn)ECM（例如，Ⅰ、Ⅲ型膠原）的生成。此外，TGFβ1還能增加PDGF對HSC的增殖作用，故TGFβ1被認(rèn)為是最強(qiáng)的促膠原生成因子，在肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4, 13]。TGFβ1通過細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮作用，而Smads是迄今為止發(fā)現(xiàn)的TGFβ1

20、惟一作用底物[4]，故TGFβ1-Smads信號通路對HSC激活、ECM產(chǎn)生的影響引起極大關(guān)注。</p><p>　　Smads是線蟲Sma蛋白以及果蠅Mad蛋白具有同源性的蛋白家族，他們可以將TGFβ1信號直接由細(xì)胞膜受體（為絲/蘇氨酸受體）傳導(dǎo)入細(xì)胞核內(nèi)。根據(jù)Smads功能不同分為三類：第一類是膜受體激活的Smad (R-Smads)，包括Smad2、3等，它們可與TGFβ1受體直接作用，并被磷酸化，之后與S

21、mad4結(jié)合，轉(zhuǎn)位入核以調(diào)節(jié)靶基因轉(zhuǎn)錄；第二類是通用Smad (co-Smad)，目前只有Smad4；第三類是Smad7等，為TGFβ1-Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的抑制因子，可與R-Smads競爭性地結(jié)合受體，阻止R-Smads的磷酸化，從而阻斷TGFβ1的效應(yīng)。 進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)的 Smads復(fù)合物可與不同的轉(zhuǎn)錄活化因子或轉(zhuǎn)錄抑制因子結(jié)合而調(diào)節(jié)TGFβ1的生物效應(yīng)[4, 13]。</p><p>　　總之，因為PDGF

22、、TGFβ1-Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝纖維化發(fā)病中起著舉足輕重的作用，干預(yù)這些信號通路就成為肝纖維化防治的理想選擇。</p><p>　　如前所述，HSC活化時伴有NFκB激活，而NFκB是一種重要的抗凋亡基因轉(zhuǎn)錄因子[15, 16]。當(dāng)HSC處于靜息狀態(tài)時，NFκB與其抑制蛋白結(jié)合，不表現(xiàn)活性，當(dāng)HSC被激活后，NFκB與其抑制蛋白解離而移位入核，誘導(dǎo)產(chǎn)生一組基因產(chǎn)物，它們的協(xié)同作用能抑制TNF-α誘發(fā)的cas

23、pase-8激活從而抑制HSC的凋亡，使HSC持續(xù)活化[17, 18]。</p><p>　　此外，B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（B-cell lymphoma/leukemia-2protein，Bcl-2）家族的成員是細(xì)胞凋亡的主要調(diào)節(jié)因子[19]。Bcl-2蛋白家族細(xì)胞凋亡抑制因子有:Bcl-2、Bcl-XL等；細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子有:Bax等。有實驗顯示[20]，給予抗肝纖維化的藥物，可以使激活的HSC中的B

24、cl-2/Bax比率下調(diào)，從而促進(jìn)HSC凋亡。所以，通過抑制NF-κB活性以及下調(diào)Bcl-2/Bax比率來增加HSC凋亡,可能成為肝纖維化治療的新的靶點之一。</p><p>　　HSC活化后還表達(dá)多種MMPs、TIMPs，從而調(diào)節(jié)ECM的成分和含量，使纖維化不斷持續(xù)發(fā)展。MMPs是一組鋅蛋白酶，共有5類不同的酶蛋白分子，包括膠原酶（MMP1、MMP8、MMP13）、明膠酶（MMP2、MMP9）、基質(zhì)分解素（MM

25、P3、MMP10、MMP11）等5類，它們能水解ECM中的多種成分，例如，其中的膠原酶水解ECM中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原；TIMPs是MMPs天然的體內(nèi)抑制因子，包括TIMP-1～TIMP-4，它們與活化的MMPs分子以1∶1的比例結(jié)合，抑制MMPs活性[4]，尤其是TIMP-1在調(diào)節(jié)膠原水解中起重要作用[21]。此外，TIMP-1還能抑制活化的HSC凋亡[22]。顯然，通過抑制TIMP-1即可以增加ECM中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原的水解，又可以促

26、進(jìn)HSC凋亡。所以，抑制TIMP-1將可能成為肝纖維化治療的又一新的靶點。</p><p>　　以上主要是關(guān)于血吸蟲蟲卵肉芽腫與細(xì)胞因子免疫調(diào)節(jié)的關(guān)系，以及非血吸蟲病性肝纖維化發(fā)生的機(jī)理。但血吸蟲?。ㄓ绕涫侨毡狙x?。┬愿卫w維化發(fā)生機(jī)理如何，至今知之甚少。例如，蟲卵肉芽腫早期淋巴細(xì)胞、枯否細(xì)胞（巨噬細(xì)胞）、嗜酸粒細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子是否作為始動因子促進(jìn)后續(xù)的肝纖維化的進(jìn)程？是否也存在HSC的激活、增殖？從整體、

27、細(xì)胞、蛋白質(zhì)、和核酸分子水平上了解日本血吸蟲病肝纖維化的發(fā)生機(jī)理是本項目研究內(nèi)容之一。</p><p>　　中醫(yī)認(rèn)為，肝纖維化主要因“氣滯血瘀”所致，治療上應(yīng)以活血化瘀、疏肝理氣、抗炎保肝為主[4]。而赤芍具有活血化瘀功效，白芍具有養(yǎng)血保肝、抗炎止痛等作用[23, 24]，所以，臨床治療肝纖維化中藥方劑中，有不少含有赤芍、白芍成分[4]。我們近年來研究發(fā)現(xiàn)，白芍總苷（為白芍的有效部位，其中芍藥苷含量占70%以上）

28、通過清除自由基及減少TGFβ1的生成，對抗人白蛋白所致的免疫性大鼠肝纖維化；此外，白芍總苷可以明顯抑制佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠膝關(guān)節(jié)巨噬細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞的IL-1分泌，并且抑制成纖維樣滑膜細(xì)胞內(nèi)MAPK信號通路中ERK等的磷酸化、減弱成纖維樣滑膜細(xì)胞的增殖。總之，白芍總苷通過對T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、滑膜成纖維細(xì)胞以及自由基、IL-1 、IL-2等的影響而發(fā)揮其抗炎、保肝、抗肝纖維化、以及雙相免疫調(diào)節(jié)等作用。</p><p&

29、gt;　　赤芍（Radix Paeoniae Rubra）和白芍（Radix Paeoniae Alba）均取材于中藥芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）根[23]。芍藥苷（paeoniflorin）是芍藥根的提取物，也是白芍和赤芍的主要活性單體成分[24]。芍藥苷分子結(jié)構(gòu)式為：</p><p>　　其分子式為：C23H28O11 ；分子量為：480.45；熔點：196℃，毒性極低，具有抗炎[

30、25, 26]、抑制血小板凝聚、鎮(zhèn)痛[26]、抗過敏[25]、免疫調(diào)節(jié)[27]等作用。有報道，芍藥苷通過誘導(dǎo)某些淋巴細(xì)胞凋亡、改變淋巴細(xì)胞亞群分布來發(fā)揮其抗炎及免疫調(diào)節(jié)等作用[28]；此外，芍藥苷還通過保護(hù)肝細(xì)胞，同時抑制肝細(xì)胞分泌Ⅳ型膠原等ECM成分來發(fā)揮抗肝纖維化作用[29]。但芍藥苷在蟲卵肉芽腫形成的早期，如何通過免疫調(diào)節(jié)作用，抑制或降低炎性反應(yīng)的強(qiáng)度；而在肝纖維化形成的早期，又如何干預(yù)HSC的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、影響HSC的凋亡，減輕或延

31、緩纖維化的形成，國內(nèi)外尚未見報道。研究藥物在這些方面的作用機(jī)制，對于減輕血吸蟲病的肝臟損害，抑制殺蟲治療后肝臟持續(xù)纖維化過程，具有十分重要的意義。所以，研究中藥芍藥苷對蟲卵肉芽腫炎性反應(yīng)的影響，及其對肝纖維化的作用機(jī)制是本項目研究內(nèi)容之二。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　1. World Health Organisation.

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33、/p><p>　　4. 姚希賢, 徐克成, 編著: 肝纖維化的基礎(chǔ)與臨床. 上海: 上?？萍冀逃霭嫔? 2003: 1-102.</p><p>　　5. Giboda M, Smith JM: Schistosoma mansoni eggs as a target for praziquantel: efficacy of oral application in mice. J Trop

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37、ge M, Hara T, Yoneda Y, Zhang M, Fukuma T: Schistosoma japonicum egg granuloma formation in the interleukin-4 or interferon-gamma deficient host. Parasite Immunol, 2001; 23(6): 271-80.</p><p>　　11. Friedman

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41、ed apoptosis and downstream pathways in cardiomyocytes. J Mol Cell Cardiol, 2001; 33: 1223-1232.</p><p>　　16. Nagaki M, Naiki T, Brenner DA, Osawa Y, Imose M, Hayashi H: Tumor necrosis factor alpha prevents

42、tumor necrosis factor receptor-mediated mouse hepatocyte apoptosis, but not fas-mediated apoptosis: role of nuclear factor-kappaB. Hepatology, 2000; 32: 1272-1279.</p><p>　　17. Lang A, Brenner DA, Rippe RA:

43、Nuclear factor KAPPA B induced resmtance to tumor necrosis factor alpha-mediated apoptosis in hepatic stellate cells. Hepatology, 1998; 28 pl 2: 437A.</p><p>　　18. Hellerband C, Jobin C, Iimuro Y, etal: Inhi

44、bition of NF-κB in activated rat hepatic stellate cells by proteasome inhibitors and an IKB super-repressor. Hepatology 1998; 27: 1285-1295.</p><p>　　19. Kroemer G: The proto-oncogene Bcl-2 and its role in r

45、egulating apoptosis. Nature Medicine， 1997; 3: 614-620.</p><p>　　20. Wang XZ, Zhang SJ, Chen YX, Chen ZX, Huang YH, Zhang L: Effects of platelet-derived growth factor and interleukin-10 on Fas/Fas-ligand and

46、 Bcl-2/Bax mRNA expression in rat hepatic stellate cells in vitro. World J Gastroenterol, 2004 Sep 15; 10(18): 2706-10.</p><p>　　21. Singh KP, Gerard HC, Hudson AP, Boros DL: Dynamics of collagen,MMP and TIM

47、P gene expression during the granulomatous,fibrotic process induced by Schistosoma mansoni eggs. Annals of Tropical Medicine and Parasitology, 2004; 98(6): 581-593.</p><p>　　22. Murphy F, Issa R, Zhou X, eta

48、l: Inhibition of apoptosis of activated hepatic stellate cells by TIMP-1 is mediated via effects on MMP inhibition:Implications for resversibility of liver fibrosis. J Biol Chem, 2002; 277(13): 11069-11076.</p>&l

49、t;p>　　23. 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會, 編著: 中華人民共和國藥典二000年版一部. 北京: 人民衛(wèi)生出版社、化學(xué)工業(yè)出版社, 2000: 78,125.</p><p>　　24. 田代華, 主編, 謝宗萬, 主審: 實用中藥詞典（上卷）. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2002: 568-575.</p><p>　　25. Yamahara J, Yamada T,

50、Kimura H, Sawada T, Fujimura H: Biologically active principles of crude drugs:Antiallergic principles of "shoseiryu-to":l.Effect on delayed-type allergy reaction. Yakugaku Zasshi, 1982; 102: 881-886.</p>

51、<p>　　26. 國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站, 編著: 植物藥有效成分手冊. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 1986: 797-798.</p><p>　　27. Liang J, Zhou A, Chen M, Xu S: Negatively regulatory effects of paeoniflorin on immune cells. Eur J Pharmacol, 1990; 18

52、3: 901-902.</p><p>　　28. Tsuboi H, Hossain K, Akhand AA, et al.: Paeoniflorin induces apoptosis of lymphocytes through a redox-linked mechanism. J Cell Biochem, 2004; 93(1): 162-72.</p><p>　　29.

53、 于世瀛, 賁長恩, 白錦雯, 楊美娟, 趙麗云: 芍藥苷對離體培養(yǎng)纖維化后肝細(xì)胞的定量細(xì)胞化學(xué)研究. 中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志， 1995; 4(4): 356-360.</p><p>　　2、項目的研究內(nèi)容、研究目標(biāo),以及擬解決的關(guān)鍵問題。（此部分為重點闡述內(nèi)容）</p><p>　?。?）研究內(nèi)容：本項目以芍藥苷作用于日本血吸蟲病肝臟肉芽腫小鼠模型，主要研究內(nèi)容為：</p&

54、gt;<p>　?、?制備ICR株小鼠日本血吸蟲病肝蟲卵肉芽腫和肝臟纖維化模型；觀察藥物治療前后小鼠肝組織大體以及光、電鏡下肉芽腫和肝纖維化的形態(tài)學(xué)改變；肝組織蟲卵計數(shù)、肝蟲卵肉芽腫大小及數(shù)量檢測；肉芽腫內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)；肝纖維化染色及纖維化程度判斷；HSC觀察；細(xì)胞凋亡小體觀察；</p><p>　?、?用免疫組織化學(xué)法檢測芍藥苷治療前后肝組織中IL-4、IFN-γ、TGFβ1及其受體、PDGF

55、及其受體、NFκB、Bcl-2、Bax 、MMP13、TIMP1表達(dá)情況； </p><p>　?、?肝組織HSC分離、培養(yǎng)；用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠HSC凋亡；檢測小鼠HSC中的Smad3、Smad7以及ERK表達(dá)；用RT-PCR法檢測芍藥苷治療前后小鼠HSC中Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)情況；</p><p>　　通過上述實驗觀察和檢測，圍繞蟲卵肉芽腫形成、HSC激活、凋亡和膠原產(chǎn)生的過程，探

56、討芍藥苷對血吸蟲蟲卵肉芽腫以及肝纖維化的作用機(jī)制。</p><p><b>　?。?）研究目標(biāo)：</b></p><p>　?、?探討細(xì)胞因子對日本血吸蟲蟲卵肉芽腫免疫調(diào)節(jié)作用；</p><p>　?、?闡明肝纖維化過程中參與纖維化形成的HSC信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子機(jī)制；</p><p>　?、?研究芍藥苷對蟲卵肉芽腫炎性反應(yīng)的

57、免疫調(diào)節(jié)；</p><p>　?、?研究芍藥苷對肝纖維化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的干預(yù)。</p><p>　　(3) 擬解決的關(guān)鍵問題:</p><p>　　本項目通過芍藥苷對小鼠血吸蟲蟲卵肉芽腫炎性細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)，對肝纖維化中HSC激活、凋亡信號通路中的信號分子、凋亡因子的作用，以及對MMPs、TIMPs、Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)的影響，從而闡明芍藥苷對蟲卵肉芽腫及肝纖維化的作用機(jī)

58、制，為研發(fā)抗血吸蟲肉芽腫及抗血吸蟲病肝纖維化新藥提供理論和實驗根據(jù)。</p><p>　　3、擬采取的研究方案及可行性分析。（包括有關(guān)方法、技術(shù)路線、實驗手段、關(guān)鍵技術(shù)等說明）</p><p><b>　　研究方案：</b></p><p>　?。?）健康ICR株小鼠600只，雌雄各半，隨機(jī)分成6組：正常對照組、模型對照組、生理鹽水組、低劑量藥

59、物組、中劑量藥物組、高劑量藥物組，每組100只。除正常對照組以外，其余各組均被制成血吸蟲病肝纖維化模型； </p><p>　?。?）制作ICR株小鼠血吸蟲病肝纖維化模型：以日本血吸蟲尾蚴40±5條經(jīng)腹部皮膚感染小鼠，常規(guī)飲食于并感染后第4周給藥，第6、7、8、12、16周從每組中隨機(jī)捉拿20只小鼠，其中10只立即處死，稱量肝臟，留取肝組織標(biāo)本待測，另10只作肝組織的分離、培養(yǎng)；</p>

60、<p>　?。?）鏡下觀察上述各組小鼠肝組織形態(tài)學(xué)改變：</p><p>　　① 取1克肝組織，常規(guī)固定、石蠟切片、HE染色，在普通光鏡下觀察肝的病理組織學(xué)改變情況并攝片；取1㎜3大小肝組織，固定、脫水、包埋、烤干、切片，在透射電鏡下觀察并攝片（注意觀察凋亡小體的形態(tài)及數(shù)量）； </p><p>　　② 蟲卵肉芽腫大小、數(shù)量檢測：以此作為肉芽腫炎性反應(yīng)程度的一個指標(biāo)。取1克肝組織

61、，10%甲醛固定，石蠟包埋，切片厚約4～5μm，HE染色。應(yīng)用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測量切片中所有含完整毛蚴的單蟲卵肉芽腫面積，用標(biāo)準(zhǔn)計算紙測量肝組織面積，全部數(shù)據(jù)輸入計算機(jī)，計算以下指標(biāo)：a.蟲卵肉芽腫大?。喊ㄏx卵肉芽腫截面面積（mm2/個）和體積(mm3/個)；b.蟲卵肉芽腫數(shù)量：即單位面積肝組織內(nèi)蟲卵肉芽腫的數(shù)量（個/cm2）；</p><p>　?、?肝組織蟲卵計數(shù)：以此作為小鼠感染程度的一個指標(biāo)。稱取肝組織

62、1g，剪碎，置于小燒杯中，加入50g/L的KOH 10ml，于37℃孵箱中消化12 h（過夜），直至組織消化完全，攪勻，吸取100μl，涂片4張，加蓋玻片在顯微鏡下計數(shù)全部4張涂片蟲卵數(shù)，再乘以100，即為蟲卵數(shù)/g肝組織(EPG)。以EPG值乘以每只小鼠的肝臟重量，即為肝臟蟲卵總數(shù)；</p><p>　?、?在普通顯微鏡下對肉芽腫內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，并計算各組均值，以此作為肉芽腫炎性反應(yīng)程度的另一個指標(biāo)；&

63、lt;/p><p>　　⑤ 用免疫組織化學(xué)法(PicTure二步法)檢測肝組織中IL-4、IFN-γ、TGFβ1及其受體、PDGF及其受體、NFκB(p65)、Bcl-2、Bax 、MMP13、TIMP1表達(dá)情況。每批實驗均設(shè)立陰、陽性對照。采用MetaMorph顯微圖象分析系統(tǒng)對圖象定量分析。 </p><p>　　⑥ 用免疫組織化學(xué)法檢測激活的HSC：肝組織切片在室溫下與抗α-SMA單抗對

64、切片孵育30分鐘后，再與抗鼠IgG2a-過氧化物酶結(jié)合物反應(yīng)，用DAB顯色、蘇木精、伊紅復(fù)染。光鏡下激活的HSC呈棕褐色。用MetaMorph顯微圖象分析系統(tǒng)對圖象進(jìn)行定量分析，了解HSC被激活的情況；</p><p>　?、?用Van Gieson苦味酸-酸性品紅法對肝組織切片進(jìn)行染色，膠原纖維呈紅色，肌纖維、胞漿和紅細(xì)胞呈黃色，細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。用MetaMorph顯微圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，以此來判斷、比較

65、肝纖維化程度；</p><p>　　（4）分離、培養(yǎng)肝組織中的HSC：小鼠在給予麻醉、抗凝后，無菌下以16號套管針作門靜脈插管，灌注D-Hanks液至肝臟充盈，剪開下腔靜脈放血后結(jié)扎。用另一個16號套管作上腔靜脈插管，形成門靜脈-上腔靜脈循環(huán)。分別以0.1%鏈霉蛋白酶E、0.03%Ⅰ型膠原酶灌注3～4分鐘后取出肝臟、剪碎，用鏈霉蛋白酶E、DNA酶消化后，200目篩網(wǎng)過濾、Percoll密度梯度離心、無血清RPMI

66、1640培養(yǎng)液培養(yǎng)。在光鏡下培養(yǎng)原代肝星狀細(xì)胞呈星形或多邊形，胞漿豐富，內(nèi)含脂滴而激活的肝星狀細(xì)胞脂滴減少或消失，有的細(xì)胞變成梭形。用臺盼藍(lán)排斥實驗檢測HSC活力；</p><p>　　（5）用流式細(xì)胞儀檢測各組HSC的DNA含量，分析細(xì)胞凋亡指數(shù)，了解藥物對HSC凋亡的影響；</p><p>　?。?）用Western blot 法分別檢測HSC中Smad3、7和 ERK的含量（采用凝膠

67、成像系統(tǒng)掃描，以特異性條帶濃度與面積的乘積為有效值，反映蛋白表達(dá)水平），以了解蟲卵肉芽腫及藥物對HSC信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中蛋白激酶的影響；</p><p>　?。?）提取HSC中的總mRNA，用RT-PCR法分別檢測HSC中的Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達(dá)，以了解肝纖維化時藥物對Ⅰ、Ⅲ型膠原的影響；</p><p><b>　　可行性分析：</b></p><

68、;p>　　血吸蟲病肝肉芽腫及纖維化模型已成為常規(guī)實驗?zāi)Ｐ停槐臼乙颜莆崭涡菭罴?xì)胞的分離培養(yǎng)技術(shù)；已完成國家自然基金血吸蟲細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究；本實驗室具有完備、先進(jìn)的實驗儀器和設(shè)備（見“工作條件”）；課題組人員配備合理、并掌握了分子生物學(xué)、免疫學(xué)及細(xì)胞生物學(xué)有關(guān)實驗技術(shù)；本課題組已完成白芍總苷對實驗性關(guān)節(jié)炎的滑膜細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響的研究，并對白芍總苷進(jìn)行了抗炎、免疫調(diào)節(jié)等研究。</p><p><b>

69、;　　附實驗流程圖：</b></p><p>　　4、本項目的特色與創(chuàng)新之處。</p><p>　　探討芍藥苷對血吸蟲蟲卵肉芽腫的免疫調(diào)節(jié)和早期肝纖維化細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的干預(yù)，為血吸蟲性肝病治療尋找新的藥物和靶點；選擇繼“殺蟲治療”之后“抗病治療”的新型藥物。探討中藥有效成分對血吸蟲蟲卵肉芽腫及肝纖維化的治療作用，此項研究國內(nèi)外未見報道。</p><p>　

70、　探討細(xì)胞因子及HSC內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要激酶在血吸蟲病肝纖維化中的作用；</p><p>　　從肝纖維化中起決定作用的HSC及炎性反應(yīng)和早期纖維化的形成著手，探討血吸蟲病肝纖維化的發(fā)生機(jī)理。</p><p>　　5、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果。（包括擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等）</p><p>　　（1）2006年1月-6月：制作血吸蟲病肝纖維化小

71、鼠模型；預(yù)實驗；光鏡、電鏡觀察； </p><p>　?。?）2006年7月-12月： 免疫組化，流式細(xì)胞術(shù)檢測</p><p>　?。?）2007年1月-6月: 肝星狀細(xì)胞分離、培養(yǎng)； </p><p>　　2007年7-12月：細(xì)胞因子檢測；實驗檢測、收集數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析；</p><p>　?。?）2008年1月-6月：HSC凋亡檢測，肝

72、臟纖維化相關(guān)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路因子檢測；（6）2008年7月-12月：結(jié)題；撰寫論文并在SCI期刊上發(fā)表4-5篇論著。</p><p>　?。ǘ┭芯炕A(chǔ)與工作條件</p><p>　　工作基礎(chǔ)（與本項目相關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績）</p><p>　　（1）本室掌握了雜交瘤細(xì)胞技術(shù)、免疫組化、體液與細(xì)胞免疫、PCR技術(shù)、基因克隆、蛋白質(zhì)原核及真核表達(dá)、

73、蛋白質(zhì)分析等相關(guān)的技術(shù)方法；</p><p>　?。?）本室掌握了小鼠血吸蟲病肝肉芽腫及纖維化模型的制作方法；</p><p>　?。?）本室熟悉小鼠肝星狀細(xì)胞分離、培養(yǎng)技術(shù)；</p><p>　?。?）本室掌握了醫(yī)學(xué)統(tǒng)計分析方法及相關(guān)軟件的應(yīng)用；</p><p>　?。?）本室已進(jìn)行了白芍總苷對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠治療作用的研究，實驗證明：&l

74、t;/p><p>　?、侔咨挚傑湛擅黠@減輕大鼠的足爪腫脹度及全身繼發(fā)性關(guān)節(jié)病變；有效減緩大鼠體重減輕及關(guān)節(jié)病理變化，如減輕滑膜增生，減少淋巴細(xì)胞侵潤等；</p><p>　?、诎咨挚傑湛杉m正關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞的增殖和分泌功能；抑制滑膜細(xì)胞內(nèi)的ERK、JNK、P38磷酸化程度；對滑膜細(xì)胞內(nèi)的基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)也有一定的調(diào)節(jié)作用；</p><p>　?、郯咨挚傑湛杉m正關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞

75、內(nèi)G蛋白偶聯(lián)信號通路的紊亂；抑制IL-1a的作用；</p><p>　?。?）本室已進(jìn)行了白芍總苷對小鼠免疫性肝纖維化治療作用的研究，并于今年在《World Journal of Gastroenterology》上將發(fā)表相關(guān)研究成果（Therapeutic effects of total glucosides of paeony on rats with immunological hepatic fibro

76、sis. in press ）,該研究表明白芍總苷可以減緩小鼠免疫性肝纖維化；</p><p>　　（7）本室還對白芍總苷進(jìn)行了抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化等一系列藥理作用的研究，以及白芍總苷對細(xì)胞內(nèi)某些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響；</p><p>　　（8）本科研小組成員配備合理，對科學(xué)孜孜不倦地追求，具有良好的合作精神和奉獻(xiàn)精神；</p><p>　?。?）近年來本科研小組參

77、與的研究及成果：詳見“3、申請人簡歷”</p><p><b>　　參與科研項目：</b></p><p>　?、?關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞G蛋白的功能變化及治療類風(fēng)關(guān)中藥有效部位對其的影響.起止年：2005～2006.安徽省自然科學(xué)基金資助項目；</p><p>　?、?白芍總苷對實驗性關(guān)節(jié)炎的滑膜細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.起止年：2003～2005,編號

78、：30271606.國家自然科學(xué)基金資助項目；</p><p>　　③ 治療肝炎中藥芍芪多苷及其膠囊的研制.起止年：2002～2005；編號：（2002AA2Z3235）.國家863計劃項目（中藥現(xiàn)代化專項）；</p><p>　?、?日本血吸蟲rSj14-3-3/mAb和rSjGST標(biāo)準(zhǔn)化抗原診斷試劑的研究（2004AA2Z3570）.國家”863”項目；</p><

79、p>　?、?血吸蟲14-3-3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其干預(yù)（編號30170841）.國家自然科學(xué)基金（已結(jié)題 ）。</p><p><b>　　發(fā)表論文：</b></p><p>　?、?Yong-Qiu Zheng, Wei Wei, Xiao-Yi Jia, Lei Zhu. Total glucosides of paeony suppresses adjuvant

80、arthritis in rats and intervenes cytokine-signaling between different types of synoviocytes, Int Immunopharmacol, (accepted)</p><p>　　② 鄭詠秋，魏偉.調(diào)節(jié)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和相應(yīng)的藥物作用靶點. 中國藥理學(xué)通報, 2005；21(2):133-13

81、7</p><p>　?、?Yong-Qiu Zheng, Wei Wei. Relationship between G proteins-associated transmembrane cascades and MAPK phosphorylation induced by recombinant interleukin-1α in fibroblast-like synoviocytes from rat

82、s with adjuvant arthritis (abstract). Acta Pharmacol Sin, 2004; 25 (11): p1541-1543</p><p>　　④ Wei Wei, Yong-Qiu Zheng. Total glucosides of paeony suppressed adjuvant arthritis in rats by intervening G prote

83、ins associated transmembrane signal transduction (abstract). Acta Pharmacol Sin, 2004;25 (11): p1562-1564</p><p>　?、?Lei Zhu, Wei Wei, Yong-Qiu Zheng, Xiao-Yi Jia. Effects and mechanisms of total glucosides

84、of paeony on joint damage in rat collagen-induced arthritis. Inflammation Res. （accepted）</p><p>　?、?查任遠(yuǎn)，沈繼龍，汪學(xué)龍.日本血吸蟲重組信號蛋白14-3-3（Sr14-3-3）及其單克隆抗體用于診斷的價值.中國人獸共患病雜志,2004；20（10）：847-849</p><p>　　

85、⑦ 沈際佳，蔣作君，汪學(xué)龍，王維，江寶玲.抗童蟲表膜單克隆抗體與吡喹酮協(xié)同殺血吸蟲作用.中國藥理學(xué)通報，1998；14（5）：440-442</p><p>　　⑧ 李德發(fā)，陳月生，祖瑩，沈繼龍.日本血吸蟲DNA疫苗的構(gòu)建及其保護(hù)性免疫.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2004；38（3）：193-195</p><p>　?、?李德發(fā)，祖瑩，沈繼龍.rSj14-3-3 和rSj14-3-3/GST對日

86、本血吸蟲蟲卵肉芽腫形成的影響.中國人獸共患病雜志,2003;19（5）：55-58</p><p>　　⑩ Shen JL, Chen SG.Cloning, Expression and purification of human 14-3-3 zeta: a marker for the diagnosis of prion diseases.CAB Abstract Veterinary Bulletin,

87、2001；71(4):393-395</p><p>　　工作條件（包括已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑，包括利用國家重點實驗室和部門開放實驗室的計劃與落實情況。）</p><p>　　（1）本室具備寄生蟲免疫學(xué)和分子生物學(xué)研究的基本設(shè)備條件，現(xiàn)有：754-紫外分光光度計，PCR擴(kuò)增儀，紫外分析儀，HYGRA-96 micro-dispenser，超低溫冰箱，高速冷凍離心機(jī)

88、，超聲粉碎儀，全套電泳及蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)，超純水系統(tǒng)，CO2孵箱，超凈工作臺，紫外凝膠成像儀，冷凍干燥機(jī)，計算機(jī)聯(lián)網(wǎng)等。</p><p>　?。?）本實驗室已和中國科技大學(xué)生命科學(xué)院中心實驗室、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)所劉德培實驗室建立了良好的協(xié)作關(guān)系。課題主持人為省基因研究重點實驗室副主任，具有良好的研究平臺。</p><p>　　（3）本校臨床藥理研究所為安徽省最早的博士點學(xué)科，省和教育廳重

89、點實驗室，在中藥有效部位及單體研究方面具有雄厚的技術(shù)實力和研究條件。</p><p>　　附本實驗室部分基本實驗設(shè)備清單：</p><p>　　3、申請人簡歷（包括申請者和項目組主要成員的學(xué)歷和研究工作簡歷，近期已發(fā)表與本項目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎勵情況及在本項目中承擔(dān)的任務(wù)。論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁碼等；獎勵情況也須詳細(xì)列出全

90、部受獎人員、獎勵名稱等級、授獎年等。）</p><p>　?。?）沈繼龍：教授，博士生導(dǎo)師，1982年于山東醫(yī)科大學(xué)畢業(yè)并獲碩士學(xué)位；1987年赴日本帝京大學(xué)研修；1990年畢業(yè)并獲得中山醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位；1996-1998年赴美國CWRU高訪學(xué)者；長期從事寄生蟲學(xué)的教學(xué)與科研，先后主持國際合作、國家“863”、國家自然科學(xué)基金及省部級科研項目10余項，在國內(nèi)外學(xué)術(shù)刊物上發(fā)表論文100余篇；已獲省級、廳級科技成果

91、二、三等獎5項。近年主要從事寄生蟲病基因工程疫苗、轉(zhuǎn)基因寄生蟲與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究。主編、副主編及參加編寫專著及教材10部。</p><p><b>　　發(fā)表論文：</b></p><p>　?、?查任遠(yuǎn)，沈繼龍，汪學(xué)龍.日本血吸蟲重組信號蛋白14-3-3（Sr14-3-3）及其單克隆抗體用于診斷的價值.中國人獸共患病雜志,2004；20（10）：847-849</

92、p><p>　?、?李德發(fā)，祖瑩，陳月生，沈繼龍.日本血吸蟲重組抗原rS14-3-3免疫保護(hù)作用的初步研究.中國寄生蟲病防治雜志,2004；17（2）：106-108</p><p>　?、?李德發(fā)，陳月生，祖瑩，沈繼龍.日本血吸蟲DNA疫苗的構(gòu)建及其保護(hù)性免疫.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2004；38（3）：193-195</p><p>　?、?劉慶中，沈繼龍.日本血吸蟲重

93、組信號蛋白14-3-3 DNA 免疫保護(hù)作用的觀察.中國人獸共患病雜志.2004；20（3）：47-49</p><p>　?、?李德發(fā)，祖瑩，沈繼龍.rSj14-3-3 和rSj14-3-3/GST對日本血吸蟲蟲卵肉芽腫形成的影響.中國人獸共患病雜志,2003；19（5）：55-58</p><p>　?、?劉慶中，沈繼龍.日本血吸蟲重組信號蛋白14-3-3及其DNA疫苗免疫保護(hù)性的觀察

94、.中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志,2003；21（5）：257-259</p><p>　?、?汪學(xué)龍，沈繼龍，蔣作君.日本血吸蟲Sj14-3-3抗原編碼基因的克隆及序列測定.中國人獸共患病雜志，2001；17（5）：45-47</p><p>　?、?Shen JL, Chen SG.Cloning, Expression and purification of human 14-3-3 z

95、eta: a marker for the diagnosis of prion diseases.CAB Abstract Veterinary Bulletin,2001；71(4):393-395</p><p>　?、?沈繼龍，陳曙光.朊蛋白病診斷標(biāo)志分子14-3-3 ZETA亞型基因克隆、表達(dá)及純化.中國人獸共患病雜志，2000；16（5）：8-10</p><p>　?。?）

96、鄭詠秋：1991年9月－1995年7月在安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系學(xué)習(xí)，獲學(xué)士學(xué)位；1995年7月－2001年3月在安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系從事教學(xué)、科研工作；1997年9月－2001年7月在安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系中藥專業(yè)學(xué)習(xí)，獲碩士學(xué)位；2001年9月－2005年1月在安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所學(xué)習(xí)，獲博士學(xué)位。</p><p><b>　　發(fā)表論文：</b></p><p>　　①

97、 Yong-Qiu Zheng, Wei Wei, Xiao-Yi Jia, Lei Zhu. Total glucosides of paeony suppresses adjuvant arthritis in rats and intervenes cytokine-signaling between different types of synoviocytes, Int Immunopharmacol, (accepted)&

98、lt;/p><p>　?、?鄭詠秋，魏偉.調(diào)節(jié)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和相應(yīng)的藥物作用靶點. 中國藥理學(xué)通報, 2005；21(2):133-137</p><p>　?、坂嵲伹?，魏偉，戴敏，汪倪萍.木瓜苷抑制小鼠接觸性超敏反應(yīng)及對其胸腺T淋巴細(xì)胞亞型的調(diào)節(jié)作用. 中國藥理學(xué)通報, 2004；20(9):1016-1020</p><p>　?、?/p>

99、Yong-Qiu Zheng, Wei Wei. Relationship between G proteins-associated transmembrane cascades and MAPK phosphorylation induced by recombinant interleukin-1α in fibroblast-like synoviocytes from rats with adjuvant arthritis

100、(abstract). Acta Pharmacol Sin, 2004; 25 (11): p1541-1543</p><p>　?、?Wei Wei, Yong-Qiu Zheng. Total glucosides of paeony suppressed adjuvant arthritis in rats by intervening G proteins associated transmembra

101、ne signal transduction (abstract). Acta Pharmacol Sin, 2004;25 (11): p1562-1564</p><p>　?、?Lei Zhu, Wei Wei, Yong-Qiu Zheng, Xiao-Yi Jia. Effects and mechanisms of total glucosides of paeony on joint damage

102、in rat collagen-induced arthritis. Inflammation Res. （accepted）</p><p>　　（3） 儲德勇： 1990年在上海第二醫(yī)科大學(xué)兒科系獲學(xué)士學(xué)位；1995年在安徽省省立兒童醫(yī)院兒內(nèi)科工作；2002年在四川成都華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)習(xí)，獲醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位；2004.10-至今在安徽醫(yī)科大學(xué)攻讀博士學(xué)位。</p><p><b>

103、　　發(fā)表論文：</b></p><p>　?、?儲德勇，李煒如，廖清奎.三磷酸腺苷生物發(fā)光法在白血病細(xì)胞株K562化療藥物敏感實驗中應(yīng)用探討.兒科藥學(xué)雜志，2003；9（6）：7-9</p><p>　?、?儲德勇.缺氧缺血性腦損害新生豬海馬皮層病理改變及ATP生成率、ATP合成酶活性變化.成都：華西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文，2002</p><p>　?、?/p>

104、 儲德勇，李煒如，姚裕家，唐瑟.兒童周圍血單個核細(xì)胞端粒酶活性檢測在診斷急性淋巴細(xì)胞白血病中的臨床意義.四川醫(yī)學(xué)，2002；23（5）：490-491</p><p>　?。?） 王維： 1987年畢業(yè)于安徽醫(yī)科大學(xué)并獲學(xué)士學(xué)位，留校后一直從事寄生蟲學(xué)教學(xué)、科研等工作，現(xiàn)任安徽醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)副教授。主要從事寄生蟲分子生物學(xué)研究，內(nèi)容包括基因克隆、DNA重組技術(shù)、基因產(chǎn)物的表達(dá)及鑒定，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究寄生