大連海域厚葉海帶巖藻聚糖硫酸酯的純化及其結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、本文以大連厚葉海帶為原料,對巖藻聚糖硫酸酯的提取、分離純化以及結(jié)構(gòu)進行了初步的研究,主要研究結(jié)果及結(jié)論如下:
　　實驗測得大連海域厚葉海帶水分含量是7.63％,其他成分以干基計算,脂肪含量0.67％,蛋白質(zhì)含量6.26％,灰分含量34.17％。采用復(fù)合酶解結(jié)合乙醇分級純化得巖藻聚糖硫酸酯,通過單因素實驗和正交試驗確定了最佳提取工藝參數(shù):料液比1:17,纖維素酶:果膠酶:木瓜蛋白酶=4:1:1,酶加量為620 U/g,pH值4.5,

2、酶解溫度為45℃,酶解時間60 min。在該酶解條件下,大連海域厚葉海帶巖藻聚糖硫酸酯的粗提取率為1.98％,多糖含量為63.33％,硫酸基含量為25.14％。
　　巖藻聚糖硫酸酯經(jīng)DEAE-Sepharose分離純化得到三個組分F-1,F-2和F-3,各組分的回收率分別為10.55％,37.72％和21.98％,各組分的硫酸基含量分別是15.26％,8.37％和27.16％,各組分的總糖含量分別為64.26％,64.03％和68

3、.32％。經(jīng)Sephadex S-300凝膠柱層析表明f2,f2均為單一峰,F-3分離出兩個峰f3和f4,其硫酸基含量分別為23.87％、27.43％。f1、f2、f3和f4分子量分別約為145KD、258KD、258KD、69KD。
　　對經(jīng)Sephadex S-300凝膠柱層析分離得到的四個組分進行結(jié)構(gòu)分析。紅外光譜檢測結(jié)果表明:四個組分均含有O-H伸縮振動峰(3348-3490cm-1)、C-H伸縮振動峰(2935-2950

4、cm-1,是巖藻糖中甲基的吸收峰);S=O伸縮振動峰(1243-1255cm-1,是硫酸基團的吸收峰),f2、f3和f4圖譜中在850cm-1附近的吸收峰是C-O-S的伸縮振動(軸向配位),說明其具有C4位被硫酸基取代的結(jié)構(gòu);而f1的圖譜中在834 cm-1有C-O-S的伸縮振動,推斷可能具有雙硫取代的結(jié)構(gòu)。經(jīng)氣相色譜分析各個組分的單糖組成,主要是由巖藻糖、半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖五種單糖組成,但各組分的單糖組成比例均不相同,f1的

5、半乳糖含量最高;f2的甘露糖含量最高;f3和f4的主要成分為巖藻糖。由氫譜可以看出,f1-f4在1.3ppm左右有甲基峰的信號峰;f1-f3在2.1-2.2ppm的信號為乙?；男盘柗?。13C譜圖顯示96-106ppm為C1的信號峰,16-18ppm對應(yīng)巖藻糖C6的信號峰,根據(jù)巖藻糖C6信號峰峰高顯示f4的巖藻糖含量最高,與氣相色譜結(jié)果分析相一致。68-84ppm的大量累積信號是由硫酸基的取代所致,與紅外光譜中存在硫酸基團的吸收峰相對應(yīng)