石河子地區(qū)犬瘟熱流行病學調查及流行株H基因遺傳變異分析.pdf

1、犬瘟熱(Caninedistemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Caninedistempervirus,CDV)引起的犬科、鼬科和浣熊科動物的一種急性、高度接觸性傳染病。該病在我國很多地區(qū)流行,給養(yǎng)犬業(yè)和皮毛動物養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。
　　近幾年該病在石河子地區(qū)流行嚴重,并呈上升趨勢,臨床癥狀、病理變化多樣且難以防控,死亡率高達80％以上,給石河子地區(qū)的寵物業(yè)帶來了嚴重的威脅。為了了解石河子地區(qū)CD流行情況及CDVH基因的變

2、異情況,本研究開展了以下工作:
　　1、石河子地區(qū)犬瘟熱流行病學調查
　　從流行病學、臨床癥狀、血清學、病例剖檢、病理組織學等五方面對2011~2012年石河子市防疫站、獸醫(yī)站、石河子大學動物醫(yī)院三家大型寵物診療機構前來就診的2416只犬進行了CD調查。調查結果表明2416只病犬中,初步診斷為犬瘟熱病的犬211只,占總數(shù)的8.73%。對初診為犬瘟熱的病犬跟蹤調查結果如下:①流行病學:本病一年四季均有發(fā)生,但冬、春季發(fā)病較多;

3、不同年齡、性別和品種的犬均可感染,未成年的幼犬最為易感;純種犬比土種犬易感性高,而且病情重,死亡率高;未免疫的犬較免疫的犬發(fā)病率高。②臨床癥狀:石河子地區(qū)犬瘟熱臨床癥狀主要以混合型為主,其次是呼吸道型、消化道型、神經(jīng)型、皮膚型,各種類型基本有雙相熱的經(jīng)過。③血清學:用膠體金試劑盒對病犬的眼分泌物、鼻液、唾液、血液的混合物進行檢測,共檢測出陽性病料211份。④病例剖檢:病犬全身淋巴結腫大、出血,尤其以腸系膜淋巴結最為明顯,胃腸道卡他性炎、

4、出血,胰腺萎縮,腦膜腦炎等典型癥狀,多數(shù)病犬肺臟充血、壞死,脾臟腫大、暗紅。⑤病理組織學:肝細胞顆粒變性、脂肪變性、呈大量空泡狀;肺廣泛淤血,肺泡壁結構消失,肺泡腔內充滿巨噬細胞;脾淤血、出血,白髓幾乎消失,淋巴細胞明顯減少;淋巴結有明顯的萎縮、腫大,淋巴小結不明顯。
　　2、石河子地區(qū)犬瘟熱病毒流行株H基因的克隆及遺傳變異分析
　　根據(jù)發(fā)表的犬瘟熱病毒疫苗株Onderstepoort(EU143737.1)的H基因序列設計

5、了CDV檢測引物和全長引物。通過RT-PCR方法用檢測引物從29份臨床疑似犬瘟熱的病料中檢測出7份陽性病料,再用全長引物將陽性病料擴增并測序,將所得序列分別命名為:CDVshz1、CDVshz2、CDVshz3、CDVshz4、CDVshz5、CDVshz6、CDVshz7。通過序列比對,結果顯示7株H基因序列和疫苗株Onderstepoort(EU143737.1)的同源性分別為89.0%、89.4%、90.0%、89.7%、88.8

6、%、87.8%、89.2%,7株流行株在55、60、87、95等160多個位點存在不同程度的突變,其中55、186、452、1020、1107、1116、1350等位點變異較集中。由核苷酸推導出的氨基酸序列與疫苗株的同源性分別為:95.1%、95.3%、96.3%、94.4%、94.2%、94.2%、95.0%。應用Predictprotien軟件預測,流行株糖基化位點的個數(shù)、位置發(fā)生改變,CDVshz7有8個糖基化位點,其它六株每株有

7、7個糖基化位點,而參考株Onderstepoort只有4個糖基化位點。應用ImmunomedicineGrioup軟件進行抗原表位的預測:Onderstepoort疫苗株有25個抗原表位,與疫苗株相比,CDVshz1有抗原表位26個,與疫苗株相同的有5個;CDVshz2有抗原表位26個,與疫苗株相同的有7個;CDVshz3有抗原表位25個,有14個抗原表位發(fā)生了變異;CDVshz4的抗原表位有23個,與疫苗株相同的有10個,CDVshz