耐低磷GmPAP4與AtPHR1l轉(zhuǎn)化大豆及轉(zhuǎn)基因新材料創(chuàng)制.pdf

1、大豆是需磷較多的作物，但土壤磷多以植物不能直接吸收利用的有機(jī)態(tài)存在，有效態(tài)磷嚴(yán)重缺乏。本研究在分析大豆轉(zhuǎn)化影響因素基礎(chǔ)上，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)與花粉管通道轉(zhuǎn)化技術(shù)將酸性磷酸酶GmPAP4和耐低磷轉(zhuǎn)錄因子AtPHR1轉(zhuǎn)化不同大豆品種，創(chuàng)制耐低磷轉(zhuǎn)基因新種質(zhì)，并對轉(zhuǎn)基因材料進(jìn)行耐低磷特性評價(jià)。研究結(jié)果為大豆遺傳轉(zhuǎn)化提供技術(shù)支撐，為耐低磷新品種培育奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　 1.優(yōu)化了大豆農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化體系。以萌發(fā)5d大豆幼苗制

2、備子葉節(jié)外植體，預(yù)培養(yǎng)1d，農(nóng)桿菌菌株為EHA105，菌液OD600為0.7，侵染液OD600為0.5或0.7進(jìn)行轉(zhuǎn)化，100 mg/L卡那霉素篩選的抗性芽誘導(dǎo)率最高;轉(zhuǎn)化率最高的品種是五星2號(hào)，其轉(zhuǎn)化率為2％。
　　 2.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化技術(shù)將酸性磷酸酶GmPAP4、轉(zhuǎn)錄因子AtPHR1轉(zhuǎn)入大豆，獲得了11份轉(zhuǎn)基因新種質(zhì)。其中，JD12-GmPAP4T5代47株，T4代19株，蒙9793-1-GmPAP4 T1代23株，LG

3、D1-GmPAP4 T1代6株，WX2-GmPAP4T1代3株，SD4-GmPAP4 T2代5株;JD17-AtPHR1 T3代1株，WX2-AtPHR1 T2代14株，JD12-AtPHR1T1代7株，LGD1-AtPHR1 T1代6株，JD7-AtPHR1 T1代4株;通過混合菌株共轉(zhuǎn)化技術(shù)將GmPAP4與AtPHR1轉(zhuǎn)入同一品種，獲得3株轉(zhuǎn)有2個(gè)目的基因的T1植株。
　　 3.采用花粉管通道轉(zhuǎn)化技術(shù)將GmPAP4、AtPH

4、R1轉(zhuǎn)入不同品種。中黃41、綏農(nóng)14與中黃15的轉(zhuǎn)化后結(jié)莢率較高;獲得了轉(zhuǎn)GmPAP4的T2代SN14-GmPAP429株（9個(gè)株系），ZH15-GmPAP411株（1個(gè)株系），JD17-GmPAP44株（2個(gè)株系）;獲得了轉(zhuǎn)GmPAP4無載體、無標(biāo)記線性片段T0代JD12-GmPAP4陽性植株17株;轉(zhuǎn)有無標(biāo)記載體PX6-AtPHR1的ZH41-AtPHR1的T2材料6株（3個(gè)株系）。
　　 4.分析了轉(zhuǎn)GmPAP4大豆新材料