甘藍(lán)型油菜逆境相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因BnNAC5-3的克隆與功能鑒定.pdf

1、干旱、高鹽等非生物逆境嚴(yán)重影響作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。國(guó)內(nèi)外育種者家一直致力于提高作物的抗逆性。隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷完善和應(yīng)用，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)對(duì)作物進(jìn)行定向改良的報(bào)道越來(lái)越多，但通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高甘藍(lán)型油菜抗逆性的報(bào)道還比較少。NAC轉(zhuǎn)錄因子可以提高生物抗逆能力，因此本研究通過(guò)同源序列法克隆到該家族的BnNA5-3，并轉(zhuǎn)化了甘藍(lán)型油菜，結(jié)果表明該基因能增加轉(zhuǎn)基因油菜非生物逆境的抗性。主要結(jié)果如下:
　　 1.根據(jù)已知BnNA C5-7

2、基因的全長(zhǎng)cDNA序列設(shè)計(jì)引物，用同源序列法克隆同源基因BnNAC5-3?？寺〉腂nNA C5-3全長(zhǎng)899bp，編碼280個(gè)氨基酸，含有保守的NAC結(jié)構(gòu)域。RT-PCR分析顯示BnNA C5-3受模擬干旱脅迫誘導(dǎo)，在20％ PEG(w/v)處理后0.5小時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高。將BnNAC5-3基因CDS構(gòu)建到pGBKT7載體后轉(zhuǎn)化酵母菌株AH109，BnNAC5-3可以激活報(bào)告基因的表達(dá)，具有轉(zhuǎn)錄激活功能。
　　 2.構(gòu)建超表達(dá)載

3、體P35S∷BnNA C5-3，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化甘藍(lán)型油菜，經(jīng)Kan篩選得到390棵轉(zhuǎn)基因植株，PCR鑒定出陽(yáng)性單株35株，陽(yáng)性率約為9％。轉(zhuǎn)基因T0代種子在10mg/LABA水溶液處理?xiàng)l件下，萌發(fā)率顯著低于對(duì)照;在100mg/L ABA的營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)條件下，轉(zhuǎn)基因T1代幼苗生長(zhǎng)受抑制程度明顯高于對(duì)照;超量表達(dá)BnNAC5-3提高了植株的ABA敏感性。5％ PEG(w/v)水培液培養(yǎng)，對(duì)照先于轉(zhuǎn)基因T1代植株死亡。15％ PEG(w/v