朱砂葉螨羧酸酯基因TCE2原核表達研究.pdf

1、朱砂葉螨（Tetranychus cinnabarinus）是一種重要的農(nóng)業(yè)害螨，在我國分布廣泛，嚴重危害多種作物。目前化學藥劑噴殺仍然是防治朱砂葉螨的主要手段，由于該螨具有世代周期短，繁殖力強，近親交配率高的特點，隨著農(nóng)藥的大量和不合理使用，使得朱砂葉螨的抗藥性發(fā)展十分迅速。
　　酯酶(EC3.1.1.1)是一種能夠催化水解羧基類脂的水解酶，在昆蟲（螨）體內(nèi)可分解外源或內(nèi)源的有毒有害物質(zhì)，或通過與這些物質(zhì)相結(jié)合使其無法作用于標靶

2、，是害蟲（螨）產(chǎn)生抗性的重要因素之一。
　　本研究擬在前人已經(jīng)克隆獲得朱砂葉螨酯酶基因TCE2并發(fā)現(xiàn)其與抗藥性密切相關的基礎上，體外原核表達TCE2基因、獲得目的蚩白并研究其對殺螨劑-阿維菌素的直接分解或結(jié)合效果，為酯酶基因TCE2介導朱砂葉螨抗藥性提供直接證據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1、構(gòu)建了TCE2的重組原核表達載體（pColdⅡ-TCE2、pET-28a-TCE2、pET-28a-TCE2q和pColdⅡ-TCE2q

3、）并誘導表達:其中pColdⅡ-TCE2無目的蛋白表達，pET-28a-TCE2和pET-28a-TCE2q可檢測到蛋白包涵體，pColdⅡ-TCE2q檢測到可溶性目的蛋白。
　　2、可溶性重組目的蛋白經(jīng)純化后，以其特異底物α-乙酸荼酯(α-NA)進行活性測定，獲得酶活性測定最適反應條件為溫度30℃，pH值7.4;最適反應條件下測得重組蛋白比活力為483.3±71.8nmol/mg pro.min-1,Km為30.5.±5.9nM