養(yǎng)殖花鱸皮膚潰瘍病抗性及敏感性群體的RAPD分析.pdf

1、鱸魚（Lateolabrax japonicus）是海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖魚類的主要品種之一。但隨著集約化養(yǎng)殖的發(fā)展，鱸魚病害逐年增多。特別是近幾年來發(fā)生的一種由哈氏細菌（Vibrio harveyi）引起的傳染性皮膚潰瘍病，因其流行范圍廣、危害嚴重，給花鱸養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。本文通過RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）技術(shù)，探討了象山港養(yǎng)殖花鱸群體的基因組DNA多態(tài)性，同時比較了皮膚潰瘍病抗性群體

2、（簡稱為抗性群體）和皮膚潰瘍病敏感群體（簡稱為敏感群體）兩個群體的遺傳變異度，對象山港養(yǎng)殖花鱸群體的自身抗性能力做初步的研究。 總結(jié)出花鱸基因組DNA的快速提取方法：在65℃水中消化2h左右，再加RNA酶37℃消化30min，經(jīng)酚、氯仿、異戊醇抽提，無水乙醇沉淀，最后溶于TE。所提的DNA A260/A280在1.75-1.90之間。 象山港養(yǎng)殖花鱸的RAPD-PCR擴增的適宜條件：25ul反應體系中，模板DNA 50n

3、g，引物50ng，dNTPs 0.1mmol，10×Buffer 2.5ul， Mg2+ 2.0mmol， Taq+DNA聚合酶1.0U。擴增體系參數(shù)：94℃預變性5min；94℃變性1min，38℃退火1min，72℃延伸2.5min，35個循環(huán)；72℃延伸10min。 使用100條隨機引物對47尾象山港養(yǎng)殖花鱸進行了RAPD擴增，其中有25條引物擴增出具有多態(tài)性條帶。25條引物共檢測出165個位點，其中多態(tài)位點為80個，多態(tài)

4、比率達48.48﹪。平均每條引物擴增出6.6個位點。象山港養(yǎng)殖花鱸群體的遺傳相似度為0.8815，遺傳變異度為0.1185。Shannon多樣性指數(shù)為19.5992，多樣值為0.1160。這說明目前象山港養(yǎng)殖花鱸的遺傳多樣性比較高。 使用了經(jīng)篩選具有多態(tài)性的25條隨機引物檢測了象山港養(yǎng)殖花鱸抗皮膚潰瘍病群體和患皮膚潰瘍病群體的基因組DNA多態(tài)性。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗性群體的多態(tài)位點比率為44.24﹪，遺傳相似度為0.8763，遺傳變