27249.外源基因在集胞藻6803中高效表達(dá)及調(diào)控的研究

1、華東師范大學(xué)博士學(xué)位論文外源基因在集胞藻6803中高效表達(dá)及調(diào)控的研究姓名：魏蘭珍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：王全喜20100301摘要低濃度的C02也可以明顯增強(qiáng)外源P妨基因的表達(dá)。(3)通過基因芯片數(shù)據(jù)和生物信息學(xué)的分析，初步確定ndhCKJ操縱子可能的啟動(dòng)子區(qū)域，并插入到P0載體報(bào)告基因的上游區(qū)域，轉(zhuǎn)化集胞藻6803，獲得轉(zhuǎn)基因株系P330。通過蛋白免疫印跡，研究不同生長(zhǎng)時(shí)期、不同高光誘導(dǎo)時(shí)間以及二氧化碳濃度下轉(zhuǎn)基因株

2、系中外源基因的表達(dá)情況。結(jié)果表明，該未知啟動(dòng)子在高光誘導(dǎo)4小時(shí)，低二氧化碳培養(yǎng)條件下，使外源egfp基因的表達(dá)水平達(dá)到最高。通過比較Pg—s與P330藻株中外源基因的表達(dá)情況，揭示ndhCKJ操縱子可能的肩動(dòng)予區(qū)域?qū)ν庠椿虻膯?dòng)效果更為顯著；P330藻株中外源基因的表達(dá)水平比Pgs藻株提高42倍，比P0藻株提高82倍；蛋白定量結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)基因P330藻株中，外源egfp基因的表達(dá)量可達(dá)總蛋白的I725％。本研究在構(gòu)建同源重組雙交換平

3、臺(tái)的基礎(chǔ)上，分析來源于聚球藻7942的groESL基因啟動(dòng)子、聚球藻7002的印筇基因啟動(dòng)子、SD序列以及集胞藻6803自身ndhCKJ操縱子可能的啟動(dòng)子區(qū)域?qū)?803中外源基因表達(dá)水平的影響。蛋白免疫印跡結(jié)果表明，這些調(diào)控元件均在一定程度提高了集胞藻6803中外源基因的表達(dá)效率，其中，ndhCKJ操縱子可能的啟動(dòng)子區(qū)域?qū)ν庠椿虮磉_(dá)水平的提高幅度最大。以上結(jié)果為最終解決藍(lán)藻細(xì)胞這一新型宿主系統(tǒng)中外源基因表達(dá)效率低下的問題注入了新