Zmcdc5片段的原核表達(dá)和純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、1976年,Nurse等在篩選裂殖酵母(S. pombe)細(xì)胞周期進(jìn)程突變體的過程中得到了基因cdc5,后來經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明CDC5對(duì)細(xì)胞周期G2期到M期的轉(zhuǎn)換是必需的:cdc5突變后造成細(xì)胞無法完成G2/M轉(zhuǎn)換而死亡;過量表達(dá)CDC5會(huì)縮短G2期,同時(shí)縮短整個(gè)細(xì)胞周期,并導(dǎo)致細(xì)胞變小.后來發(fā)現(xiàn),CDC5基因還在轉(zhuǎn)錄和前體mRNA的剪接過程中發(fā)揮著重要的作用,并且與NIPP1、PRL、IL-2、FGF-2及DLK等因子相互作用.該實(shí)驗(yàn)室根據(jù)玉

2、米胚芽和胚根差異表達(dá)的研究,克隆得到Zmcdc5基因的cDNA,并通過篩庫和反向PCR獲得了Zmcdc5基因組全長序列.該實(shí)驗(yàn)是以Zmcdc5的cDNA為模板,使用PCR獲得基因片段,再通過酶切連接,將得到的0.8kb的基因片段構(gòu)建于pET-30a表達(dá)載體上,經(jīng)過誘導(dǎo)表達(dá)和純化,獲得Zmcdc5的融合蛋白,其中包括了ZmCDC5 925個(gè)氨基酸中647~914共267個(gè)氨基酸殘基,大小為35.4kDa,并制備得到了抗體.通過Wester

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