10165.森林革蜱防御素基因的克隆、真核表達(dá)及功能分析

1、中圖分類號：Q965UDC：590密級：公開學(xué)校代碼：10094訝粵￡解為尤孥碩士學(xué)位論文(學(xué)歷碩士)森林革蜱防御素基因的克隆、真核表達(dá)及功能分析Genecloning，eukaryoticexpressionandfunctionalcharacterizationofdefensingenefromDermacentorsilvarum研究生姓名：李鳳佼指導(dǎo)教師：楊小龍教授劉敬澤教授學(xué)科專業(yè)：生態(tài)學(xué)研究方向：生理生態(tài)與分子生態(tài)學(xué)論文

2、開題日期：2012年4月10日二O一四年三月十七日摘要蜱類為專性吸血的體表寄生蟲，其宿主包括爬行類鳥類和哺乳類。森林革蜱廣泛分布于我國的東北、內(nèi)蒙古、河北、山西和新疆等地的森林和草原地區(qū)，并傳播多種病原體，危害人類健康并且對畜牧業(yè)的發(fā)展造成損失。關(guān)于森林革蜱的研究較為少見并且報(bào)道主要集中在宏觀生物學(xué)方面，如生物學(xué)和生態(tài)學(xué)方面。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建森林革蜱成蜱cDNA文庫進(jìn)行特異性篩選并經(jīng)NCBI比對后確定獲得四條符合防御素特征的基因序列，分別

3、命名為Dsdefensin一1、Dsdefensin一2、Dsdefensin3和Dsdefensin4。對這四條基因序列均進(jìn)行了開放閱讀框、等電點(diǎn)、信號肽、成熟肽以及三維結(jié)構(gòu)等方面的預(yù)測。Ds—defensin一1：序列全長為382bp，開放閱讀框?yàn)?13bp，分子量為73846Da，等電點(diǎn)為607，共編碼71個(gè)氨基酸，信號肽長度為22個(gè)氨基酸，問隔肽長度為15個(gè)氨基酸，成熟肽長度為34個(gè)氨基酸；Ds—defensin一2：序列全長為

4、280bp，開放閱讀框?yàn)?47bp，分子量為51638Da，等電點(diǎn)為439，共編碼49個(gè)氨基酸，信號肽長度為23個(gè)氨基酸，間隔肽長度為14個(gè)氨基酸，成熟肽長度為12個(gè)氨基酸；Dsdefensin3：序列全長為280bp，開放閱讀框?yàn)?16bp，分子量為77710Da，等電點(diǎn)為485，共編碼72個(gè)氨基酸，信號肽長度為22個(gè)氨基酸，間隔肽長度為16個(gè)氨基酸，成熟肽長度為34個(gè)氨基酸；Dsdefensin一4：序列全長為278bp，開放閱讀框

5、為216bp，分子量為75007Da，等電點(diǎn)為461，共編碼72個(gè)氨基酸，信號肽長度為23個(gè)氨基酸，間隔肽長度為14個(gè)氨基酸，成熟肽長度為35個(gè)氨基酸。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步選取Ds—defensin1作為主要研究對象進(jìn)行后續(xù)關(guān)于人工合成蛋白生物學(xué)功能和真核表達(dá)的研究。本實(shí)驗(yàn)對人工合成蛋白Dsdefensin1進(jìn)行了生物學(xué)功能的檢測，包括抗菌作用、抗氧化作用和溶血作用。結(jié)果顯示Ds—defensin1對革蘭氏陽性菌具有較強(qiáng)的抗菌活性，對革蘭氏陰性菌