鼠李糖乳桿菌對肉雞生長性能及天然免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、β-防御素和Cathelicidins是家禽體內(nèi)兩個(gè)主要抗菌肽家族，在家禽抗感染先天免疫中發(fā)揮著重要的作用。益生性鼠李糖乳桿菌MLGA及其完整細(xì)胞壁肽聚糖可促進(jìn)雞免疫細(xì)胞和腸組織-防御素9(-defensin9，AvBD9)基因的表達(dá)。然而有關(guān)鼠李糖乳桿菌MLGA在肉雞體內(nèi)發(fā)揮抗感染作用和防御素表達(dá)的調(diào)控機(jī)制仍未完全闡明。本試驗(yàn)從雞體內(nèi)開展研究，探討肉雞日糧中鼠李糖乳桿菌MLGA適宜添加量，并在此基礎(chǔ)上探討感染雞腸炎沙門氏菌條件下曰糧添

2、加鼠李糖乳桿菌MLGA對雞天然免疫功能的影響，初步闡明鼠李糖乳桿菌MLGA發(fā)揮抗感染作用的途徑和機(jī)制，為益生菌的篩選和推廣應(yīng)用提供更加堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。
　　試驗(yàn)一:選用200羽1日齡艾拔益加肉雞(AA肉雞)白羽公肉仔雞隨機(jī)分成5組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽。5個(gè)處理組為對照組、抗生素組和3個(gè)不同水平鼠李糖乳桿菌MLGA試驗(yàn)組，對照組飼喂不含任何抗生素的基礎(chǔ)日糧，抗生素組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加桿菌肽鋅40mg/kg，試

3、驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上分別添加1×109cfu/kg、1×1010cfu/kg和1×1011cfu/kg鼠李糖乳桿菌MLGA，飼養(yǎng)周期為21d。在試驗(yàn)開始的第1d、第14d和第21d，以重復(fù)為單位稱量各組雞只的空腹重并每天記錄飼料投料量和剩余量，以計(jì)算平均日采食量、平均日增重和料重比。在14d和21d時(shí)，從每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)取2只雞翅靜脈采血各10mL，并立即致死分離脾臟、法氏囊和胸腺，無菌條件下取出盲腸內(nèi)容物，用干凈的載玻片刮取空腸中段腸

4、黏膜。用于測定血清細(xì)胞因子、腸黏膜sIgA、免疫器官指數(shù)和盲腸內(nèi)容物中大腸桿菌的載菌量。結(jié)果顯示:日糧中添加1×109cfu/kg、1×1010cfu/kg和1×1011cfu/kg三個(gè)水平的鼠李糖乳桿菌MLGA均能顯著降低1～21日齡肉雞料重比，改善肉雞的生長性能(P＜0.05)。曰糧添加鼠李糖乳桿菌MLGA對肉雞血清免疫球蛋白和腸黏膜sIgA的含量有不同程度的提高作用，添加1×1010cfu/kg鼠李糖乳桿菌MLGA能顯著提高血清I

5、L-10含量，降低IL-6含量(P＜0.05)，對機(jī)體免疫和抗炎反應(yīng)起著重要的作用。添加1×1010cfu/kg和1×1011 cfu/kg鼠李糖乳桿菌MLGA可顯著抑制盲腸內(nèi)大腸桿菌的增殖(P＜0.05)。綜合以上指標(biāo)，肉雞日糧鼠李糖乳桿菌MLGA適宜的添加量為1×1010cfu/kg。
　　試驗(yàn)二:選取1日齡AA白羽公肉雞雞苗120羽，隨機(jī)分為3個(gè)處理組，每個(gè)組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10羽。3個(gè)處理組分為對照組，腸炎沙門氏菌組和持

6、續(xù)飼喂鼠李糖乳桿菌MLGA1×1010 cfu/kg并感染腸炎沙門氏菌組，飼養(yǎng)周期為21d。對照組飼喂不含任何抗生素的基礎(chǔ)日糧，感染組于6日齡8:00鋤經(jīng)食道灌服1×106 cfu雞腸炎沙門氏菌。在7日齡、10日齡、14日齡和21日齡每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1只雞，心臟采血，分離血清，用于測定細(xì)胞因子。剪取十二指腸、回腸和空腸中段約3cm，經(jīng)常規(guī)石蠟切片，測定其絨毛長度和隱窩深度，并計(jì)算絨毛長度和隱窩深度的比值。無菌采取肝臟和盲腸內(nèi)容物，用于測

7、定其腸炎沙門氏菌的載菌量。結(jié)果顯示:肉雞感染腸炎沙門氏菌前后持續(xù)喂服鼠李糖乳桿菌MLGA能夠顯著降低血清中C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、趨化因子RANTES、白細(xì)胞介素8(Interleukin-8，IL-8)和腫瘤壞死因子α（Tumor Necrosis Factorα，TNF-α）含量，并提高轉(zhuǎn)化生長因子-β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）的含量(P＜0.

8、05)。鼠李糖乳桿菌MLGA極顯著降低21d肉雞盲腸內(nèi)容物中沙門氏菌的含量(P＜0.01)，同時(shí)能夠顯著改善肉雞感染腸炎沙門氏菌后空腸的絨毛長度，提高絨毛長度和隱窩深度的比值(P＜0.05)，提高肉雞對腸炎沙門氏菌的抵抗力。
　　試驗(yàn)三:試驗(yàn)動物和分組同試驗(yàn)二，在7日齡、10日齡、14日齡和21日齡每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取1只雞，采用心臟采血法采取抗凝血4ml，用于分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononucle

9、ar cells，PBMCs)，迅速處死后在在冰浴上剪取脾臟、肝臟、法氏囊、空腸、回腸和盲腸，應(yīng)用PT-PCR方法檢測樣品中Toll樣受體2(Toll-likereceptor2,TLR2)、NOD1(nucleotidebinding oligomerzation domain,NOD)、嗜中性白細(xì)胞堿性磷酸酶3(neutrophilic alkaline phosphatase3，NALP3)、AvBD9和Cath-B1(Cathe

10、licidin-B1)基因的mRNA相對表達(dá)量。結(jié)果表明:肉雞感染腸炎沙門氏菌后，鼠李糖乳桿菌能不同程度地促進(jìn)感染腸炎沙門氏菌的肉雞組織和PBMC中TLR2、Cath-B1和AvBD9 mRNA的表達(dá)，提高肉雞抗腸炎沙門氏感染免疫功能，且本試驗(yàn)結(jié)果表明肉雞可能通過TLR2介導(dǎo)Cath-B1的表達(dá)。
　　綜上所述，日糧中添加鼠李糖乳桿菌MLGA可顯著提高肉仔雞的生產(chǎn)性能，同時(shí)能提高肉仔雞血清中免疫蛋白水平和抗炎細(xì)胞因子含量。持續(xù)喂服