靈杞黃斑顆粒含藥血清對(duì)兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討靈杞黃斑顆粒含藥血清對(duì)兔RPE細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：運(yùn)用血清藥理學(xué)方法制備靈杞黃斑顆粒含藥血清，以H2O2（500 μmol/L）誘導(dǎo)建立體外RPE細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，分為正常對(duì)照（NC）組、模型（M）組、模型+空白血清（MS）組、模型+低劑量藥物血清（ML）組和模型+高劑量藥物血清（MH）組，分別采用MTT、TUNEL和流式細(xì)胞方法對(duì)各組RPE細(xì)胞的凋亡進(jìn)行檢測(cè)。進(jìn)一步通過(guò)測(cè)定SOD等抗氧化酶的活性以及

2、MDA等不飽和醛類(lèi)的水平，來(lái)反映RPE細(xì)胞的抗氧化能力與氧化損傷程度，并用 western blot，免疫組化等方法檢測(cè)Caspase-3及Bcl-XL等凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件。 結(jié)果：MTT結(jié)果顯示含藥血清可以促進(jìn)細(xì)胞增殖，減少H2O2對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制。流式細(xì)胞儀檢測(cè)：NC、M、MS、ML、MH組各組凋亡率分別為4.85％±0.46％、20.02％±1.37％、21.84％±1.53％、

3、13.56％±0.87％、8.58％±0.74％，ML和MH組的凋亡率比M組明顯減少。TUNEL檢測(cè)結(jié)果：NC組中未見(jiàn)明顯凋亡細(xì)胞，M組中可見(jiàn)大量胞核黃色著染的凋亡細(xì)胞，ML組中散見(jiàn)胞核黃色著染的凋亡細(xì)胞，數(shù)量明顯少于M組，MH組凋亡細(xì)胞進(jìn)一步減少。MDA含量及SOD活性測(cè)定：與NC組比較，M組RPE細(xì)胞MDA含量明顯增高，SOD活性明顯下降；ML組MDA水平增高幅度較M組減小，MH組更加減小，ML組和MH組SOD水平與M組相比均明顯升