大鼠心肌梗死后梗死周邊區(qū)HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2表達的動態(tài)變化.pdf

1、目的：急性心肌梗死后梗死周邊缺血區(qū)尚存活的心肌，往往在梗死后室性心律失常的發(fā)生上起關(guān)鍵作用。心肌細胞膜離子通道的異?；顒有纬呻娭貥?gòu)，可能是導(dǎo)致心律失常的重要機制。研究表明超極化激活環(huán)核苷酸門控（HCN）陽離子通道亞單位為編碼心臟起搏電流（If）的基因，包括HCN1～4共4個異構(gòu)型，HCN主要存在于竇房結(jié)（SAN）起博細胞中，有少量存在心肌工作細胞中。成年大鼠心室肌細胞中，HCN2是最主要的異構(gòu)型，有極少量HCN4表達。生理情況下HCN通

2、道在起搏細胞舒張期自動除極中發(fā)揮重要作用，參與心臟的起搏活動。有研究發(fā)現(xiàn)病理情況下HCN2和HCN4通道表達及激活異常，這可能引起心肌細胞自律性增高而誘發(fā)心律失常。KCNE基因家族編碼一類只含一個跨膜結(jié)構(gòu)的離子通道蛋白，作為輔助性β-亞基，與組成離子通道的α-亞基相互作用，形成穩(wěn)定的離子通道復(fù)合體，發(fā)揮不同的生理效應(yīng)。KCNE1、KCNE2主要分布在心肌，參與對門控鉀離子通道的調(diào)節(jié)，影響心肌細胞動作電位的Ⅱ、Ⅲ相復(fù)極。因此，其表達的異常

3、將影響相應(yīng)離子通道的生理特性。本研究通過檢測急性心肌梗死后梗死周邊區(qū)心肌組織中HCN2、HCN4通道蛋白及KCNE1、KCNE2亞單位的mRNA和蛋白質(zhì)表達，了解其表達是否發(fā)生變化，及其動態(tài)變化的規(guī)律，為探討心肌梗后室性心律發(fā)生的離子機制提供更多的理論基礎(chǔ)。 方法：結(jié)扎Sprague-Dawley大鼠左冠狀動脈前降支建立心肌梗死模型。術(shù)后成功建模的20只大鼠隨機分為4組：AMI后24h組、1周組、2周組、4周組，每組5只。假手術(shù)

4、組大鼠共20只，為左冠狀動脈前降支只穿線不打結(jié)，術(shù)后隨機分成前述4個時間點，每個時間點5只。于各時間點取大鼠左心室梗死周邊區(qū)心肌組織（假手術(shù)組大鼠取左室相應(yīng)部位的心肌組織），分別用RT-PCR及Western Blot檢測HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2 mRNA和蛋白質(zhì)的表達，免疫組化法定性檢測HCN2、HCN4蛋白質(zhì)的表達。 結(jié)果：假手術(shù)組大鼠左室心肌中有HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的表達。心肌梗死后

5、各時間點梗死周邊區(qū)心肌組織中HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達均呈動態(tài)變化的過程：（1）、HCN2、HCN4的表達變化：心肌梗死后24h，二者的表達出現(xiàn)緩慢的上升趨勢，在1周時表達達到峰值，之后逐漸下降，但在梗死后4周時，HCN2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達水平仍高于假手術(shù)組，而HCN4的表達已回落至假手術(shù)組水平；（2）、KCNE1、KCNE2的表達變化：心肌梗死后24h，KCNE1的表達顯著增高，之后，表達

6、繼續(xù)增高，在2周時達到峰值，4周時表達下降，mRNA的表達回落至假手術(shù)組水平，但蛋白質(zhì)的表達仍高于24小時組；KCNE2的表達在心肌梗死后24h時也顯著增高，1周時達到峰值，之后緩慢下降，但在4周時其mRNA的表達仍高于假手術(shù)組，而蛋白質(zhì)的表達已回落至假手術(shù)組水平。 結(jié)論：正常大鼠左室心肌中存在HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的表達；急性心肌梗死后左室梗死周邊區(qū)心肌組織中HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的mR