泛素在脾臟樹突狀細(xì)胞中的表達(dá)及其在MODS病程中的作用研究.pdf

1、目的:1.探討MODS時(shí)期脾臟樹突狀細(xì)胞(DC)中泛素(Ub)的蛋白和基因表達(dá)變化及意義。2.研究可能泛素共價(jià)結(jié)合到MHC-Ⅱ上使其泛素化從而影響樹突狀細(xì)胞(DC)的成熟和活化,為調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答反應(yīng)提供新的監(jiān)控指標(biāo)。
　　 方法：通過腹腔內(nèi)注射酵母多糖懸液制成MODS模型,實(shí)驗(yàn)分組:(1)正常對照組(n=30)；MODS組(n=180)并隨機(jī)分為6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、5-7日、12日組；H-E切片觀察各時(shí)間點(diǎn)脾臟和

2、心、肝、肺、腎的病理形態(tài)學(xué)改變；免疫組化檢測脾臟中泛素蛋白表達(dá)；免疫熒光檢測CD86、CD11c、MHC-Ⅱ的表達(dá)；通過熒光定量PCR檢測小鼠脾臟內(nèi)泛素基因mRNA表達(dá)的變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟DC免疫表型、外周血單個(gè)核細(xì)胞MHC-Ⅱ類分子。
　　 結(jié)果:1.泛素蛋白在脾臟DC的表達(dá):在傷后6小時(shí)泛素在脾臟DC中的陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)量增多,傷后12-24小時(shí)出現(xiàn)表達(dá)數(shù)量持續(xù)增高,24小時(shí)達(dá)高峰,與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05

3、)。傷后48小時(shí)接近正常,5-7天表達(dá)升高,10-12天出現(xiàn)表達(dá)的顯著下降,與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。熒光定量PCR顯示泛素mRNA在傷后6小時(shí)表達(dá)增強(qiáng),12-24小時(shí)表達(dá)繼續(xù)增強(qiáng),與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。48小時(shí)表達(dá)接近正常,10-12天再次出現(xiàn)表達(dá)下降,與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.脾臟DC:用CD11c熒光標(biāo)記DC,得到DC數(shù)量在6-24小時(shí)組明顯增加,48小時(shí)開始下降,5-7日接

4、近正常,10-12日DC數(shù)量再次明顯增生；熒光標(biāo)記MHC-Ⅱ、CD86得到,傷后6小時(shí)DC表面分子MHC-Ⅱ、CD86表達(dá)增高,12-24小時(shí)表達(dá)下降,與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),10-12天MHC-Ⅱ和CD86表達(dá)明顯降低,與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.各臟器功能指標(biāo):傷后早期(6-12小時(shí))各項(xiàng)指標(biāo)變化不明顯,急性期(24-48小時(shí))組,實(shí)驗(yàn)鼠功能指標(biāo)中ALT、BUN、CK升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。外周血單核

5、細(xì)胞對MHC-Ⅱ分子表達(dá)減少,病理改變主要為一部分臟器實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性伴間質(zhì)淤血、水腫；傷后5-7日組,實(shí)驗(yàn)小鼠功能指標(biāo)與臟器病理形態(tài)均有好轉(zhuǎn)。外周血單核細(xì)胞MHC-Ⅱ分子表達(dá)增加,10-12日,各項(xiàng)臟器指標(biāo)均顯著上升,外周血單個(gè)核細(xì)胞MHC-Ⅱ分子表達(dá)下降。主要臟器實(shí)質(zhì)細(xì)胞多呈變性與壞死改變。
　　 結(jié)論:1.MODS中泛素蛋白在小鼠脾臟中的表達(dá)變化與臟器病變有密切關(guān)系,泛素蛋白在MODS兩次打擊機(jī)體功能障礙時(shí)呈先升高后下降趨勢。