迷走神經(jīng)刺激后處理對大鼠在體心肌缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　 研究表明，在急性心肌缺血恢復(fù)血流灌注后，由缺血-再灌注損傷(ischemia reperfusion injury，IRI)所致的心肌梗死后死亡率仍然高達(dá)10％。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)亦發(fā)現(xiàn)，心肌缺血時(shí)高達(dá)50%的最終心肌梗死面積是歸因于IRI。目前，已經(jīng)公認(rèn)缺血預(yù)處理是最為強(qiáng)大的內(nèi)源性心肌保護(hù)干預(yù)措施。然而，由于心肌缺血事件的不可預(yù)測性，所以在臨床實(shí)踐中很難對其采取預(yù)先干預(yù)措施。因此，除了能夠在實(shí)施心臟手術(shù)的患者選擇性應(yīng)用之外

2、，缺血預(yù)處理的臨床應(yīng)用價(jià)值十分有限。缺血后處理則解決了臨床干預(yù)時(shí)機(jī)選擇的問題，而且其也已被證明具有確切的心肌保護(hù)作用。但是，諸如反復(fù)阻塞冠狀動(dòng)脈這樣的操作有導(dǎo)致病變冠狀動(dòng)脈破裂或粥樣斑塊脫落等并發(fā)癥的高度風(fēng)險(xiǎn)，故其臨床應(yīng)用價(jià)值也十分有限。相比之下，肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理則能夠避免在心臟直接進(jìn)行操作，而且大量研究表明其對心肌IRI具有明確的保護(hù)作用。此外，肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理還具有安全、實(shí)施簡單和費(fèi)用低廉等優(yōu)點(diǎn)。因此，肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理不失為臨

3、床治療心肌IRI的一種較佳選擇。
　　 現(xiàn)已明確，炎癥反應(yīng)在心肌IRI的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著極為重要的致病作用，并且調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)可以減輕心肌IRI。晚近研究發(fā)現(xiàn)，迷走神經(jīng)同樣具有免疫炎癥調(diào)節(jié)功能，其激活后能夠通過膽堿能抗炎通路(cholinergic anti-inflammatory pathway)而實(shí)現(xiàn)對炎癥反應(yīng)的調(diào)控。在內(nèi)毒素血癥、結(jié)腸炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和IRI等炎癥性疾病時(shí)，迷走神經(jīng)刺激能夠通過抑制炎癥細(xì)胞募集和炎癥細(xì)

4、胞因子釋放而調(diào)控炎癥反應(yīng)，進(jìn)而發(fā)揮其保護(hù)作用。雖然已經(jīng)證實(shí)迷走神經(jīng)刺激能夠減小IRI所致的心肌梗死面積，但是目前尚無研究系統(tǒng)觀察迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌缺血-再灌注損傷時(shí)心肌局部與全身炎癥反應(yīng)的影響。
　　 聯(lián)合應(yīng)用不同的干預(yù)措施以獲得有益的強(qiáng)效心肌保護(hù)效果一直是心肌IRI保護(hù)研究領(lǐng)域的重要方向，而且迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理是兩種作用機(jī)制明顯不同的心肌保護(hù)干預(yù)措施。因此，我們設(shè)計(jì)了這個(gè)隨機(jī)對照實(shí)驗(yàn)，主要目的包括：<

5、br>　　 ①觀察迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌IRI保護(hù)的有效性、可用性和最佳干預(yù)時(shí)間；
　　 ②評(píng)價(jià)將迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理這兩種極具臨床應(yīng)用前景的簡單干預(yù)措施聯(lián)合應(yīng)用能否獲得有益的協(xié)同性心肌保護(hù)作用；
　　 ③觀察PI3K/Akt和JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在迷走神經(jīng)刺激后處理、肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理、聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理心肌保護(hù)作用中的地位，以探索不同心肌保護(hù)干預(yù)措施的內(nèi)在作用

6、機(jī)制。
　　 本實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分：
　　 第1部分：迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用及其最佳干預(yù)時(shí)間的研究
　　 第1部分實(shí)驗(yàn)的目的是采用大鼠在體心肌IRI模型比較性觀察在不同時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理對心肌IRI及其炎癥反應(yīng)的影響，以確定迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護(hù)作用及其最佳干預(yù)時(shí)間。
　　 將140只體重290～320g的成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠麻醉后隨機(jī)

7、平均分為七組（每組20只）：空白對照組(S組)；對照組（C組）；缺血預(yù)處理組（IPC組）；心肌缺血15min迷走神經(jīng)刺激后處理組（POESI15組）；再灌注前迷走神經(jīng)刺激后處理組（POESR0組）；再灌注30min迷走神經(jīng)刺激后處理組處理組(POESR30組)；再灌注60min迷走神經(jīng)刺激后處理組（POESR60組）。所有大鼠開胸后采用絲線將其冠狀動(dòng)脈左前降支（left anterior descending coronary arte

8、ry，LAD）套扎做成活結(jié)。除S組之外，所用大鼠均接受局部心肌缺血30min(阻斷LAD)和再灌注120min（開放LAD）的處理。C組不采用任何其他干預(yù)措施；IPC組在結(jié)扎LAD前進(jìn)行3個(gè)循環(huán)的缺血預(yù)處理，每個(gè)循環(huán)是由5min的LAD阻斷和5min的LAD開放組成，總處理時(shí)間是30min;POESI15、POESR0、POESR30和POESR60組是分別在心肌缺血15min時(shí)、心肌再灌注前即刻、心肌再灌注30min時(shí)和心肌再灌注60

9、min時(shí)對大鼠的右側(cè)迷走神經(jīng)進(jìn)行電刺激，持續(xù)時(shí)間為30min。實(shí)驗(yàn)過程中，連續(xù)監(jiān)測心率(heartrate，HR)、平均動(dòng)脈壓(mean arterial pressure，MAP)和Ⅱ?qū)?lián)心電圖（electrocardiogram，ECG），并保持大鼠直腸溫度在36.5～37.5℃之間。然后，將每組大鼠進(jìn)一步隨機(jī)平均分為2個(gè)亞組（每亞組10只），第1亞組在再灌注30min、60min和120min時(shí)抽取血液標(biāo)本，采用大鼠專用試劑盒分別

10、測定血清心肌肌鈣蛋白I（cardiac troponin-I，cTnI）、肌酸激酶心肌型同工酶(myocardial-bound creatine kinase，CK-MB)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、高遷移率組蛋白1（high mobility group box 1 protein，HMGB1）、細(xì)胞間粘附分子1（intercellular adhesion molecule 1

11、，ICAM1）、白介素-1(interleukin-1，IL-1)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)和白介素-10(interleukin-10，IL-10)的濃度；在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采用伊文思藍(lán)和氯化三苯基四氮唑雙重染色技術(shù)檢測心肌梗死面積(infarct size，IS%)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，第2亞組用于檢測缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、ICAM1、IL-1、IL-6和IL-10的含量。
　

12、　 結(jié)果：顯示，各組大鼠的一般情況和心肌缺血前血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)的基礎(chǔ)值比較差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 與S組、C組或IPC組相比，POESI15組的HR在缺血期和再灌注期間均明顯降低，POESRO組、POESR30組和POESR60組的HR在再灌注期間明顯降低。與S組相比，C組、IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組在缺血期和再灌注期的MAP和心率血壓乘積（rate-pressure p

13、roduct，RPP）均明顯降低。與IPC組相比，C組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血期發(fā)生室性心律失常的大鼠數(shù)目明顯增多，而且缺血期室性心律失常評(píng)分亦明顯增高。與C組相比，IPC組、POESI15組和POESR0組再灌注初期發(fā)生室性心動(dòng)過速(ventricular tachycardia，VT)的大鼠數(shù)目明顯減少，而且再灌注初期室性心律失常評(píng)分亦明顯降低。
　　 與C組相比，IPC組、

14、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度均明顯降低；與IPC組相比，POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組的IS%值均明顯增高；與POESI15組相比，POESR60組的IS%值、血清cTnI、CK-MB濃度明顯增高，POESR0組和POESR30組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與POESR0組相比，POESR6

15、0組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度明顯增高，POESR30組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與POESR30組相比，POESR60組的IS%值、血清CK-MB濃度無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 與S組相比，C組再灌注30min、60min和120min時(shí)血清TNF-α濃度明顯增高；C組、IPC組和POESI15組再灌注60min時(shí)血清HMGB1濃度，C組、POESR0組、POESR30組和POESR

16、60組再灌注120min時(shí)血清HMGB1濃度明顯增高；C組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時(shí)血清ICAM1濃度明顯增高；C組、IPC組、POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時(shí)血清IL-1的濃度明顯增高；C組、IPC組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時(shí)血清IL-6濃度明顯增高；POESI15組再灌注120min時(shí)血清IL-10濃度

17、明顯增高。與C組相比，IPC組和POESI15組再灌注30min和60min時(shí)血清TNF-α濃度明顯降低；IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時(shí)血清TNF-α、HMGB1、ICAM1、IL-1、IL-6濃度明顯降低。與IPC組相比，POESI15組再灌注60min時(shí)血清TNF-α濃度明顯增高；POESR60組再灌注120min時(shí)血清TNF-α濃度明顯增高；POESR0組、POE

18、SR30組和POESR60組再灌注120min時(shí)血清HMGB1和ICAM1濃度明顯增高；POESI15組再灌注120min時(shí)血清IL-1的濃度明顯降低；POESI15組和POESR0組再灌注120min時(shí)血清IL-6濃度明顯降低。與POESI15組相比，POESR0組、POESR30組和POESR60組再灌注120min時(shí)血清HMGB1和ICAM1的濃度明顯增高；POESR60組再灌注120min時(shí)血清IL-1、IL-6和TNF-α的濃

19、度明顯增高。與POESR0組相比，POESR60組再灌注120min時(shí)血清HMGB1、IL-6和TNF-α的濃度明顯增高；POESR30組和POESR60組再灌注120min時(shí)血清ICAM1濃度明顯增高。與POESR30組相比，POESR60組再灌注120min時(shí)血清HMGB1、ICAM1和TNF-α濃度明顯增高。
　　 與S組相比，C組缺血區(qū)心肌組織TNF-α和HMGB1含量明顯增高，IPC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯降

20、低；C組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯增高；C組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯增高，IPC組、POESI15組、POESR0組和POESR30組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低；C組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織ICAM1、IL-1和IL-6含量明顯增高；C組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1和IL-6含量明顯增高，IPC組、POESI15組

21、和POESR0組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量明顯降低；C組、IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織IL-1含量、缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；IPC組和POESI15組非缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯降低。與C組相比，IPC組、POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、IL

22、-1和IL-6含量明顯降低；POESI15組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高。與IPC組相比，POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯增高；POESI15組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低，POESR60組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯增高；POESI15組、POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量明顯增高；

23、POESR30組和POESR60組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1、缺血區(qū)IL-6含量明顯增高；POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-1、非缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯增高。與POESI15組相比，POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量、非缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量、缺血區(qū)心肌組織IL-1含量明顯增高；POESR60組缺血區(qū)心肌組織HMGB1、IL

24、-6含量明顯增高，缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯降低；POESR0組、POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量、非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、IL-1和IL-6含量明顯增高。與POESR0組相比，POESR60組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、IL-1、IL-6含量、非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、IL-1和IL-6含量明顯增高；POESR30組和POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織

25、ICAM1含量明顯增高。與POESR30組相比，POESR60組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織ICAM1和IL-6含量以及非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量均明顯增高。
　　 第2部分：聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理對心肌缺血-再灌注損傷保護(hù)作用的研究
　　 根據(jù)第1部分實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，在確定迷走神經(jīng)刺激后處理最佳干預(yù)時(shí)間的基礎(chǔ)上，我們設(shè)計(jì)了這部分實(shí)驗(yàn)，其目的是評(píng)價(jià)聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理

26、能否獲得增強(qiáng)的心肌保護(hù)作用。
　　 將120只體重290～320g的成年雄性SD大鼠麻醉后隨機(jī)平均分為六組（每組20只）：空白對照組(S組)；對照組（C組）；缺血預(yù)處理組(IPC組)；迷走神經(jīng)刺激后處理組（POES組）；肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理組(LRIPOC組)；聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理組（POES-LRIPOC組）。C組和IPC組的處理同第1部分實(shí)驗(yàn)；POES組是根據(jù)第1部分實(shí)驗(yàn)獲得的結(jié)果在最佳時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行迷走

27、神經(jīng)刺激；LRIPOC組的基本處理與C組相同，在心肌缺血20min時(shí)采用止血帶結(jié)扎大鼠雙側(cè)后肢造成雙后肢缺血10min，并在開放LAD實(shí)施心肌血流再灌注的同時(shí)開放后肢血流灌注；POES-LRIPOC組的基本處理與C組相同，迷走神經(jīng)刺激后處理的實(shí)施方法同POES組，肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理的實(shí)施方法同LRIPOC組。然后，將每組大鼠進(jìn)一步隨機(jī)平均分為2個(gè)亞組（每亞組10只），各組檢測項(xiàng)目與第1部分實(shí)驗(yàn)相同。
　　 結(jié)果：顯示，各組大鼠的

28、一般情況和心肌缺血前血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)的基礎(chǔ)值比較差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 與S組、C組或IPC組相比，POES組和POES-LRIPOC組的HR在缺血期和再灌注期明顯降低。與S組相比，C組、IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組的MAP和RPP在缺血期和再灌注期均明顯降低。與IPC組相比，C組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組缺血期室性心律失常發(fā)生率和室性心律失常評(píng)分明顯增高。與C組

29、相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注期室性心律失常發(fā)生率和室性心律失常評(píng)分均明顯降低；與LRIPOC組相比，IPC組、POES組和POES-LRIPOC組再灌注期間室性心律失常發(fā)生率和室性心律失常評(píng)分明顯降低。
　　 與C組相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組的IS%值、血清cTnI和CK-MB濃度均明顯降低；與IPC組或POES-LRIPOC組相比，POES

30、組和LRIPOC組的IS%值明顯增高；與POES組相比，LRIPOC組的IS%值和血清cTnI濃度明顯增高，LRIPOC組的血清CK-MB濃度明顯降低。與LRIPOC組相比，IPC組和POES-LRIPOC組的血清cTnI和CK-MB濃度均明顯降低。
　　 與S組相比，C組和LRIPOC組再灌注30min時(shí)血清TNF-α濃度明顯增高；C組再灌注60min和120min時(shí)血清TNF-α濃度明顯增高，IPC組和POES-LRIPOC

31、組再灌注60min時(shí)血清TNF-α濃度明顯降低；IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注120min時(shí)血清TNF-α濃度明顯降低；C組、IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注60min時(shí)血清HMGB1濃度明顯增高；C組和LRIPOC組再灌注120min時(shí)血清HMGB1濃度明顯增高；C組、POES組和LRIPOC組再灌注120min時(shí)血清ICAM1濃度明顯增高；C組、IPC組和LR

32、IPOC組再灌注120min時(shí)血清IL-1和IL-6濃度明顯增高；POES組和POES-LRIPOC組再灌注120min時(shí)血清IL-10濃度明顯增高。與C組相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組再灌注30min、60min和120min時(shí)血清TNF-α濃度、再灌注120min時(shí)血清HMGB1、ICAM1、IL-1、IL-6濃度明顯降低：IPC組再灌注60min時(shí)血清HMGB1濃度明顯降低；POES-LRIP

33、OC組再灌注120min時(shí)血清IL-10濃度明顯增高。與IPC組相比，POES組和LRIPOC組再灌注60min時(shí)血清TNF-α濃度明顯增高；LRIPOC組再灌注120min時(shí)血清HMGB1和ICAM1濃度明顯增高；POES組和POES-LRIPOC組再灌注120min時(shí)血清IL-1和IL-6濃度明顯降低。與POES組相比，LRIPOC組再灌注60min時(shí)血清TNF-α濃度、再灌注120min時(shí)血清HMGB1、ICAM1、IL-1和IL

34、-6濃度明顯增高；POES-LRIPOC組再灌注120min時(shí)血清ICAM1濃度明顯降低。與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組再灌注30min、60min和120min時(shí)血清TNF-α濃度、再灌注120min時(shí)血清HMGB1、ICAM1、IL-1和IL-6濃度均明顯降低。
　　 與S組相比，C組缺血區(qū)心肌組織TNF-α和HMGB1含量以及非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1和ICAM1含量明顯增高；IPC組和POES

35、-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α含量明顯降低；IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低；C組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織ICAM1含量明顯增高；IPC組、POES組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1和IL-6含量明顯降低；C組、POES組和LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織IL-1和IL-6含量明顯增高；C組、IPC組

36、、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織IL-1、IL-10含量、缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；C組和LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯增高。與C組相比，IPC組、POES組、LRIPOC組和POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織TNF-α、HMGB1、ICAM1、IL-1和IL-6含量均明顯降低；POES組和POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL

37、-10含量明顯增高。與IPC組相比，POES組和LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、ICAM1和IL-1含量明顯增高；POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低，缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；POES組和POES-LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1含量明顯降低；LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織ICAM1、IL-1和IL-6含量，缺血區(qū)心肌組織IL-6含量明顯增高。與POES組相比，PO

38、ES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、ICAM1和IL-1含量明顯降低，非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高；LRIPOC組非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、ICAM1、IL-1和IL-6含量以及缺血區(qū)心肌組織ICAM1、IL-1和IL-6含量明顯增高，缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯降低。與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織TNF-α、ICAM1、IL-1和IL-6含量以及非缺血區(qū)心肌組織HMGB1、ICA

39、M1、IL-1和IL-6含量明顯降低，缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織IL-10含量明顯增高。
　　 第3部分:PI3K/Akt和JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在迷走神經(jīng)刺激后處理以及聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理心肌保護(hù)作用機(jī)制中地位的研究
　　 本部分實(shí)驗(yàn)的目的是探討PI3K/Akt和JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在單獨(dú)應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理以及聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理心肌保護(hù)作用機(jī)

40、制中的地位。
　　 將20只體重290～320g的成年雄性SD大鼠麻醉后隨機(jī)平均分為四組（每組5只）：對照組(C組)；迷走神經(jīng)刺激后處理組(POES組)；肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理組（LRIPOC組）；聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理組（POES-LRIPOC組）。各組的處理基本同本實(shí)驗(yàn)第二部分，但是在開放LAD實(shí)施再灌注60min時(shí)結(jié)束實(shí)驗(yàn)，分別取大鼠左心室缺血區(qū)心肌標(biāo)本和右心室非缺血區(qū)心肌標(biāo)本。從缺血與非缺血區(qū)心肌標(biāo)本

41、中提取總蛋白和總RNA，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time quantitative polymerase chain reaction，RQ-PCR)技術(shù)觀察Akt和STAT3基因mRNA在缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織的表達(dá)情況，并通過免疫蛋白印跡分析(Western-blotting)技術(shù)觀察缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt和STAT3蛋白磷酸化的情況。
　　 RQ-PCR結(jié)果顯示，與C組相比，POES-

42、LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt基因和STAT3基因mRNA表達(dá)均明顯增強(qiáng)；與POES組相比，POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt基因和STAT3基因mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)；與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織Akt基因和STAT3基因mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)。
　　 Western-blotting結(jié)果顯示，與C組相比，POES組、LRIPOC組

43、和POES-LRIPOC組的缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織p-Akt蛋白和p-STAT3蛋白的灰度值明顯增加；與POES組相比，POES-LRIPOC組的缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織p-Akt蛋白和p-STAT3蛋白的灰度值明顯增加；與LRIPOC組相比，POES-LRIPOC組的缺血區(qū)心肌組織和非缺血區(qū)心肌組織p-Akt蛋白和p-STAT3蛋白的灰度值明顯增加。
　　 結(jié)論：
　　 通過本實(shí)驗(yàn)，我們得出以下結(jié)論：

44、
　　 1．心肌缺血15min時(shí)、再灌注前即刻、再灌注30min和再灌注60min時(shí)實(shí)施迷走神經(jīng)刺激后處理均能夠明顯減小IRI所致的心肌梗死面積，并明顯降低血清cTnI和CK-MB濃度，其中以在再灌注60min實(shí)施迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護(hù)效果最差，以在心肌缺血15min時(shí)實(shí)施迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護(hù)效果最強(qiáng)，但是迷走神經(jīng)刺激后處理的心肌保護(hù)作用弱于缺血預(yù)處理。
　　 2．缺血預(yù)處理、缺血期和再灌注期不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行

45、迷走神經(jīng)刺激后處理均能明顯抑制再灌注期室性心律失常的發(fā)生；缺血15min時(shí)實(shí)施迷走神經(jīng)刺激后處理抑制再灌注期心律失常的作用較其他時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行迷走神經(jīng)刺激后處理更強(qiáng)。
　　 3．聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理能夠獲得更強(qiáng)的心肌保護(hù)作用，并且該心肌保護(hù)作用與缺血預(yù)處理的心肌保護(hù)作用幾無差異。
　　 4．缺血預(yù)處理、缺血期和再灌注期不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行迷走神經(jīng)刺激后處理、肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理、聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和

46、肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理均能通過抑制心肌IRI過程中的炎癥反應(yīng)而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。
　　 5．PI3K/Akt和JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因在轉(zhuǎn)錄后蛋白磷酸化水平的上調(diào)參與了迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理的心肌保護(hù)作用；而PI3K/Akt和JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因mRNA水平的上調(diào)則參與了聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理的心肌保護(hù)。同時(shí)，聯(lián)合應(yīng)用迷走神經(jīng)刺激后處理和肢體遠(yuǎn)隔缺血后處理的心肌保護(hù)