MKK4基因啟動子區(qū)多態(tài)性與結(jié)直腸癌發(fā)病的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:通過病例-對照研究法試討論絲裂原活化蛋白激酶激4（mitogen-activated protein kinase kinase4，MKK4）基因rs3826392和rs3809728兩位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide ploymorphisms，SNP）與結(jié)直腸癌(Colorectal Cancer CRC)發(fā)病風(fēng)險關(guān)聯(lián)性，為CRC高危人群的篩選和早期診斷提供理論依據(jù)。
　　方法:提取2012年2月

2、-2013年2月間就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院211例CRC患者（結(jié)腸癌68例，直腸癌143例）和132例健康人（對照組）外周靜脈血5ml，采用蛋白酶K消化—飽和氯化鈉鹽析法提取研究對象白細(xì)胞中的DNA，同時記錄病例的一般人口學(xué)特征、吸煙史、飲酒史及癌癥家族史等信息。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-連接酶特異檢測技術(shù)(Polymerase ChainReaction-ligase detection reaction，PCR-LDR)分析CRC患者和對

3、照組MKK4基因rs3826392T/G和rs3809728A/T位點(diǎn)多態(tài)性，比較不同等位基因及基因分型與CRC易感性的關(guān)系。
　　應(yīng)用SPSS13.0軟件對實(shí)驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，采用x2對對照組基因型頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡分析，采用x2檢驗及t檢驗對兩組病例的一般情況進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用x2檢驗對兩組之間的基因型和等位基因型分布分別進(jìn)行比較分析，采用EH軟件和2LD軟件對兩組病例進(jìn)行單體型頻率和連鎖不平衡分析。P

4、＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。應(yīng)用非條件Logistic回歸法計算表示相對風(fēng)險度的比值比(odds ratio，OR)及95％可信區(qū)間(95％confidence interval, CI)。
　　結(jié)果:
　　1對照組中-1304T＞G和-1044A＞T兩個位點(diǎn)的基因型頻率分布都符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)，即本實(shí)驗研究對象的選擇是隨機(jī)的。
　　2 MKK4基因-1304T＞G多態(tài)性與CRC發(fā)病風(fēng)險

5、的關(guān)聯(lián)性
　　MKK4基因-1304T＞G位點(diǎn)上等位基因T和G在結(jié)腸癌組中出現(xiàn)頻率為84.56和15.44％，直腸癌組中出現(xiàn)頻率為82.87％和17.13％，在對照組中為71.59％和28.41％，結(jié)腸癌組和直腸癌組分別與對照組相比，差異均具統(tǒng)計學(xué)意義（P為0.004和0.002）。與T相比G降低了結(jié)腸癌和直腸癌的發(fā)病風(fēng)險(OR=0.460,95％CI=0.269-0.787;OR=0.521,95％CI=0.347-0.783)

6、。結(jié)腸癌組中TT、TG、GG三種基因型出現(xiàn)的頻率分別72.06％、25.00％、2.94％，TG+GG出現(xiàn)頻率為27.94％;直腸癌組TT、TG、GG基因型出現(xiàn)頻率為67.83％、30.07％、2.10％，TG+GG為32.17％;對照組中為50.76％、41.67％，7.57％，TG+GG為49.24％;直腸癌組與對照組中TT基因型與TG、GG、TG+GG分別相比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P分別為0.017、0.012、0.004);結(jié)

7、腸癌組與對照組中TT與TG、GG、TG+GG相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P為0.009、0.158、0.004）。攜帶TG基因型的個體及TG+GG基因型總體的直腸癌的發(fā)病率明顯降低(TGvsTT:OR=0.540，95％CI=0.326-0.896;GG vs TT: OR=0.207,95％ CI=0.055-0.781;TG+GGvs TT: OR=0.489,95％ CI=0.300-0.797)。
　　3 MKK4基因-104

8、4A＞T位點(diǎn)多態(tài)性與CRC發(fā)病風(fēng)險的關(guān)聯(lián)性
　　MKK4基因1044A＞T位點(diǎn)上等位基因A和T在結(jié)腸癌組、直腸癌組中出現(xiàn)頻率為73.53％、26.47％、74.13％和25.87％，正常對照組中為78.03％和21.97％，結(jié)腸癌組和直腸癌組與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P為0.145和0.284);與A相比T與結(jié)腸癌和直腸癌的發(fā)病無相關(guān)性(OR=1.421，95％CI=0.876-2.305; OR=1.240，95％CI=0

9、.836-1.838)。在結(jié)腸癌組中AA、AT、TT三種基因型出現(xiàn)的頻率為:54.41％、38.24％、7.35％，直腸癌組中為:54.55％、38.24％、7.35％，對照組中為:61.36％、33.33％、5.31％。結(jié)腸癌組與對照組中AA基因型與AT、TT、AT+TT分別相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P為0.416、0.467、0.344）;直腸癌組與對照組中AA與AT、TT、AT+TT分別相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P為0.276、0

10、.583、0.253）。與AA基因型相比，攜帶AT、TT基因型的個體以及AT+TT基因型與結(jié)腸癌和直腸癌的發(fā)病率無相關(guān)性（ATvsAA: OR=1.564，95％CI=0.465-5.253;TTvsAA: OR=0.749,95％ CI=0.266-2.110; AT+TT vs AA: OR=1.331,95％ CI=0.736-2.405)。
　　4 MKK4 rs3826392T/G和rs3809728A/T兩SNP s位

11、點(diǎn)聯(lián)合分析
　　直腸癌組和對照組中MKK4基因rs3826392T/G與rs3809728A/T兩位點(diǎn)間存在連鎖不平衡現(xiàn)象(D'=0.213)。rs3826392T-rs3809728T單體型（OR=0.531，95％CI=0.119～0.723）與直腸癌發(fā)病存在相關(guān)性，其余單體型與直腸癌的發(fā)病風(fēng)險無關(guān)聯(lián)性。rs3826392T/G與rs3809728A/T兩位點(diǎn)間存在連鎖不平衡現(xiàn)象(D'=0.993)。四種單體型與結(jié)腸癌的發(fā)病無

12、關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)論:
　　1 MKK4基因-1304T＞G SNP與CRC的發(fā)病風(fēng)險存在相關(guān)性。攜帶TG基因型的個體以及TG+GG基因型總體的CRC的發(fā)病率明顯降低;相比T等位基因G降低了CRC的發(fā)病風(fēng)險。1044A＞T SNP可能與CRC的發(fā)病風(fēng)險無相關(guān)性。
　　2在直腸癌和對照組中MKK4基因rs3826392T/G與rs3809728A/T兩位點(diǎn)間存在連鎖不平衡現(xiàn)象(D'=0.213)。rs3826392T-rs