龍眼梅、美國(guó)黑李、臺(tái)灣甜桃及油（木奈）PGIP基因同源克隆.pdf

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文龍眼梅、美國(guó)黑李、臺(tái)灣甜桃及油（木奈）PGIP基因同源克隆姓名：朱春林申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：王家福潘東明20050601捅建農(nóng)林大學(xué)碩HOF究生論文摘要龍眼梅(PrunusmuNesiebetZucc‘longyanmei’)、莢國(guó)黑李(PsalicinaLindl)、臺(tái)灣甜桃(Ppersica(L)Batsch)和油木奈(只sa]icinaLindlVatcorda招JYZhangeta1)都

2、是薔薇科李屬的果樹，其果實(shí)既可鮮食又可加工成果干、果醬和蜜餞等，但都面臨一個(gè)問題，即采后的果實(shí)極易軟化，給貯運(yùn)和加]：帶來一定豳難。為解決這一問題，本研究擬通過同源克隆分離出具有抗軟化、抗病蟲害等功能的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因，以構(gòu)建植物表達(dá)載體，為培育抗病、耐貯新品種奠定基礎(chǔ)。本論文分別以龍眼梅、美國(guó)黑李、臺(tái)灣甜桃和油木搠基因組DNAIIcDNA為模板，根據(jù)馬哈利櫻桃和樹莓等PGIP基因序列分別設(shè)計(jì)兩對(duì)引物(A引物和B

3、引物)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，均得到這四種果樹的基因組DNA和cDNA的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因，其長(zhǎng)度分別如下：1)以四種植物的基因組DNA為模板用引物A作為擴(kuò)增的引物，均得到1192bp的序列；用引物B作為擴(kuò)增的引物，除臺(tái)灣甜桃得到953bp的序列外，其它均得到887bp序列；2)以四種植物的cDNA為模扳，用引物A作為擴(kuò)增的引物，均得到1045bp的序列：用引物B作為擴(kuò)增的引物，也得到806bp的序列。所得到的核苷酸序列

4、通過Blast分析，發(fā)現(xiàn)與馬哈利櫻桃、山杏、蘋果及梨等多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的相似性都較高，達(dá)70％一99％。將所得到的核營(yíng)酸序列翻譯成蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)用引物A作為擴(kuò)增的引物，進(jìn)行RTPCR得到的cDNA序列有一個(gè)完整的開放讀碼框(ORF)包含990個(gè)核苷酸，編碼330個(gè)氨基酸。通過PGIPDNA和PGIPcDNA序列比較及開放讀碼框分析，表明PGIP的所有DNA序列都包含2個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子，且內(nèi)含子都符合GT—AG的規(guī)律。關(guān)鍵詞