靶向NF-κB的圈套ODNs拮抗pMφ炎性介質(zhì)表達的實驗研究.pdf

1、目的:過度炎癥反應不僅在經(jīng)久難愈的慢性病中嚴重影響著人類的生活質(zhì)量,而其過度、失控性的全身炎癥反應所導致的廣泛而嚴重的組織結(jié)構(gòu)和生理功能的損害則直接危害著患者的生命,因此,除了原發(fā)病的治療以外,抗炎已成為臨床治療的基本策略.基于NF-κB是控制炎性因子基因表達的瓶頸,靶向NF-κB的抗炎治療成為國內(nèi)外眾多學者研究的熱點,圈套策略以其特異性及高效性有著其他策略無可比擬的優(yōu)勢,成為一種新型的基因治療方案.該實驗設計合成靶向NF-κB的啞鈴形

2、圈套ODNs,并驗證其抗炎作用.材料與方法:(1)以陽離子脂質(zhì)體為載體,將熒光標記的圈套ODNs(2.0μg/ml)轉(zhuǎn)染入純化的大鼠pMφ細胞,分別在30min、1h,3h,6h,9h,12h,18h,24h用熒光顯微鏡及激光共聚焦顯微鏡觀察熒光標記的圈套ODNs在細胞內(nèi)的動態(tài)變化.(2)用免疫組化法測大鼠pMφ細胞內(nèi)NF-κBp65在LPS刺激前及刺激后1h的變化.(3)用ELISA法及RT-PCR法測TNFα、IL-6、IL-10在

3、LPS刺激前及刺激后1、2、6、12、18、24h蛋白及mRNA水平的變化.(4)以陽離子脂質(zhì)體為載體,將圈套ODNs轉(zhuǎn)染大鼠pMφ細胞6h后用LPS(10μg/ml)刺激,以陽離子脂質(zhì)體、無關ODNs及單純LPS刺激組作對照,用ELISA法及RT-PCR法測圈套ODNs的不同濃度(2、4、8μg/ml)及不同時間(轉(zhuǎn)染后8、12、18h)對TNFα、IL-6、IL-10在蛋白及mRNA水平的影響.結(jié)論:(1)以陽離子脂質(zhì)體為載體的啞鈴