甜菜夜蛾對昆蟲生長調(diào)節(jié)劑敏感性測定及蛻皮激素受體cDNA克隆.pdf

1、甜菜夜蛾(Spodopteraexigua)屬鱗翅目、夜蛾科，是一種世界性分布的多食性重要農(nóng)業(yè)害蟲，主要危害蔬菜、棉花和觀賞性植物等。由于一直依靠化學(xué)防治，甜菜夜蛾已對多種類型農(nóng)藥產(chǎn)生抗性。昆蟲生長調(diào)節(jié)劑如蟲酰肼和幾丁質(zhì)合成抑制劑類殺蟲劑是近年來防治甜菜夜蛾的主要替代農(nóng)藥。這類殺蟲劑對鱗翅目害蟲都表現(xiàn)了高度的選擇性，對哺乳動物、鳥、魚類、其它脊椎動物和各種天敵無毒害作用，是害蟲綜合防治的重要優(yōu)選藥劑。害蟲對藥劑都存在產(chǎn)生抗藥性的風(fēng)險，為

2、了更有效地控制甜菜夜蛾的危害，掌握甜菜夜蛾對該類殺蟲劑的敏感性變化十分重要。 昆蟲的蛻皮和變態(tài)受蛻皮激素和保幼激素的嚴(yán)格控制。蛻皮激素通過與蛻皮激素受體(EcR)和超氣門蛋白(USP)形成的異源二聚體相互作用，起動包括轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)在內(nèi)的級聯(lián)反應(yīng)，從而引起昆蟲的蛻皮和變態(tài)。蟲酰胼是一種新合成的非甾醇蛻皮激素類殺蟲劑，跟蛻皮激素一樣作用于蛻皮激素受體，引起昆蟲早熟、致死性蛻皮；幾丁質(zhì)抑制劑類殺蟲劑則阻止幾丁質(zhì)的正常合成和轉(zhuǎn)運(yùn)，從而殺

3、死昆蟲，兩者的作用機(jī)理完全不同。 多種昆蟲蛻皮激素受體和超氣門蛋白基因的成功克隆為建立基于昆蟲蛻皮激素受體的高通量篩選技術(shù)奠定了基礎(chǔ)，并且可以通過多種途徑實(shí)現(xiàn)。在細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞系等中表達(dá)的EcR和USP蛋白，無論其粗提液，還是純化蛋白，均可用于活性篩選。本研究克隆甜菜夜蛾EcR和USP基因的目的就是為建立活性篩選技術(shù)作準(zhǔn)備。 本文研究內(nèi)容包括兩部分：甜菜夜蛾田間種群對昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類殺蟲劑的敏感性測定和甜菜夜蛾蛻皮

4、激素受體和超氣門蛋白基因cDNA片段的克隆。研究結(jié)果如下： 用浸葉法測定了7種昆蟲生長調(diào)節(jié)劑類殺蟲劑對山東甜菜夜蛾田間種群的敏感性。監(jiān)測結(jié)果表明：不同甜菜夜蛾品系或種群對供試藥劑的敏感性均存在明顯差異。甜菜夜蛾敏感品系對供試藥劑的敏感性倍數(shù)為甲氧酰肼∶氟啶脲∶蟲酰肼∶氟鈴脲∶氟蟲脲∶抑食肼∶除蟲脲為95.7∶40.1∶32.0∶13.4∶9.2∶3.1∶1；泰安范鎮(zhèn)、濰坊壽光及臨沂羅莊田間種群對供試藥劑的敏感性順序與甜菜夜蛾敏感

5、品系的敏感性順序基本一致。與敏感品系相比，3個甜菜夜蛾田間種群對同一種供試藥劑的敏感性均有不同程度的下降，其中對蟲酰肼和氟啶脲的敏感性下降倍數(shù)達(dá)到3倍以上，表現(xiàn)出低水平抗藥性。 本研究利用RT-PCR技術(shù)獲得了長度為495bp、480bp、471bp的3個EcR目的片段和595bp的USP目的片段，并且發(fā)現(xiàn)EcR基因表達(dá)過程中存在可變剪接現(xiàn)象。經(jīng)序列分析，克隆的EcR和USP目的片段對應(yīng)氨基酸序列與草地夜蛾相應(yīng)序列的同源性最高，