硫化氫對尿源性膿毒血癥急性腎損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：
　　建立尿源性膿毒血癥兔模型；觀察尿源性膿毒血癥腎組織內(nèi)源性H2S生成及其 H2S胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）的變化；應(yīng)用外源性硫化氫干預(yù)，探討外源性硫化氫在尿源性膿毒血癥急性腎損傷中的作用，了解H2S對尿源性膿毒血癥腎組織NF-κB表達(dá)的影響，從而揭示H2S在尿源性膿毒血癥腎損害中作用的可能機(jī)制。
　　方法：
　　1、家兔左側(cè)輸尿管內(nèi)注入大腸桿菌（ATCC25922），并結(jié)扎左側(cè)輸尿管遠(yuǎn)端，模擬上尿路急性梗阻

2、并感染所致膿毒血癥兔模型。
　　2、將30只健康雄性家兔隨機(jī)分成五組，每組6只。正常組（Control組）；假手術(shù)組（Sham組）；膿毒血癥組（sepsis組）；硫氫化鈉2.8umol/kg組（NaHS2.8umol/kg組）;硫氫化鈉8.4umol/kg組（NaHS8.4umol/kg組）。
　　3、每組動物按時間點(diǎn)又分為術(shù)前、術(shù)后24h、術(shù)后48h、術(shù)后72h4個時間觀測點(diǎn)。分別于每個時間點(diǎn)觀測肛溫(RT)、呼吸(RR)

3、、心率(HR)；
　　4、術(shù)前、術(shù)后24、48、72小時采血行外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析(WBC、中性粒細(xì)胞、PLT)、腎功能(Cr、BUN）、血清C反應(yīng)蛋白測定；
　　5、術(shù)前、術(shù)后24h、術(shù)后48h、術(shù)后72h4個時間點(diǎn)采血ELISA法測定血清TNF-α、IL-10含量；術(shù)后72h抽血血培養(yǎng)，血清鱟試驗(yàn)檢測；
　　6、術(shù)后72h各組腎組織行HE染色，光學(xué)顯微鏡及透射電子顯微鏡下觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。免疫組織化學(xué)法檢測各組腎組織

4、的TNF-α、IL-10、NF-κB的蛋白表達(dá)。Tunel法檢測腎組織細(xì)胞凋亡情況。
　　7、術(shù)后72h取腎組織檢測CSE的活性；抽血測H2S濃度。
　　結(jié)果：
　　1.家兔的一般情況：實(shí)驗(yàn)家兔sham組與control組體溫，呼吸頻率、心率變化不大（P＞0.05）；sepsis組明顯高于 control、sham組（P＜0.05）， NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組低于 sepsis組（

5、P＜0.05）， NaHS8.4umol/kg組低于sepsis組（P＜0.05）。
　　2.血液檢測指標(biāo)：各組術(shù)前血細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC、中性粒細(xì)胞、PLT）、CRP、Cr、Bun比較，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后血細(xì)胞計(jì)數(shù)WBC、中性粒細(xì)胞、PLT、CRP、Cr、Bun結(jié)果：實(shí)驗(yàn)家兔 control組與sham組比較，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；sepsis組明顯高于 control、sham組（P＜0.05），NaHS2.8umol

6、/kg組、NaHS8.4umol/kg組有下降趨勢，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且NaHS8.4umol/kg組低于NaHS2.8umol/kg組（P＜0.05）。
　　家兔血清 TNF-α、IL-10含量結(jié)果：control、sham組家兔血清 TNF-α， IL-10變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與control組比較，sepsis組明顯升高（P＜0.05）；NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組

7、與sepsis組比較，血清TNF-α明顯降低（P＜0.05），血清IL-10明顯升高（P＜0.05），NaHS8.4umol/kg組與NaHS2.8umol/kg組比較P＜0.05。
　　術(shù)后72小時采血做血培養(yǎng)及鱟試驗(yàn)：sham組與control組比較P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。sepsis組與control組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。鱟試驗(yàn)比血培養(yǎng)陽性率高（P=0.009）。
　　3.病理形態(tài)學(xué)：

8、>　　左腎肉眼觀：control組和sham組腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，sepsis組肉眼觀腎臟充血水腫，多發(fā)膿腫，腎盂腎盞擴(kuò)張積膿，粘膜充血、出血、水腫，髓質(zhì)可見黃色條紋狀病灶向皮質(zhì)伸展，腎周圍組織充血水腫，腎門淋巴結(jié)明顯腫大。HE染色光鏡：sepsis組腎盂、腎盞粘膜壞死、脫落大量中性粒細(xì)胞浸潤，腎小球、腎小囊變形，腎小管管腔變大，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤；電鏡：sepsis組腎小球足突細(xì)胞融合、消失，系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生，線粒體嵴排列紊亂，

9、空泡形成。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組上述變化有所減輕。
　　4.免疫組織化學(xué)法測腎組織 TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白：control組、sham組腎組織TNF-α、IL-10、NF-κB蛋白呈微弱表達(dá)；TNF-α、NF-κB蛋白在sepsis組表達(dá)最強(qiáng)，NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組減弱；IL-10蛋白在 NaHS2.8u

10、mol/kg組、NaHS8.4umol/kg組表達(dá)增強(qiáng)， NaHS8.4umol/kg組高于NaHS2.8umol/kg組（P＜0.05）。
　　5.Tunel法檢測腎組織細(xì)胞凋亡：control、sham組腎組織散在少量的腎小管上皮細(xì)胞凋亡。sepsis組成片的細(xì)胞凋亡及凋亡小體形成，與control組比較P=0.001。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組較sepsis組細(xì)胞凋亡明顯減輕（P<0.05

11、），NaHS8.4umol/kg組較NaHS2.8umol/kg組減輕更明顯（P=0.02）。
　　6.術(shù)后72小時血漿硫化氫濃度及腎組織CSE檢測：sepsis組血漿H2S含量及腎組織 CSE的活性與control組比較明顯降低(P<0.05)。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組血漿 H2S含量較 sepsis組明顯升高(P<0.05)。NaHS2.8umol/kg及NaHS8.4umol/kg組血漿

12、H2S含量與control組比較，P>0.05。NaHS2.8umol/kg組、NaHS8.4umol/kg組腎組織 CSE活性與sepsis組比較， P>0.05。Sepsis組 NaHS2.8umol/kg及 NaHS8.4umol/kg組腎組織 CSE活性與control組比較，P＜0.05。Control組、sham組、sepsis組血漿H2S含量與腎組織CSE活性呈正相關(guān)（R=0.979，p＜0.01），內(nèi)源性H2S的生成與C