玉米抗蟲相關(guān)突變體的篩選及基因的初步定位.pdf

1、蟲害是造成玉米(Zea mays L.)產(chǎn)量損失的重要因素之一。目前，在玉米抗蟲研究中，主要是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)外源導入Bt殺蟲蛋白基因來獲得抗蟲玉米。植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)為作物遺傳改良開辟了新途徑。同時，提高作物自身的抗蟲性也是作物遺傳改良的有效途徑之一，本研究探索性地從作物內(nèi)源抗蟲相關(guān)突變體的篩選中獲得理想突變體，以期為今后的作物遺傳育種和研究昆蟲抗性的分子機理創(chuàng)造有利條件。
　　本研究利用甲基磺酸乙酯(Ethyl Methane Su

2、lfonate，EMS)誘變的玉米鄭58突變體庫，約33000粒種子，進行抗蟲相關(guān)突變體的篩選。采用室內(nèi)生測與田間接蟲相結(jié)合的方法，進行了初步篩選和重復篩選。連續(xù)篩選3代，獲得食葉級別小于3級的10個抗性突變體。對其中的突變體M264-3的表型進行了鑒定，該突變體表現(xiàn)為株型矮小，高約0.8 m，節(jié)間距短小，葉深綠色，葉面光滑，無毛狀體，雄蕊分枝較少，且抗玉米螟效果明顯。從315對SSR引物中篩選出了24對擴增產(chǎn)物具有穩(wěn)定多態(tài)性的引物。通

3、過對F2群體中的200份抗蟲材料基因組DNA樣品的PCR擴增和聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，結(jié)果表明，基因初步定位在Bin5.05上，在umc1687和umc2086之間，距umc1687遺傳距離為2.6 cM，距umc2086遺傳距離為3.8 cM。
　　植物激素茉莉酸(Jasmonic acid，JA)作為一種可以長距離運動的信號分子在植物對昆蟲侵害的系統(tǒng)抗性中起核心調(diào)控作用。為了解析玉米JA信號途徑及抗蟲機理，本研究利用改進的玉米

4、突變體的篩選方法，篩選與JA信號途徑相關(guān)的突變體用于下一步的研究。將EMS誘變的玉米突變體庫6118份種子分別置于含有外源茉莉酸甲酯(Methyl Jasmonate，MeJA)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，通過觀察玉米根系的生長情況，確定對MeJA的不同耐受性。當MeJA終濃度為50μmol L-1時，初步篩選到對MeJA不敏感的Ⅰ級耐受性突變體有61株;當MeJA終濃度分別為100μmol L-1和200μmol L-1時進行驗證，得到的耐受性事