規(guī)模化羊場(chǎng)細(xì)菌病的流行病學(xué)調(diào)查及細(xì)菌性病原的分離鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化分析.pdf

1、近年來，養(yǎng)羊業(yè)迅速發(fā)展，集約化程度逐漸增高。然而，潛在的問題也初露端倪，疫病發(fā)生和傳播的頻率日益增加，疫病防控體系不完善，飼養(yǎng)管理水平落后，新型疾病層出不窮，導(dǎo)致細(xì)菌病始終難以得到有效的控制。
　　2014年，寧陽、汶上、萊蕪、滕州等多個(gè)規(guī)?；驁?chǎng)出現(xiàn)以呼吸道疾病為主的傳染性疫病，給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。此次疫病發(fā)病急，死亡率高，屠宰后多有明顯的肺炎病變，其致病原因一時(shí)難以斷定。為深入探明其致病因子，本研究對(duì)多個(gè)規(guī)?；驁?chǎng)進(jìn)行

2、流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)致病菌進(jìn)行分離鑒定和系統(tǒng)發(fā)育分析的研究。
　　本研究共分為三部分:
　　第一部分規(guī)?；驁?chǎng)疫病流行病學(xué)調(diào)查
　　本部分通過對(duì)規(guī)模化羊場(chǎng)進(jìn)行的系統(tǒng)流行病學(xué)調(diào)查，表明規(guī)模化羊場(chǎng)中傳染病感染率和死亡率都較普通病和寄生蟲病要高，傳染病發(fā)病率和死亡率分別為21.5％和4.5％，寄生蟲病發(fā)病率和死亡率分別為17.0％和2.5％，而普通病發(fā)病率和死亡率分別為10.0％和1.5％。羊場(chǎng)飼養(yǎng)管理水平低下，安全體系不健全是

3、導(dǎo)致傳染性疾病感染率升高的重要原因，說明在生產(chǎn)實(shí)踐中安全防治體系的形成和良好的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件非常重要。
　　第二部分規(guī)模化羊場(chǎng)細(xì)菌性病原的分離鑒定
　　本部分從采集的45頭份病料中主要分離出80株、5種病原菌。通過病原的分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化試驗(yàn)和16SrRNA序列測(cè)定發(fā)現(xiàn)病原菌主要為鏈球菌、葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸桿菌和溶血曼氏桿菌。通過動(dòng)物攻毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，接種12-24小時(shí)，各試驗(yàn)組小白鼠均有呼吸困難、活動(dòng)減少、被毛逆

4、立、采食減少等癥狀。其中，溶血曼氏桿菌組接種3天后開始陸續(xù)全部死亡，肺炎克雷伯菌組接種后第二天開始陸續(xù)死亡，兩組小白鼠死亡后剖檢均能看到肺部嚴(yán)重病變，大腸桿菌組和對(duì)照組小白鼠基本沒有死亡。溶血曼氏桿菌組、肺炎克雷伯菌組和葡萄球菌組小白鼠死亡率分別為100％、80％、60％，并且從死亡小白鼠體內(nèi)能分離到相對(duì)應(yīng)的病原菌，說明溶血曼氏桿菌、肺炎克雷伯菌和葡萄球菌為強(qiáng)致病菌。選用15種常用藥物，用紙片法對(duì)分離的幾種菌進(jìn)行敏感性試驗(yàn)，結(jié)果表明，多

5、數(shù)菌對(duì)氧氟沙星、呋喃妥因和頭孢類藥物敏感性較強(qiáng)。溶血曼氏桿菌對(duì)頭孢類、喹諾酮類和呋喃妥因等抗生素敏感性較強(qiáng)，對(duì)新霉素、卡那霉素、慶大霉素等氨基糖苷類抗生素產(chǎn)生了一定的耐藥性。肺炎克雷伯菌、鏈球菌、大腸桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果一致性較強(qiáng)，對(duì)呋喃妥因和慶大霉素不同程度敏感，對(duì)頭孢類和喹諾酮類藥物產(chǎn)生了較強(qiáng)的耐藥性。葡萄球菌對(duì)多數(shù)藥物比較敏感，臨床上選用藥物一定要注意效果和效益的結(jié)合。
　　第三部分導(dǎo)致肺炎的病原菌16SrRNA基因序列的測(cè)定與

6、系統(tǒng)發(fā)育分析
　　本部分將從病變肺臟中分離純化得到的菌株進(jìn)行16SrRNA基因序列測(cè)序，結(jié)果表明導(dǎo)致肺炎的病原菌為溶血曼氏桿菌。將該菌與GenBank中登錄的PA標(biāo)準(zhǔn)菌株通過DNAStar進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明分離到的溶血曼氏桿菌與美國(guó)、新疆、廣東等地的菌株同源性均在99.5％以上，說明目前地區(qū)之間和不同動(dòng)物源性的溶血曼氏桿菌，16SrRNA序列基因突變較少，這有利于規(guī)模化羊場(chǎng)運(yùn)用分子診斷學(xué)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行鑒定，采取科學(xué)防治手段對(duì)曼