KPNA2過表達促進rtA181T突變型乙肝病毒表面蛋白入核上調肝細胞c-Myc表達.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：406522512605南昌大學碩士研究生南昌大學碩士研究生學位論文學位論文KPNA2過表達促進過表達促進rtA181T突變型乙肝病毒表面蛋突變型乙肝病毒表面蛋白入核上調肝細胞白入核上調肝細胞cMyc表達表達karyopherinα2overexpressedfacilitatesnuclearimptofdsurfaceproteinofHBVtoupregulatetheexpressionofcMyc熊

2、弘熊弘培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學醫(yī)學院指導教師姓名、職稱：張芳林副教授申請學位的學科門類：醫(yī)學學科專業(yè)名稱：藥理學論文答辯日期：2015年5月答辯委員會主席：謝勇評閱人：方鋁劉建新2015年5月摘要II摘要摘要目的：目的：構建pKPNA2、pHBsAg、pHBsAgt三種質粒，通過分組分別轉染HepG2細胞、LO2細胞和293T細胞，探討KPNA2過表達在rtA181T型乙肝病毒表面蛋白上調cMyc表達過程中的作用。方法：方法：（1）

3、從GenBank中分別查找KPNA2、HBsAg的mRNA序列，利用primerpremier5.0軟件設計引物，應用RTPCR方法獲得目的片段，雙酶切后與真核表達質粒連接，從而構建成pKPNA2、pHBsAg質粒；（2）以構建好的pHBsAg質粒為模板，采用定點突變方法使其產生rtA181T突變以構建pHBsAgt質粒；（3）分組與轉染：①pHBsAg組、②pHBsAgt組、③pKPNA2組、④pKPNA2pHBsAg組、⑤pKPNA

4、2pHBsAgt組、⑥空載質粒組，共6組；分別轉染HepG2細胞、LO2細胞、293T細胞；（4）檢測：轉染48h后，采用Lig綠色熒光染料染色技術檢測KPNA2的細胞內分布；收集細胞總蛋白，westernblot檢測目的蛋白的表達并進行灰度值分析；收集細胞總RNA，RTFQPCR檢測目的基因mRNA的表達。結果：結果：（1）質粒雙酶切后用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶位置大小與目的片段一致；（2）pKPNA2、pHBsAg和pHBsAg

5、t重組質粒測序結果符合實驗要求；（3）三種質粒轉染HepG2細胞后，westernblot檢測結果顯示，pKPNA2pHBsAgt組和pHBsAgt組的cMyc表達都顯著高于其他4組（P＜0.05），說明rtA181T型乙肝病毒表面蛋白能夠上調cMyc表達；但pKPNA2pHBsAgt組與pHBsAgt組比較無明顯差異（P＞0.05）。（4）三種質粒轉染LO2細胞后，westernblot檢測結果顯示，pKPNA2pHBsAgt組和pH