全氟化碳對(duì)缺血再灌注誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞凋亡損傷的保護(hù)作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 探討凋亡在肺缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制,對(duì)全氟化碳的生物保護(hù)效應(yīng)及可能的機(jī)制有更深入的理解和闡釋,為臨床應(yīng)用全氟化碳治療肺缺血再灌注損傷提供較為客觀和更充分的理論依據(jù),以期有效改善肺移植手術(shù)中供體肺保護(hù),研究改良手術(shù)中供體肺保存液,為臨床肺移植手術(shù)和體外循環(huán)手術(shù)地應(yīng)用提供更大范圍的保障。
　　 方法:
　　 1.建立肺缺血再灌注的細(xì)胞模型。A549細(xì)胞在不同的時(shí)間(6h、12h)被保存于100％氧氣

2、及4℃的環(huán)境中,并加入低鉀右旋糖酐培養(yǎng)以模擬缺血的過程。繼而轉(zhuǎn)入放有10％胎牛血清的DMEM／F-12培養(yǎng)基的溫暖環(huán)境(37℃)中孵育2h以模擬再灌注情況。
　　 2.全氟化碳對(duì)缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡損傷的保護(hù)作用。應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率化及western blotting法檢測(cè)caspase-3蛋白的表達(dá)。將培養(yǎng)傳代的A549細(xì)胞分為四組:①對(duì)照組(control group)組:不作任何干預(yù)；②

3、IRI組:僅行缺血再灌注處理；③PFC(全氟辛烷)組:按30％體積比(PFC:培養(yǎng)液)在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入全氟辛烷,仍置于二氧化碳孵箱內(nèi)孵育；④PFC+IRI組:按30％體積比(全氟化碳:培養(yǎng)液及全氟化碳:保存液)在缺血再灌注階段加入全氟辛烷。FCM缺血階段時(shí)間取6h和12h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)的樣本。
　　 結(jié)果:
　　 1.細(xì)胞凋亡的FCM結(jié)果:肺缺血再灌注條件作用于A549細(xì)胞6h和12h后的早期細(xì)胞凋亡率分別為10.01％和

4、14.21％；晚期凋亡和壞死率分別為4.93％及5.49％；細(xì)胞存活率分別為84.61％與79.59％。即隨著時(shí)間的推移,細(xì)胞凋亡壞死率逐漸上升,而其細(xì)胞存活率逐漸下降。與對(duì)照組、全氟化碳組和全氟化碳+缺血再灌注組比較,缺血再灌注損傷作用于A549細(xì)胞后的6小時(shí),12小時(shí),其早期細(xì)胞的凋亡率、晚期細(xì)胞凋亡和壞死率明顯升高,存活率明顯下降,而且12小時(shí)明顯重于6小時(shí)；與對(duì)照組比較,全氟化碳兩個(gè)時(shí)相組的細(xì)胞凋亡率和存活率的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、,而且兩組之間差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對(duì)照組和全氟化碳組比較,全氟化碳+缺血再灌注組A549細(xì)胞的12小時(shí)早期凋亡率升高,存活率下降,即全氟化碳能明顯對(duì)抗缺血再灌注誘導(dǎo)的凋亡作用,但不能完全阻斷缺血再灌注對(duì)細(xì)胞的促凋亡效應(yīng)。
　　 2.蛋白免疫印跡法測(cè)得結(jié)果:缺血再灌注條件作用于A549細(xì)胞0.5,2,6,12h見caspase-3前體降解的17 kDa和11 kDa兩個(gè)活性片段；全氟化碳單獨(dú)作用于A549細(xì)胞,該蛋白的活性和水平

6、無明顯影響；在全氟化碳+缺血再灌注組,caspase-3蛋白的活性明顯下降,提示全氟化碳能夠顯著抑制缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的該蛋白的激活從而阻斷缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡效應(yīng)。
　　 結(jié)論:
　　 1.缺血再灌注條件下可以誘使A549細(xì)胞產(chǎn)生凋亡的損傷改變,這種誘導(dǎo)效果與時(shí)間成正比。
　　 2.全氟化碳單獨(dú)與A549細(xì)胞共同孵育,不誘使凋亡損傷效果地發(fā)生,當(dāng)在缺血再灌注條件下孵育A549細(xì)胞時(shí)加入全氟化碳,則可以明