低能量激光照射對子癇前期大鼠臟器組織形態(tài)學的影響.pdf

1、子癇前期（pre-eclampsia）和子癇（eclampsia）是妊娠期特有的疾病，發(fā)生在妊娠20周以后，表現(xiàn)為以高血壓、蛋白尿、水腫為主要特征的多器官功能損害的綜合征，嚴重威脅母嬰安全和健康，是產(chǎn)科死亡的重要原因之一，但其病因和發(fā)病機制至今尚不完全清楚，目前普遍認為特發(fā)性小動脈痙攣、血管內皮損傷是子癇和子癇前期發(fā)病機理的中心環(huán)節(jié)和基本特征。血管內皮細胞有重要的內分泌功能，通過自分泌釋放血管活性因子，如一氧化氮、內皮素、前列腺素等調節(jié)

2、血管舒縮，協(xié)調凝血與抗凝血間的平衡，參與組織與血液間物質的交換。當血管內皮細胞受細胞毒性物質和炎性介質，如腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）作用時，可引起血管內皮損傷，導致血管收縮因子和舒張因子比例失調，出現(xiàn)子癇前期和子癇一系列病理變化[1]。Faas等[2]最早發(fā)現(xiàn)低劑量內毒素（1.0μg/kg）可使孕鼠血壓逐漸升高，并能維持較高的血壓水平，產(chǎn)后血壓有下降趨勢，利用內毒素可以制備較理想

3、的子痛前期動物模型。有實驗報道內毒素可以促使單核細胞、巨噬細胞釋放TNF-α[3]，TNF-α可以刺激血管收縮的物質內皮素的釋放[4]。近年來，越來越多的研究[5-6]也表明內毒素（endotoxin，ET）刺激天然免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生的過度炎癥反應在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展和轉歸過程中具有重要作用。鑒于這些研究報道，我們在實驗中選擇應用低劑量的內毒素注射建立子癇前期的大鼠模型。 由于子癇前期和子癇的病因和發(fā)病機制沒有定論，所以在在子癇前

4、期和子癇的預防及治療方面雖然取得了一些進展，例如硫酸鎂的合理應用避免了中毒等副作用的發(fā)生及抗凝劑蛋白S、蛋白C的應用阻止了彌漫性血管內凝血（dessiminated intiavascular coagulation，DIC）的發(fā)生等，但是所有這些方法都是化學藥物治療，有其副作用，而且至今沒有提出新的有效的治療方法。近年來隨著對低能量激光生物作用的深入研究，發(fā)現(xiàn)低能量激光照射有降血粘度、降血脂、提高紅細胞攜氧能力，改善微循環(huán)，并具有活化

5、酶，提高免疫功能和抗氧化功能等作用，因此在臨床已用于腦梗死、高血壓、高血脂、冠心病、糖尿病、肺部疾患、偏頭痛、肝炎、類風濕關節(jié)炎、過敏性鼻炎等200多種疾病的治療，并且取得了可靠的療效[7]。鑒于低能量激光的以上治療作用，我們考慮子癇前期也有血壓升高及血液流變方面的改變，不知將低能量激光應用于子癇前期的治療是否同樣有效，目前國內外尚沒有文獻報道，這是本實驗研究的甘的所在。 目的: 1.為了更好地研究子癇前期的病因和發(fā)病機

6、制及新的預防和治療方法，需要穩(wěn)定的動物模型。從Faas等研究報道內毒素可以建立子癇前期大鼠模型以來，越來越多的研究[8-9]傾向于應用內毒素建立子癇前期動物模型。我們查閱文獻比較了各種方法的優(yōu)缺點以后，選擇應用低劑量的內毒素建立子癇前期大鼠模型，為下一步的治療研究奠定基礎。 2.鑒于低能量激光改善微循環(huán)、提高免疫功能和抗氧化能力等作用，在模型建立成功的基礎上，觀察低能量激光照射對子癇前期大鼠模型的治療作用及器官組織的病理改變。

7、 方法: 1.實驗動物 建立模型時40只雌性成年SD大鼠，體重200-250克，20只雄性成年SD大鼠，體重250-300克。隨機選擇20只雌性大鼠分別與20只雄性大鼠1：1共籠，次日清晨觀察陰栓若未見陰栓取陰道分泌物檢查，發(fā)現(xiàn)陰栓或精子為妊娠第0天，剩余20只雌性大鼠不作受孕處理為對照組。激光照射時選用SD孕鼠40只，受孕及飼養(yǎng)條件與建模時一樣。 2.動物分組及建立模型 將40只大鼠分為四組，分別

8、為：非孕注射生理鹽水組（nonpregnancy saline group，NS）、受孕注射生理鹽水組pregnancy saline group，PS）、非孕注射內毒素組（nonpregnancy endotoxin group，NE）和受孕注射內毒素組（pregnancy endotoxin group，PE），每組10只。PS組及PE組在妊娠14d沿鼠尾靜脈分別注射生理鹽水及內毒素（按1.0μg/kg注射，濃度0.1μg/ml），

9、NS組及NE組在同一天做對應處理。 3.子癇前期大鼠模型的標準 查閱目前的文獻報道，通常選用血壓、尿蛋白及仔鼠和胎盤情況來確定模型是否成功，但是各指標的具體數(shù)值還沒有公認的統(tǒng)一標準，因為選擇實驗的動物種類及測量儀器的不同，指標的基礎值也有很大的差異，均是通過設置對照組從而比較組間上述指標差異有統(tǒng)計學意義來定義子癇前期模型。 4.低能量激光照射治療 我們在模型成功的基礎上進一步運用激光照射并觀察其療效。40

10、只孕鼠平均分為四組：生理鹽水組、生理鹽水照射組、內毒素組和實驗組，內毒素組和實驗組妊娠14天與建模部分一樣注射內毒素，生理鹽水組和生理鹽水照射組注射生理鹽水，且實驗組和生理鹽水照射組妊娠16天開始激光照射，每天一次，一次30min，直到妊娠19天。 5.監(jiān)測指標 妊娠第13、15、17、19天測量鼠尾動脈收縮壓（systolic blood pressure，SBP），妊娠第11、15、19天收集24h尿液測量蛋白含量，

11、妊娠第7、20天尾靜脈抽血測血清中谷丙轉氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）及TNF-α值，妊娠第20天處死大鼠取肝、腎、肺、心、腦及孕鼠胎盤組織做病理切片，同時計數(shù)仔鼠數(shù)量和體重及胎盤濕重。 6.統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)均應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料用均數(shù)±標準差（X±S）表示，每組不同時間點比較采用重復測量方差分析（ANOVA for repeated measurement），分組因素的單獨效應

12、分析采用完全隨機設計資料的方差分析（One-way for ANOVA），多重比較滿足方差齊性檢驗時采用Bonferroni法，不滿足方差齊性檢驗時采用Dunnett'sT3法，仔鼠數(shù)量用非參數(shù)檢驗，以P≦0.05（雙側）表示統(tǒng)計學上有顯著性差異。 結論: 1.妊娠中期單次低劑量內毒素尾靜脈注射可以使孕鼠血壓升高、尿蛋白增加、肝腎生化指標升高及胎盤和仔鼠重量降低，同子癇前期的臨床癥狀有相似的表現(xiàn)，且與現(xiàn)有的確定子癇前期模

13、型的標準一致，可以認為建模成功。 2.在建立模型過程中，除了確定子癇前期的以上指標外，我們還發(fā)現(xiàn)了模型組血清TNF-α升高、肝、腎、肺、心及胎盤組織的形態(tài)學改變。 3.低能量激光心前區(qū)照射對子癇前期大鼠模型有治療效果，可拮抗內毒素引起的孕鼠血壓升高、尿蛋白增加、肝腎生化指標改變及仔鼠的生長發(fā)育遲緩，且未發(fā)現(xiàn)對生理鹽水對照組孕鼠及仔鼠的損害，證明了低能量激光照射做為物理療法的優(yōu)越性。 4.我們還觀察到低能量激光照射