重型腦創(chuàng)傷后細(xì)胞膜損傷及亞低溫對(duì)其影響的研究.pdf

1、[目的][第一部分]研究輕型顱腦創(chuàng)傷患者及重型顱腦創(chuàng)傷患者腦細(xì)胞間液甘油濃度的變化規(guī)律；研究亞低溫對(duì)重型腦創(chuàng)傷患者腦細(xì)胞間液甘油濃度的影響。 [第二部分]研究G1u的興奮性毒性與Gly升高的關(guān)系及腦創(chuàng)傷所伴隨的跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的變化，探討亞低溫治療對(duì)其的影響。 [第三部分]研究Glu對(duì)神經(jīng)元凋亡和細(xì)胞膜損傷的影響，探討亞低溫治療對(duì)其的影響。 [方法][第一部分]共37例患者，其中mTBI組(GCS13-14分)6

2、例、sTBI組(GCS3-8分)31例，重型組又隨機(jī)分為亞低溫組16例和常溫組15例。應(yīng)用微透析技術(shù)監(jiān)測(cè)腦細(xì)胞間液中Gly濃度，腦室內(nèi)法監(jiān)測(cè)患者的顱內(nèi)壓，激光多譜勒血流儀檢測(cè)患者局部腦血流的變化，統(tǒng)計(jì)患者的病理類型及預(yù)后等臨床資料，研究Gly與以上資料或指標(biāo)的關(guān)系，探討Gly濃度變化的臨床意義及亞低溫治療對(duì)其的影響。 [第二部分]266只SD大鼠分為四組。(1)假手術(shù)組，共48只，只切開頭皮，不行FPI損傷，收集透析液并在規(guī)定時(shí)

3、間處死。(2)常溫組，共84只，F(xiàn)PI損傷后未死亡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行微透析監(jiān)測(cè)并處死。(3)亞低溫組，共86只，F(xiàn)PI損傷后，行冰毯降溫，使肛溫降至32℃，維持6h，然后自然復(fù)溫。(4)亞低溫假手術(shù)組，共48只，在假手術(shù)后使肛溫降至32℃。以上各組分別監(jiān)測(cè)傷后0.5h、6h、12h、24h、48h、72h或?qū)?yīng)時(shí)間的Gly濃度，取半影區(qū)或相應(yīng)位置的腦組織，RT-PCR和Westernblot檢測(cè)標(biāo)本中mGluR1，5和PLC的表達(dá)。 [

4、第三部分]神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化6天的神經(jīng)元分為37℃陽(yáng)性對(duì)照組與29℃，31℃，33℃，35℃實(shí)驗(yàn)組，分別加入50μmol/L的谷氨酸，37℃陰性對(duì)照組不加入谷氨酸，三組均為六瓶+六孔。2天后分別評(píng)價(jià)上清和神經(jīng)元的細(xì)胞毒性(乳酸脫氫酶法)，免疫組化觀察Bax表達(dá)的變化。每個(gè)培養(yǎng)皿取上清，測(cè)定甘油含量。 [結(jié)果][第一部分]1、mTBI組患者腦細(xì)胞間液Gly為43.95±10.89μmol/L且維持在穩(wěn)定水平；2、NT組半影區(qū)Gly

5、、CCP及CBF與預(yù)后的關(guān)系：與中殘或重殘組比較，植物生存或死亡組患者pGly顯著增高而CCP及CBF顯著降低(P＜0.05)；與恢復(fù)良好組比較，中殘或重殘組pGly顯著增高而CCP及CBF顯著降低(P＜0.05)；3、NT組ICP、CCP、CBF對(duì)pGly的影響：ICP＞15mmHg組、CCP＜70mmHg組及CBF＜50AU分別比ICP＜15mmHg組、CCP＞70mmHg及CBF50-150AU組Gly濃度顯著增高(P＜0.01)

6、；4、NT組病理類型和pGly濃度的關(guān)系：彌漫性軸索損傷、硬膜外血腫、硬膜下血腫與腦挫裂傷或腦實(shí)質(zhì)內(nèi)血腫患者腦細(xì)胞間液Gly有顯著差異；5、NT組pGly的水平持續(xù)升高達(dá)3天，在傷后第三天時(shí)最高達(dá)到259.89μmol/L，每例患者每天都可監(jiān)測(cè)到pGly水平升高，但第三天監(jiān)測(cè)到的峰值最多；6、NT組nGly比Gly濃度正常值顯著增高；7、NT組病損周邊區(qū)比“正常區(qū)”的Gly明顯增高；8、亞低溫12h后HT組比NT組pGly有明顯降低并維

7、持到復(fù)溫后；9、亞低溫治療期間nGly無(wú)顯著變化且維持在穩(wěn)定水平；10、亞低溫12h“半暗區(qū)”腦ECF的Gly濃度與“正常區(qū)”比較無(wú)顯著差異。 [第二部分]1、腦創(chuàng)傷后不同時(shí)間腦細(xì)胞間Glu和Gly的變化：創(chuàng)傷后0.5h，HT及NT組均比假手術(shù)組和亞低溫假手術(shù)組明顯升高；創(chuàng)傷后6h，假手術(shù)組Glu濃度低于HT組，HT組低于NT組，假手術(shù)組和亞低溫假手術(shù)組無(wú)顯著差異；創(chuàng)傷后12h，HT組Glu和Gly濃度恢復(fù)到與假手術(shù)組相同水平，

8、而NT組比HT組和假手術(shù)組顯著增高，但亞低溫假手術(shù)組顯著低于亞低溫組；創(chuàng)傷后24、48、72h，NT組比其它三組顯著增高；2、腦創(chuàng)傷后不同時(shí)間腦細(xì)胞間液mGluR1變化：創(chuàng)傷后0.5h，NT組及假手術(shù)組均比HT組和亞低溫假手術(shù)組明顯升高；創(chuàng)傷后6h，NT組比其它三組顯著增高；創(chuàng)傷后12h，NT組mGluR1表達(dá)最高，其次為HT及假手術(shù)組，亞低溫假手術(shù)組表達(dá)最低；創(chuàng)傷后24、48、72h四組間mGluR1無(wú)顯著差異；3、腦創(chuàng)傷后不同時(shí)間腦

9、細(xì)胞間mGluR5mRNA變化：創(chuàng)傷后0.5h四組間mGluR5無(wú)顯著差異；創(chuàng)傷后6h，HT及亞低溫假手術(shù)組比NT組及假手術(shù)組明顯降低；創(chuàng)傷后12h，NT組比其它三組顯著增高；創(chuàng)傷后24、48、78h四組間mGluR5無(wú)顯著差異；4、腦創(chuàng)傷后不同時(shí)間腦細(xì)胞間PLC的變化：創(chuàng)傷后0.5h四組間PLC無(wú)顯著差異；創(chuàng)傷后6和72h，NT組比其它三組顯著增高；創(chuàng)傷后12、24、48h四組間PLC無(wú)顯著差異。 [第三部分]1、29℃亞低溫

10、組：Bax表達(dá)29℃亞低溫治療組最高，其次為37℃陽(yáng)性組，而37℃陰性組最低；上清LDH活力和Gly均為29℃組最高，其次為37℃陽(yáng)性組，37℃陰性組最低；細(xì)胞中LDH活力為29℃組最低，其次為37℃陽(yáng)性組，37℃陰性組最高。2、31℃、33℃和35℃實(shí)驗(yàn)組：上清LDH活力、Gly和神經(jīng)元Bax表達(dá)均為37℃陽(yáng)性組最高，其次為31℃組、33℃和35℃實(shí)驗(yàn)組，37℃陰性組最低；細(xì)胞中LDH活力為37℃陽(yáng)性組最低，其次為31℃組，37℃陰性

11、組最高。 [結(jié)論][第一部分]1、輕型患者腦細(xì)胞間液Gly的濃度最接近該部位的正常值，這組臨界值對(duì)進(jìn)一步的科研及臨床工作有重要的參考作用；2、pGly濃度與原發(fā)性腦創(chuàng)傷的病理類型、繼發(fā)性腦損傷的嚴(yán)重程度及重型腦創(chuàng)傷患者的預(yù)后有關(guān)，是細(xì)胞膜功能紊亂、降解和腦缺血的可靠指標(biāo)；3、亞低溫通過(guò)改善半影區(qū)細(xì)胞膜的代謝和功能，維持細(xì)胞膜的穩(wěn)定性而發(fā)揮腦保護(hù)作用。 [第二部分]1、腦創(chuàng)傷后腦細(xì)胞間液中Gly與Glu、mGluR1，5和